苯磺酸左氨氯地平片的相对生物利用度及其生物等效性研究

苯磺酸左氨氯地平片的相对生物利用度及其生物等效性研究

苯磺酸左氨基丙烯酸是第三醇磺酸盐的钙通道阻滞剂，能降低地表水径流的阻力。它具有抗血小板聚集、防止动脉硬化形成、保护血管内膜、改善心肌氧气等药理作用。临床已广泛应用于原发性高血压、心绞痛等心脑血管疾病的治疗本试验建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定血浆中苯磺酸左氨氯地平的质量浓度,采用正离子MRM模式检测,并根据有关规定1材料表面1.1仪器及实验方法Agilent6410B型三级四极杆液质联用仪,配有自动进样器、Agilent1200液相色谱仪、柱温箱、电喷雾电离离子源(ESI)及AgilentMassHunterWorkstationSoftware数据处理系统(Agilent,德国)。1.2试剂乙腈、甲醇、甲酸均为色谱纯;其他试剂均为分析纯;水为自制去离子超纯水。空白人血浆:来自健康志愿者。1.3参比制剂的生产受试制剂:苯磺酸左氨氯地平片(安徽恒星制药有限公司生产,规格:2.5mg/片,批号:111213);参比制剂:苯磺酸左氨氯地平片[施慧达药业集团(吉林)有限公司生产,规格:每粒2.5mg/片,批号:110903];苯磺酸左氨氯地平对照品(购自中国生物制品药品检验所,批号:100546-200301);克拉霉素对照品(购自中国生物制品药品检验所,批号:13055-20051,99.0%)。2方法2.1身体情况及用药情况男性健康志愿者20例,年龄为19～29岁,体质量为53～75kg,与标准体质量相差±10%以内,身高为164～179cm。受试者身体健康,无心血管、肝脏、肾脏、消化道、精神、神经等疾病史,无本类药物过敏史,试验前经病史询问、体格检查和实验室检查未发现异常。试验前2周内未使用任何药物。试验前由本人签署知情同意书,试验方案经中南大学湘雅三医院医学伦理委员会批准。2.2分组、治疗本研究为单剂量给药试验,采用随机、开放、两制剂、两周期、交叉试验设计,受试者随机分为2组,每组10例,受试者于不同周期分别服用试验制剂5mg(2片)或参比制剂5mg(2片),周期间的洗脱时间为14d。试验第1d早晨8:00,受试者空腹(禁食10h以上)口服试验制剂或参比制剂,250mL温水送服。服药前及服药后2h内控制饮水,服药后4、10h进食标准午餐、晚餐,试验期间统一清淡饮食。并从此日经14d洗脱期后,开始第2周期试验,受试者接受交叉处理,给药方式同第1周期。2.3组采集肘静脉血1.分别于每周期试验的给药前(0h)及给药后1、2、3、4、5、6、8、10、12、24、48、72、96、120h采集肘静脉血5mL。血样采集后置于事先编号的肝素钠抗凝负压管内,15min内离心(3000rpm,10min)分离血浆,并将血浆转移至贴好对应标签的EP管中,于-35℃冰箱储存,待测。3样品测定与方法理论的研究3.1条件1色谱柱:AgilentTC-C3.2离子源检测设备采用ESI离子源,正离子MRM模式检测。苯磺酸左氨氯地平:检测离子m/z409.2→238.2,碎裂电压135V,碰撞能量7eV;内标克拉霉素:检测离子为m/z748.5→590.4,碎裂电压135V,碰撞能量12eV。离子源参数设置如下:GasTemp,325℃;GasFlow,8L·min3.3溶液的制备和样品处理3.3.1溶液质量浓度的测定避光条件下,精密称取苯磺酸左氨氯地平对照品13.87mg(相当于苯磺酸左氨氯地平纯品10mg),置于10mL容量瓶中,加适量甲醇溶解后,再用甲醇至刻度线,摇匀,即得质量浓度为1g·L3.3.2标准曲线及标准曲线精密称取克拉霉素对照品10mg,置于10mL容量瓶中,加适量甲醇溶解后,再用甲醇至刻度线,摇匀,即得质量浓度为1g·L3.3.3标准血浆样品的制备避光条件下,取质量浓度为1g·L3.3.4标准血浆样处理避光条件下,在上述玻璃离心试管中,精密加入20μg·L3.4数据分析3.4.1标准曲线上苯磺酸左氨氯地平的lloq/回血压指数ld按照“标准血浆样本配制”项下所述方法,制得苯磺酸左氨氯地平质量浓度分别为20、8、3.2、1.28、0.512、0.2048、0.08192μg·L以标准曲线上的最低点质量浓度作为LLOQ,则苯磺酸左氨氯地平LLOQ质量浓度为0.08192μg·L3.4.3返回率按照“标准血浆样本的配制”项下所述方法配制待测物为低、中、高(0.2048、1.28、16μg·L3.4.4基本效果避光条件下,吸取500μL空白血浆样本于10mL玻璃离心试管中,加入1mol·L3.4.5血浆样品的稳定性按照“标准血浆样本的配制”项下所述方法操作,配制待测物质量浓度为低、中、高(0.2048、1.28、16μg·L3.4.6血液样品的测量和质量控制按照“标准血浆样本配制”方法分别配制低、中、高(0.2048、1.28、16μg·L3.5氨氯地平的药动学特性根据每个受试者的个体血药质量浓度-时间数据和实际的取样时间,使用WinNonlin6.1软件的X-YPlot模块绘制氨氯地平的血浆质量浓度-时间曲线,NCA模块计算氨氯地平的药动学参数。主要药动学参数峰浓度(C4结果4.1空白血浆样本的制备取6份不同个体的空白血浆各500μL,按照“标准血浆样本处理”项下操作处理后(用50μL甲醇溶液替代50μL内标溶液),进样分析得到空白血浆样本色谱图;按照“标准血浆样本配制”项下所述方法,取6份不同个体的空白血浆配制成含苯磺酸左氨氯地平质量浓度为0.08192μg·L4.2药代动力学研究20例受试者口服苯磺酸左氨氯地平片受试制剂或参比制剂2片后,主要药动学参数见表2。4.3服药时间曲线20例受试者单次服用苯磺酸左氨氯地平片受试制剂或参比制剂2片后的药时曲线见图2。4.4等生物评价试验制剂和参比制剂中苯磺酸左氨氯地平的AUC试验制剂对参比制剂的相对生物利用度F4.5药物不良反应该试验全过程对受试者实施医疗监护,观察并记录用药后可能发生的药物不良反应。在