兽医实验室人员培训内容

：验定验定三、ELISA验考试内核(高抗原测。血凝试验(hemaggltiationtet）是称。利用特异性抗体或病毒血凝素与红细胞表面相应抗原结合而出现凝。红细胞凝集试验血凝和血凝抑制试验 某些病毒或病毒的血凝素红细胞（hemagglutnatin,A，当病毒的悬液中先加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒其素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制（hemaggltiatininhibiion，HI称血凝。血凝抑制（HI）试验禽流感（H)细胞表，HA试验由此得名。A蛋白受特异性结能干扰HA。该是前WHO进法.株HA亚定,否。HAI试验的优是前WHO进用的试验方法,可用来鉴定所有的流感病毒分离株，可用来检测禽血清体A相致时现I象鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素，对于其它禽种,也可以考虑选用在调查研究中的禽种红细化;。1氏(levers）配制称糖。g、檬钠0.8酸05、化钠.2g至100mL散后调pH值至1an高压灭菌4℃保。2备21血用约1mL少2只SPF如果没有SPF鸡证，约～4m装L混匀.2。2胞将经1501800r/min离心8分钟,液,合经1500~1800r/min心8薄膜,再重复2液20mL，合成胞悬液，4℃超过5天。2.310％鸡红细液过5，心15001800r/min8，积)入9积(L)理。2.41％液取混匀的10鸡红悬液1mL，加入9mL。3抗原（HA）3。1的112入0.025mLPBS，滴头.3.2吸取0.025mL病液第l。33第1取0025mL第2取0.025mL第3第1孔,第1取0。025mL弃换。3.4入0.025mLPBS。3.5每入0.025mL体分为1%鸡悬鸡。3.6匀,（20~2置n后结果(如置4℃环应1呈。3。7定斜。表1：准别 孔底所见 果1 红，，即100%红细胞凝集++++2 红但圈 +++3 红大圈,四周块 +++4 红点块 -5 全集能使集(00%凝集+为为1（应（。4血（验(）41据3制U以凝的以4含U的为125，则U是164(56以4。4.2的1孔~11入0LS第12孔加入0.5mLPBS。4.3吸取0025mL血加第1分吸0.025mL于第2孔第10第10取0.025mL。441～11含U液0.025m，室温（约2℃）少0min。4.5每入0.025mL体为，匀约0mi（约20℃,置4℃件。4。6结定制4个U抗为I。只有阴性对照孔血清滴度不大于21g2，阳性对照孔血清误差不超过1个I价于21og2判定I；I于31og2；HI或于41og2。正向间接血凝试验的原理是将可溶性抗原吸附于与免疫无关的载体（红细胞）表面，此吸附抗原的红细胞与相应的抗体结合,在有电凝对实于况下经常被应用到，因此,正确熟练地操作应用，在一些动物疫病的免。正向间接血凝为一种微量的定量反应试验，因而,任何操作环节的纰漏都会使最后判定的结果与正确结论大相径庭.充分理解正向间接导意义.操作步骤可简化为：①稀释液→②待检血清→③对倍稀释→④。正向间接血凝试验（IHA)口蹄疫1原理试（IA。抗原与其对应的抗体相遇,在一定条件下会形成抗原复合物，但小,原附(敏)特应灵敏性。这种经过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇,红象.2围主于测O。3剂3.196孔110°V板,板3。2微量50μL25μL）咀3。3器4O原.5O清3。6O清3。7液3.8待清(约05ml5℃活0钟4法4.1加液在上—6的1-9第7的1—4第7第8的-12液0μL。4。2清取1清50μL加入第1排第1孔,，右拇轻弹簧1-2次气泡出50μL移入第2混取出50μL移入第3第9混出50μL第1排1-9倍数)1:⑴14⑵18⑶:6⑷1:32⑸1:64⑹：128⑺156、1:12⑼。取2第2取3第3均。4。3清在血第7第1孔血清50μ第4孔，出50μL为1：2⑴14⑵1:8⑶、1:16⑷。第—7。4.4清在板第8第1清0μL第12出0μL为1：1：4096。4.5加原液对均加O型血凝抗原）25μL。4。6振匀上1-2分钟,混匀亦可,然后将血凝板放在白纸上观察各孔红血球是否混匀，不出现血沉为格盖玻或3℃下静置1-2定。4。7判准清1:16孔,稀液孔圆点，或仅出现“+”凝集（血球大部沉于孔底,边缘稍有少量血球悬浮。阳清照12—256““++凝格。在孔+凝如1清15孔“+”-“+++"凝6—7孔“+”第8呈+第9体为:28.到:1第7牛到:第8孔)+疫。注：，使用效果.用不同批次的血凝抗原检测同一份血清时，应事先用阳性血清准确测定各批次血凝抗原的效价,取抗原效价相同或相近的血凝抗差。ELISA是酶联接免疫吸附剂测定（Enzm-kdty)LIA特性量抗原起质的比例.加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果,或。E