实验二、培养基的制备课件

实验二培养基的制备

目的要求：1、了解培养基配制的基本原则2、熟悉常用培养基的制备3、学会培养基酸碱度测定

培养基配制的原则：

1．培养基必须含有细菌生长所需要的营养，并且根据比例准确称取，并在制备过程中，要保持原有比例。2．根据所培养微生物的需要较正好pH值细菌为7.2-7.4，真菌为6.0-6.5。3．培养基所用的容器，一定要洗干净，不能含有过酸或过碱的物质或抑制其他细菌生长的物质（如药物）。4．培养基制完后，马上要高压灭菌，15磅，20-25分钟（普通培养基）或10磅10分钟（生化培养基），太低温度达不到灭菌目的，太高破坏营养成分。5、所制备的培养基，必须透明，清亮无杂质以便观察细菌的生长情况和代谢活动中的变化情况。6．培养基制好后，随机抽几支，放入温箱37℃，培养24h，无杂菌生长方能使用，鲜血琼脂培养放32-35℃培养24h，以防变黑。

二．培养基的原料及其作用

1．水制备培养基应为蒸馏水；2．蛋白胨，为蛋白质水解物，主要是供给微生物所需要的氮素或碳素营养。3．肉浸汁或牛肉膏一般是牛肉的水浸出液辅助因素的营养来源。4．盐类一般加入氯化钠或磷酸盐（K2HPO4），作为调节渗透压和维持培养基的pH值。5．特殊物质如鲜血、血清、腹水、鸡蛋等供给碳氮和生长因子，满足微生物的特殊需要。6．琼脂俗称“洋菜”系由海藻中提制出的一种牛乳糖硫酸脂，在98℃溶于水，温度降至45℃以下形成凝胶状，培养基中含1.5%以上呈固体状态0.5-1%的半固体，在培养基中做固形剂用，起支撑作用，以便于观察细菌菌落特征。7．指示剂：培养基加入适当的指示剂，可观察pH的变化式其他反应现象，反而显示细菌在培养中对某些物质的利用情况，常用的指示剂有酚红、中性红、溴甲酚紫等。5）灭菌：培养基制备后，及时高压灭菌，15磅20-25min。6）灭菌检查：待培养基冷却后，放入37℃温箱培养24h，无杂菌生长，放入4℃冰箱备用。

（二）厌氧肝汤

1．配料同普通肉汤2．制备过程同普通肉汤3．在分装时，每支试管先加5-6肝脏4．分装后再加1-2ml液体石腊；5．分装后的处理同普通肉汤。（三）普通琼脂培养基1．配料牛肉膏0.3gzacl：0.5g

蛋白胨1g琼脂2-3g蒸馏水：100ml2．制备方法（1）称取材料于容器中，作好容量记号；（2）在电炉上加热溶解（要专人看管），不断搅拌（以防烧礁）直至琼脂完全溶化。（3）加水至原水量（4）调pH7.4-7.6（5）过滤用双层纱布荚棉花（事先用水浸湿）过滤并装入（冬天操作要快以免凝固）三角瓶中。（6）灭菌经121℃，30min灭菌。6分装：分装试管（斜面）或三角瓶（平板）。

7)试管琼脂摆成斜角，三角瓶琼脂倒入平皿，每个平皿10ml左右，放到平整之处，制成平板培养基。9)若制备鲜血或血清琼脂培养基。待三角瓶琼脂冷却至50℃，加入5-10%鲜血或血清装入试管迅速摆成斜面，倒入平皿，制成鲜血平板培养养基。

（四）马铃薯、葡萄糖琼脂培养基（培养真菌用）

1．配料马铃薯200g

蒸馏水1000ml

琼脂20g

葡萄糖20g2．制备方法①先将马铃薯切成小块，加蒸馏水煮烂，倒碎；②过滤（用纱布）马铃薯汁；③取马铃薯汁1000ml，加入琼脂加热溶解；④待琼脂溶化好后，再加入葡萄糖溶化；⑤用双层纱布过滤，并装入三角瓶中，不需调pH值。⑥一部分分装试管，剩余装入三角瓶中。⑦灭菌，普通琼脂培养基高压灭菌，12磅15-20分钟。⑧三角瓶倒入平皿制成马铃署琼脂平板，试管摆成斜面。

[实验材料]

（1）器皿：量筒（100ml）、烧杯（1000ml和100ml各一个）、漏斗、三角烧瓶（100ml）、试管、玻棒、刻度吸管（1ml和10M各一个）、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试管塞、包装纸、扎绳、洗耳球