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文档简介

核酸适配体在临床输血中的研究

主要内容

一、核酸适配体筛选基本原理

二、以抗D为靶分子的筛选

第一部分

核酸适配体筛选基本原理

SELEX(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment：组合化学技术)。

EllingtonAD,SxostakJW.InvitroselectionofRNAmoleculesthatbindspecificligands.Nature,1990,346(6287):818-822.

文库种类：随机RNA文库

随机单链DNA文库

化学修饰的文库

用途：与蛋白的结合力高于抗原抗

体之结合。用于诊断、治

疗等。需要忘掉的东西

1、碱基互补

2、PCR扩增单一序列产物需要建立的东西1、玩过积木拼图吗？2、扩增产物是一个库

VS

几个基本概念

1、单链核酸可形成立体结构

AGAGACGGACACAGGATGAGCGGTGCAGGGGGGGCGGAGAAGAGGTTGAGGGGAGCGGGTCCTTCCCCAAGACAGCATCCA

2、文库容量：

固定区（N随机序列）固定区至少>1013筛选的基础---结构互补特异性与亲和力的保证筛选压力（负向筛选、文库投入量等）筛选轮数最终达要达到的目的Antibodycoveredbyaptamer,andthereactionbetweenantibodyandantigenwasblockedScreeningProcess文库是怎样制成的？PCR扩增1、不对称PCR+凝胶回收2、对称PCR+链霉亲和素磁珠+碱处理+凝胶回收3、对称PCR+酶切+凝胶回收ssDNA文库的制备设计思路特点

1、简便

2、产量高

3、质量好

第二部分

以抗D为靶分子的筛选

首先要确定的几个关键因素

1、Anti-D（IgG)的固定

2、负向靶分子的选择

3、筛选压力

多轮筛选后，对筛选文库进行二代测序有效性验证

1、是否具体阻断抗原抗体反应的能力

2、亲和力如何

3、特异性如何以抗D为靶分子筛出的ssDNA-Aptamer可完全中和抗体将抗体标在微球上，以起到指示作用，便于直观地观察。10×40倍拓展：结构研究、分子间相互作用，等

实际应用应用一：抗体检测：简单情况--是否存在同种抗体

复杂情况--自身抗体存在掩盖同种抗体检测方法：

酶联法

流式法应用二：中和体内抗体，输注阳性血液（路漫漫～～）

适配体筛选遇到的困难

筛选依然是

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