血清甲胎蛋白（AFP）定量检测标准操作规程

血清甲胎蛋白(AFP)定量检测标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的规范操作流程，保证血清甲胎蛋白(AFP)定量检测的准确性和可靠性。2.原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18min完成。2．1·第1步孵育：10μl标本、生物素化的单克隆AFP特异抗体和钌(Ru)标记的单克隆AFP特异抗体混匀，形成夹心复合物。2．2·第2步孵育：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。3.标本要求3．1．1血清标本采集用标准样本试管或含分离胶的试管。标本在2~8℃可稳定7天，－20℃可稳定3个月。含沉淀的标本使用前需离心。心(大约15000g，10min或2000~3500r／min，5~10min)澄清，方可进行检测。3．3·患者准备的一般要求：患者在采血前24h内应避免运动和饮酒，不宜改变饮食习惯和睡眠习惯。一般主张在禁食12h后空腹取血，门诊患者提倡静坐15min后再采血。4.试剂与仪器4．2·试剂使用：试剂盒中的试剂是一个整体，打开后可立即使用，不能被分开。正确操作需要的所有信息可通过相应的试剂条码读取。素结合能力：470ng生物素／mg粒子。含防腐剂。4．3．3R2：Ru(bpy)32＋标记的抗AFP单克隆抗体(黑色瓶盖)，1瓶，10ml。浓度4．4·其他材料：AFP定标液(CalSet)、肿瘤标志物质控品(PreciControlTumorMarker)1和2、分析杯和Elecsys分析吸头(移液管吸头加样枪头)、通用稀释液、ProCell系统缓冲液、CleanCell检测池洗液、SysWash(附加洗液)、SysClean系统清洗、ProCellM系统缓冲液、ProbeWashM清洗液、废物袋。4．5．1存放在2~8℃。为了确保使用前自动混匀期间提供足够量的磁性微粒，甲胎蛋白试剂盒储存时，切莫倒置。器上，8周(交替贮存在冰箱内和仪器上，室温20~25℃，开瓶使用时间累计约20h)。5.操作步骤5．1．1在使用前分析仪自动使微粒处于悬浮状态。通过各试剂条形码可读取其详细实验参数。在少数情况下，分析仪无法自动读取信息时，请输入标签上的15位数字序列。仪将自动调节反应温度及各试剂瓶瓶盖的开关状态。6.校准组带有一个含有各批试剂定标具体信息的条码标签。使用AFP定标液CalSet使预定义的主曲线适用于分析仪。6．2·定标频率：必须使用新鲜试剂对每个试剂批进行一次定标(即试剂盒上机登入后的24h内)。下列情况建议重新定标：使用同一批试剂的1个月后(28天)；7天后(在分析仪上使用同一试剂盒)；根据需要：质控结果超出范围时，比如质控结果在规定的限值外；若两水平质控均在控，则定标曲线可延至试剂及质控批号更换。线的有效性，注意任何偏差。7.质控该测试适用的质控液PreciControlproTumor1和2；也可以用其他合适的质控液，如××LyphochekTumorMarkerPlusControl。在以下情况建议进行质控检测：每24h进行一次检测；每一个新批号试剂盒；每一次定标以后。所获值应在限定内，如果超出限定值，实验室应及时采取纠正措施。8.结果判断如果测定值高于检测范围，报告为＞1000U／ml或1210ng／ml(结果达到50000U／ml或60500ng／ml样本应作50倍稀释)。稀释。稀释后的标本AFP含量必须高于20U／ml(24ng／ml)。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。8．4·检测结果的不确定度：依据本科室不确定度评估程序性文件计算不确定度，并将年度不同水平质控值进行评估，评估结果以表格的形式附于SOP文件内，计算公式如下：μA＝SμB＝μ校准品＝U厂家／KU＝2UCUrel＝U／X均值Uc＝槡u＋u9.生物参考区间Umlngml10.性能参数 (脂质＜1500mg／dl)和生物素＜60ng／ml等干扰。不受类风湿因子干扰(1500U／ml)。37种常用药物经试验对本测定无干扰。接受高剂量生物素(＞5mg／d)治疗的患者，至少要等最后一次摄入生物素8h后才能采血。不受类风湿因子干扰(1500U／ml)。AFP浓度高达1×106U／ml(1．21×106ng／ml)也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或诊断的患者会出现假阳性反应。11.临床意义11．1·AFP来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道。70％~95％的原发性肝癌患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高。但尚未发现AFP含量与肿瘤大小、恶性程度等有关系。AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌。在转移性肝癌中，AFP一般低于350~400U／ml。AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者。11．2·不推荐将AFP用于普通人群的癌症筛查。孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂、无脑症、食管atresia或多胎，AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有唐氏综合征的危险性。有18％~25％患者可无AFP升高，值得注意。病毒性肝炎、肝硬化AFP有不同程度的升高，但其水平常＜500ng／ml，个别慢性活动性肝炎患者在活动期其水平可达800~1000ng／ml，应结合影像学综合分析，并定期动态监测。实际上大部分患者＜100ng／ml。AFP升高