疑难血型鉴定与临床输血

疑难血型鉴定与临床输血一ABO血型ABO血型鉴定是输血前最重要的血清学检测，必须保证ABO血型鉴定系统的安全性和敏感性。应尽可能运用全自动检测系统，以减少结果解释和抄录错误的风险。输血科（血库）必须建立试管法。ABO血型正反定型不符及原因解决正反定型不符的程序ABO亚型ABO血型定型常见问题的解决方法ABO血型的定型

ABO定型必须包括正定型和反定型，正反定型一致才能确定血型。正定型：用单克隆抗-A和抗-B试剂检测红细胞上有无A、B抗原。反定型：用A型和B型试剂红细胞检测血清中有无抗-A、抗-B。

方法纸板（玻片）法（不用于受血者）微孔板法微柱凝集法试管法ABO血型检测：正反定型不符ABO正反定型相符：正反定型相符且正定型反应强度4+；反定型反应强度≥2+。ABO正反定型不符的定义和范围ABO正反定型不符（多或少抗原、抗体）。ABO正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜4+，反定型反应强度＜2+。正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差别＞2+以上。正反定型不符ABO正反定型不符（多或少抗原、抗体）正反定型不符ABO正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜4+，反定型反应强度＜2+。正反定型不符正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差别＞2+以上正反定型不符的原因实验技术及管理因素生理性因素疾病影响临床治疗的影响正反定型不符：1.实验技术及管理原因标本问题：采样不规范（静脉输液处采样、非抗凝管）、标本接收不规范（溶血、乳糜、变质标本）等。试验技术人员的操作问题：技术错误、判读错误（溶血、弱凝集、混合外观）、记录错误等。试剂质量问题：过期失效、被污染及使用未经确认的试剂等。仪器设备问题：设备故障及使用未经确认的设备等。正反定型不符：2.生理性因素年龄：老年人（抗体减弱）、4-6个月内的婴儿（抗原或抗体发育不成熟）。（美国AABB规定婴儿4个月后可做反定型。）ABO亚型：抗原减弱、血清中出现意外抗体（抗-A1、抗-B）。意外抗体：受检者血清中存在室温反应性IgM类同种抗体（MN、Lewis、P血型系统同种抗体）、冷凝集素，这些意外抗体能与试剂红细胞发生凝集，造成反定型异常。“先天性”无ABO抗体前带现象正反定型不符：生理性因素嵌合体血型（卡米拉，chimerism）：这种血型的人体内有两群血型红细胞，正定型时会出现“混合外观”凝集现象。型物质干扰：有些人血清中ABO血型物质高，未经洗涤红细胞会干扰正定型。试剂红细胞保护剂因素：有些人血清中有针对试剂红细胞保护剂成分的抗体，会导致反定型发生与ABO血型抗体无关的红细胞凝集反应。正反定型不符：3、疾病的影响白血病、恶性肿瘤：造成ABH抗原减弱甚至消失、ABO抗体减弱。低丙种球蛋白血症：因免疫球蛋白水平低，反定型时不凝集或弱凝集。多发性骨髓瘤等：多发性骨髓瘤患者血浆中的M蛋白会干扰反定型。肝脏疾病、结核病等：导致血浆白蛋白/球蛋白比例倒置，干扰反定型。正反定型不符：疾病的影响自身抗体：自身免疫性溶血性贫血、淋巴瘤、胶原疾病（红斑狼疮）等患者的自身抗体会干扰反定型。红细胞自身凝集：患者体内存在高效价冷凝集素使红细胞发生自发的凝集，会干扰正定型。红细胞致敏：被免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集。正反定型不符：疾病的影响急性大量失血：外周血网织红细胞增多，并出现有核红细胞，使正定型反应减弱。血型型物质过高：某些疾病（如腹腔癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗-A或抗-B抗体，引起正定型为弱阳性。大量胎母出血（FMH）等。正反定型不符：4、临床治疗影响近期输血：患者近期输入异型红细胞，使正定型出现“混合外观”现象，输入异型的血浆会干扰反定型。胎儿宫内输血造血干细胞移植：ABO不同型造血干细胞移植，可影响正、反定型。免疫抑制治疗：可能会导致抗体减弱。大量输液：抗体被稀释，反定型减弱。正反定型不符：临床治疗影响单采血浆或血浆置换治疗：血浆稀释会造成反定型减弱，如果使用大量的非同型的血浆做置换治疗，输入的血浆会造成反定型异常。静脉输入高分子药物：如甘露醇、右旋糖苷、羟乙基淀粉等会干扰反定型。静脉注射丙种球蛋白：丙球中的ABO血型抗体干扰反定型。过客淋巴细胞综合征：ABO不同型的器官移植。正反定型不符结果分类：红细胞ABO亚型血液病致抗原减弱血型型物质过高急性大量失血4-6个月内婴儿近期输（异型）血造血干细胞移植（异型）红细胞自身凝集直抗强阳性红细胞红细胞血型嵌合体胎母出血等正反定型不符结果分类：血浆年龄（4-6个月内婴儿、老年人）。白血病、淋巴瘤、使用免疫抑制剂、先天丙种球蛋白缺乏、免疫缺陷的患者抗体减弱。先天无ABO抗体。前带现象。单采血浆或血浆置换治疗。大量输液。意外抗体。ABO不同型造血干细胞移植患者。静脉丙球。与试剂红细胞的非特异性反应、缗钱状红细胞非特异性凝集等。正反定型不符处理的程序当正反定型结果不符时，必须如实记录实验结果。血型报告可以延迟发放，直到这个问题得到解决。不能因为血型定型困难而拒绝为需要输血的患者输血。可选择O型红细胞做交叉配血，选择输注配血相合的洗涤O型红细胞细胞。注意：有些ABO正反定型不符的样本，其反定型和O细胞反应，这时盲目输注O细胞是危险的。血样中存在冷凝集素（抗HI）；孟买、类孟买血型（抗-H、抗-HI）。输注O型血之前，需要排除或解决以上问题。正反定型不符处理的程序排除仪器设备、试剂、标本及操作失误。查阅、询问病历资料，设计针对性试验。选择试管法做正反定型。ABO血型鉴定的特殊技术。吸收放散试验唾液型物质检测毛细管离心分离自身和输入红细胞DTT处理自身凝集红细胞分子生物学检测（血型基因）询问、查阅病历试管法正反定型血型鉴定特殊技术观察↓假设↓验证↓解决

一、询问、查阅病历资料

（临床输血申请单）

患者的年龄患者的临床诊断患者的近期输血史患者的近期用药史、治疗史患者是否进行了造血干细胞移植患者以前的血型

二、试管法

试管法：血型定型金标准，常用于疑难血型鉴定。可以反复离心看结果。可以延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集素的干扰。可以观察红细胞混合外观现象。可以观察红细胞溶血现象。试管法正反定型抗-A1抗-A1

用于检测A亚型。

注意：抗-A1反应阴性A亚型A型抗原减弱A型新生儿与抗A1反应阴性或弱反应抗-H抗-H

用于检测ABO亚型及孟买、类孟买型。

(A或B亚型H抗原增强，孟买、类孟买H抗原阴性。)

注意：血液病致A、B抗原减弱，H抗原可能出现增强或减弱。必须做对照试验。抗-AB抗-AB用于鉴定Ax和Bx，抗-AB与Ax、Bx抗原会产生较强反应。反定型试剂O细胞用于确认反定型的有效性,可以发现ABO系统以外室温反应性抗体干扰ABO反定型。自身对照用于检测是否存在自身冷抗体干扰ABO反定型，确认正反定型的有效性。A2细胞用于A亚型的鉴定（A亚型产生抗-A1抗体）。注意：反定型抗-A减弱，可能出现与A1细胞阳性反应，与A2细胞反应阴性。规范的摇试管方法试管法凝集强度判读反应强度红细胞凝集情况4+一个结实的大凝块，背景清楚3+几个大凝块，背景清楚2+中等大小凝块，背景清楚1+小凝块，背景较混浊w+有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝集细胞0没有可见的细胞凝集，呈均匀的红细胞悬液pH部分溶血：残留部分红细胞，液体出现透明澄清红色H完全溶血：未见红细胞，液体出现透明澄清红色mf混合外观凝集，部分红细胞形成较大凝块，周围是游离的红细胞试管法凝集强度

为什么要使用标准凝集强度？操作标准化。实验结果有回溯性。保证不同实验室、不同工作人员对同一标本实验结果的一致性。三、ABO血型鉴定的特殊技术吸收放散试验唾液型物质检测毛细管离心分离自身和输入红细胞DTT处理自身凝集红细胞分子生物学检测（血型基因）吸收放散试验

表达弱A和弱B抗原的红细胞直接离心试验中不被抗-A、抗-B所凝集，但可以吸收相应的抗体。可以通过将其吸收的抗体放散出来，并检测放散出来的抗体，以证明弱A或弱B抗原的存在。吸收用RBC：盐水洗涤3次的待检压积RBC1ml。吸收用的抗血清：人源抗-A、抗-B。将压积RBC和抗血清按等体积比例混合，在4℃孵育至少1小时，期间每隔15分钟混匀一次。用冷盐水洗涤孵育后的细胞4-6次，得到压积RBC，加入等量盐水。56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。用试剂红细胞检测放散液（人源抗体要做盐水介质和IAT）。注意：一定要用O型红细胞做阴性对照。唾液型物质检测

大约80%的个体具有Se基因，它控制着水溶性的ABH抗原的分泌。通过检测分泌型人唾液中的ABH物质可作血型鉴定。用于：ABO亚型、血液病致抗原减弱、近期输血史等。型物质准备：1-2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。抗体的修正：抗体用盐水稀释至与相应红细胞产生4+的最高稀释度。中和：将唾液与修正的抗体等体积混合,室温放置30分钟。检测：用Ac检测中和后的抗-A,Bc检测中和后的抗-B，Oc检测中和后的抗-H。结果判断：通过ABH抗体的抑制试验证明ABH抗原存在于唾液中。毛细管离心分离自身和输入红细胞

新生成的自体红细胞比重比输入的红细胞小，可以通过离心方法与输入的红细胞分离开。

注意：

至少须输血后3天的血样。用盐水洗涤红细胞3次，在保留白膜层的情况下尽可能去掉上清，混匀。在微量红细胞比积管中加入洗涤红细胞，封死管底。用专用离心机离心15min。在距红细胞柱顶上5mm处切开微量红细胞比积管，用注射器将管中的红细胞冲到试管中。将分离出的红细胞洗涤，用盐水配成2-4%红细胞悬液备用。毛细管离心分离自身和输入红细胞巯基试剂消除自身凝集红细胞巯基试剂：DTT、2-Me巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝集的红细胞。用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成2-4%的悬液备用。DTT处理自凝红细胞分子生物学检测血型

PCR技术问世后，分子生物学技术用于红细胞血型基因的的检测，使红细胞血型定型技术飞跃到了一个崭新的阶段。可用于：ABO疑难血型的鉴定与输血：亚型？疾病致抗原减弱？有近期输血史等。发现ABO血型新等位基因：cisAB、B(A)RhD变异型的鉴定与输血：弱D、部分D新生儿溶血病的辅助诊断法医的个体识别等红细胞血型的基因分型ABO亚型ABO亚型是指红细胞上A、B抗原数量的减少和抗原表位的异常。亚型必须具有遗传基础，有明确的血清学特点。因年龄、疾病等不可遗传的因素造成的血型改变不是亚型。虽然有基因改变，但不影响血清学特点的ABO血型不是亚型。ABO亚型的发现—正反定型不符

非新生儿、未患使抗原、抗体减弱的疾病正定凝集强度应4+，反定凝集强度≥

2+。正定凝集强度弱于4+提示可能是亚型。注意：凝集强度和凝集状态（正常凝集、混合外观）反定凝集强度<2+，或仅存在冷反应性意外抗-A、抗-B提示可能是亚型。注意：靠反定预测亚型不如正定可靠！A亚型ABO亚型A亚型：A2、A3、Aint、Ax、Ay、Am、Aend、Ael等。B亚型：B3、Bx、Bm、Bend、Bel等。A亚B、AB亚

Aw、BwB（A）cisAB孟买、类孟买（Hh血型系统）/projects/gv/rbc/xslcgi.fcgi?cmd=bgmut/homeABO定型常见问题的解决方法

ABO亚型正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身对照吸收放散试验唾液型物质检测血型基因检测有条件者可作家系调查ABO定型常见问题的解决方法

A、B抗原减弱延长反应时间、抗原亲和力检测（与A3、B3区别）吸收放散唾液型物质检测既往血型调查血型基因检测临床追踪：一般病情缓解后血型抗原恢复ABO定型常见问题的解决方法

抗体减弱延长反应时间4℃孵育（5-10分钟）增加血浆量（4滴）血型基因检测既往血型调查ABO定型常见问题的解决方法

冷自身抗体用37℃温盐水洗涤红细胞、45℃热放散3分钟。巯基试剂(DTT、2-Me)处理红细胞。将血浆和红细胞分别在37℃孵育5-10分钟后再混合。自身吸收、O型红细胞吸收、兔红细胞基质吸收去除血浆中的冷自身抗体。ABO定型常见问题的解决方法

室温反应的同种抗体用谱细胞做抗体鉴定。选择没有相应抗原的A、B细胞做反定型。常见抗体：MN、Lewis、P血型系统抗体。

没有谱细胞用有相应抗原的A、B红细胞吸收血浆中的同种抗体，用吸收后血浆做反定型。常见的影响反定型的同种抗体ABO定型常见问题的解决方法混合视野凝集ABO亚型（A3B3AendBend）。血液病致抗原减弱。ABO不同型输血（非O型人近期输入O型血)：询问近期输血史、毛细管离心分离自身红细胞等。ABO不同型干细胞移植。胎母出血嵌合体血型ABO定型常见问题的解决方法缗钱状凝集真凝集凝集+缗钱鍲钱缗钱状凝集缗钱状凝集：盐水替代试验缗钱盐水替代：2滴盐水替代血浆实例分析询问、查阅病历试管法正反定型血型鉴定特殊技术观察↓假设↓验证↓解决实例分析1抗-A抗-B抗-AB抗-HACBcOc自身IS000W+04+00RT15’0004+04+00病例资料：男，16Y，脊柱侧弯手术。试管法吸收放散试验：证实患者红细胞有弱A抗原结论：A亚型（Am）实例分析2抗-A抗-B抗-AB抗-HACBcOc自身IS000W+04+00RT15’0004+W+4+00病例资料：女，47Y，子宫肌瘤，贫血，无输血史。试管法吸收放散试验：证实患者红细胞有弱A抗原结论：A亚型（Ael）实例分析3抗-A抗-B抗-AB抗-HACBcOc自身IS000004+00RT15’w+0W+0W+4+1+0病例资料：女，29Y，孕12w。试管法Lewis血型：Le(a-b+)唾液型物质检测：证实存在A、H型物质。结论：类孟买AABO血型基因检测：A实例分析4病例资料：女，21Y，AML，无近期输血史。试管法抗原亲和力试验结论：A型（血液病致抗原减弱）ABO血型基因检测：A型抗-A抗-B抗-A1抗-AB抗-HACBcOc自身IS0000004+00RT15’2+mf凝集细胞少0±2+mf凝集细胞少1+04+00实例分析5抗-A抗-B抗-AB抗-HACBcOc自身IS000W+04+00RT15’0004+04+00病例资料：男，26Y，1年前做干细胞移植，患者原A型，供者O型。试管法结论：O型特殊情况输血输血科必须建立文件化的特殊情况输血程序

1.患者的ABO血型无法确定的输血选择O型洗涤红细胞紧急输血可以选择O型悬浮红细胞AB型血浆、血小板特殊情况输血2.ABO亚型的输血原则：选择O型洗涤红细胞、根据反定型结果或实际交叉配血结果。A亚型、B亚型选择O型洗涤红细胞；紧急时可以选择O型悬浮红细胞A亚B可选择B、O洗涤红细胞；紧急时可以选择B、O型悬浮红细胞。AB亚可选择A、O洗涤红细胞；紧急时可以选择A、O型悬浮红细胞。如果患者血浆中没有抗-A1、抗-B紧急输血也可以选择配血相合的A、B、AB型悬浮红细胞A、B、AB亚型分别选择A、B、AB血浆和血小板类孟买A(或B)型选择A(或B)型红细胞,血浆。ABO亚型输血（探讨）

配合性输注A2：无抗A1，可以选择A型红细胞；产生抗A1，输O型洗涤红细胞。A3（B3）：很少产生抗A1（B），可以选择A（B）型红细胞；已产生抗体的选择O型洗涤红细胞。Ax（Bx）：反定型有抗体，选择O型洗涤红细胞。Am（Bm）:按O型输血。Ael（Bel）：按O型输血。B（A）：配血相合的B型红细胞。二、RhD血型RhD血型定型的方法RhD抗原分类RhD变异型及RhD阴性确认试验RhD血型检测可能出现的问题RhD血型Rh血型系统中主要抗原有5种：D、C、c、E、e。在临床输血中一般只检测D抗原

RhD阳性：红细胞上有D抗原

RhD阴性：红细胞上无D抗原凡被检红细胞与抗-D试剂凝集者为RhD阳性，不凝集者为RhD阴性方法

纸片（玻片）法（受血者不用）微孔板法微柱凝集法试管法RhD抗原分类D抗原的分类：根据D抗原的数量和表位不同，将D抗原分为以下3类：正常的D：与IgM抗-D≥3+反应强度。D变异型：与IgM抗-D弱反应或阴性，需IgG抗-DIAT才能检出。1.弱D（weakD）2.部分D（partialＤ）DEL型：只有吸收放散才能检出D。IgM抗-D试剂对受血者只需用IgM抗-D试剂检测红细胞上是否有D抗原。以输血为目的常规检测没有必要使