临床检验师-沉淀反应考点总结

沉淀反应考点总结沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在特定条件下发生特异性结合时出现的沉淀现象。第一节沉淀反应的特点沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素等可溶性物质。第二阶段为形成可见的免疫复合物，约需几十分钟到数小时才能完成，如沉淀线、沉淀环。第二节液体内沉淀试验一、絮状沉淀试验抗原抗体溶液在电解质的存在下结合，形成絮状沉淀物，这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响，因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的方法，常见类型有：（一）抗原稀释法（二）抗体稀释法（三）方阵滴定法抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗血清反应。抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应。二、免疫浊度测定属于液体内沉淀反应，其特点是将现代光学行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测。（一）免疫比浊测定的影响因素1.抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素。量钩状效应。当抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。在反应体系中需保持抗体适当过量，如形成抗原过量则造成测定的准确性降低。2.抗体的质量对免疫比浊测定法的抗体要求（1）特异性强（2）效价高：低效价1:20）抗体会增加非特异性浊度（伪浊度）的产生。（3）亲和力强：则抗体的活性高，可加快抗原抗体反应的速度，且形成的IC较牢固，不易发生解离。R型抗体是指以家兔为代表的小型动物被注射抗原免疫后制备的抗血清。这类抗血清的特点是亲和力较强，抗原抗体结合后不易发生解离。后极易解离。3.抗原抗体反应的溶液反应液最适pH为6.5～8.5。常使用磷酸盐缓冲液作为免疫比浊法的反应液。4.增浊剂除蛋白质（抗原或抗体）分子周围的电子云和水化层，促进抗原、抗体分子靠近，结合形成大分子复合物。（二）免疫比浊法方法分类1.透射免疫比浊法通过检测光被吸收、衍射、反射和折射后光线减弱的变化，来定量抗原抗体的复2.散射免疫比浊法3.免疫胶乳比浊法通过检测光折射和衍射而形成的散射光强度来定量抗原抗体的复合物。是以胶乳作为载体对小分子免疫复合物进行微量测定，进一步提高了免疫浊度测第三节凝胶内沉淀试验利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶内扩散，形成浓度梯度，在抗原与抗体浓度比例恰当的眼可见的沉淀线或沉淀环。凝胶支持物的种类有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶等。不同分子量的物质在凝胶中扩散速度不同，借此可用以识别不同待测物分子量的差别。一、单向扩散试验在琼脂内混入抗体，待测抗原从局部向琼脂内自由扩散，如抗原和相应抗体结合，则形成沉淀环。散，在抗原抗体比例恰当位置形成沉淀环。两种计算方法：（＞2.Fahey曲线适用于小分子抗原和较短时间扩散的结果处理，用半对数纸画线，浓度对数logc与扩2.每次测定都必须作标准曲线。3.每次测定时必须用质控血清作质控。4.注意双环现象（出现了两种抗原性相同成分）。二、双向扩散试验让抗原和抗体在琼脂中各自向对方扩散，在比例恰当之处形成沉淀线，可对抗原或抗体进行定性分析。双向扩散试验灵敏度低，出现结果慢，不能精确定量。根据试验形式可分为试管法和平板法两种。（一）试管法抗体——琼脂——抗原（二）平板法是鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一。1.抗原或抗体的存在与否以及相对含量的估计（1）沉淀线靠近抗原孔，则抗体含量较大；（2）沉淀线靠近抗体孔，则抗原含量较大；2.抗原或抗体相对分子量的分析（1）分子量小者扩散快，反之则较慢。（2）由于慢者扩散圈小，局部浓度则较大，形成的沉淀线弯向分子量大的一方；如果两者分子量大致3.抗原性质的分析（2）沉淀线呈部分相切，说明两个抗原之间有部分相同；（3）两条沉淀线交叉而过，说明两个抗原完全不同。4.抗体效价的滴定出现沉淀线最高的抗体稀释度为该抗体的效价。出现多条沉淀线说明不纯。第四节免疫电泳技术（二）电场规定了抗原抗体的扩散方向，使其集中，提高了灵敏度；（三）可将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而将其分开，再分别与抗体反应。二、对流免疫电泳双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。在pH8.6缓冲液中，大多蛋白质带强负电荷，在电场中向正极移动；而IgG等电点偏高（pH6～7三、火箭免疫电泳单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术，实质上是加速的单向扩散试验。将抗体混入琼脂，样品孔中的抗原置于负极端，向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动的基底区越来越窄，形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰。当琼脂中抗体浓度固定时，峰的高度与抗原量呈正相关。如火箭电泳顶部呈不清晰的云雾状或圆形，则表示未达终点。作IgG定量时，因电渗呈眼不可见的若干区带，电泳停止后，沿电泳方向挖一与之平行的抗体槽，加入相应抗血清，置室温37℃作形沉淀线。免疫电泳为定性试验，目前主要应用于纯化抗原和抗体成分的分析及正常和异常免疫球蛋白的识别与鉴定方面，例如多发性骨髓瘤患者血清在免疫电泳后，可观察到异常的M蛋白沉淀弧。五、免疫固定电泳后通过漂洗和染色，并与蛋白质参考泳道对照分析，可对各类免疫球蛋白及其轻链进行分型。λ分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检测及分型，鉴定游离轻链，补体裂解产物等。免疫固定电泳最大的优势是分辨率强，敏感度高，操作周期短，仅需数小时，结果易于分析。六、交叉免疫电泳将区带电泳和火箭免疫电泳相结合的技术。可一次同时对多种抗原定量。有利于各种蛋白组分的比较，对于蛋白质遗传多态性、微小异质性、蛋白质裂解产物和不正常片段等进行定性分析。第五节沉淀反应在医学检验中的应用免疫浊度法主要用于血液、体液中蛋白质的测定。稳定性好，敏感度高（达ng/L精确度高（CV<5%），简便快速，易于自动化，无放射性核素污染，适合于大批量标本的检测。免疫固定电泳技术在临床应用较广。最大的优势是分辨力强，敏感度高，结果易于分析，现最常用于（1～4题共用答案）A.带现象B.前带C.后带D.等价带E.拖尾现象1.沉淀反应中抗原过量的现象称为2.沉淀反应中抗体过量的现象称为3.沉淀反应的反应曲线中，抗原抗体分子比例合适的范围称为4.沉淀反应的反应曲线中，抗原或抗体极度过剩而引起无沉淀物形成的现象称为『答案解析』沉淀反应中抗原过量的现象称为后带。沉淀反应中抗体过量的现象称为前带。沉淀反应的反应曲线中，抗原抗体分子比例合适的范围称为等价带。沉淀反应的反应曲线中，抗原或抗体极度过剩而引起无沉淀物形成的现象称为带现象。沉淀反应的抗原是A.颗粒性抗原B.可溶性抗原C.半抗原D.超抗原E.致敏抗原『答案解析』沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在特定条件下发生特异性结合时出现的沉淀现象。关于免疫浊度法测定错误的是A.反应液中抗体过量B.反应液中抗原过量C.反应液中抗原、抗体比例合适D.常用聚乙二醇等增浊剂E.通常用磷酸盐反应液而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应。当抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。在反应体系中需保持抗体适当过量，如形成抗原过量则造成测定的准确性降低。下列有关沉淀反应第一阶段的说法，错误的是A.抗原抗体的特异性结合B.几秒钟至几分钟内即完成C.可用散射比浊测定反应结果D.出现肉眼可见的沉淀线或沉淀环E.肉眼见不到免疫复合物『答案解析』沉淀反应分两个阶段，第一阶段为抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小的复合物，肉眼不可见；第二阶段为形成可见的免疫复合物，约需几十分钟到数小时才免疫沉淀反应A.常用于颗粒性抗原检测B.抗原抗体的结合瞬间肉眼可见C.用于可溶性抗原的检测D.不能用于定量检测E.可不考虑抗原抗体的比例『答案解析』沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在特定条件下发生特异性结合时出现的沉淀现象，关于单向扩散实验错误的是A.需先将抗原混入琼脂内B.有试管法和平板法C.需先将抗体混入琼脂内D.可用于定量检测E.抗原抗体的比例合适处形成沉淀环体结合，则形成沉淀环。通过观察双向琼脂扩散试验的结果，不能解决的问题是A.是否存在相应的抗原或抗体B.抗原和抗体相对含量的估计C.抗原和抗体相对分子量的分析D.判断两种抗原的性质是否相同E.抗体浓度的确定『答案解析』双向扩散试验能解决的问题：1.抗原或抗体的存在与否以及相对含量的估计2.抗原或抗体相对分子量的分析3.抗原性质的分析4.抗体效价的滴定5.抗原或抗体纯度鉴定。免疫电泳的影响因素不包括A.电场强度B.溶液pHC.离子强度D.抗体纯度E.电渗『答案解析』免疫电泳的影响因素不包括抗体纯度。单向扩散试验时错误的是A.将一定量的抗体混入琼脂中B.每次测定必须做标准曲线C.不必每次测定都做标准曲线D.将抗原加入所打的孔中E.24～48小时看结果『答案解析』单向扩散试验影响因素1.抗双向琼脂扩散试验中，若抗原的含量比抗体多且分子量比抗体小，则沉淀线应为A.靠近抗原孔，且弧线弯向抗原侧B.靠近抗原孔，且弧线弯向抗体侧C.靠近抗体孔，且弧线弯向抗原侧D.靠近抗体孔，且弧线弯向抗体侧E.居于抗原抗体孔中间，且弧线弯向抗原侧『答案解析』双扩平板法根据沉淀线的位置可判断抗原、抗体是否存在及相对含量，1.抗原或抗体的存在与否以及相对含量的估计（1）沉淀线靠近抗原孔，则抗体含量较大2）沉淀线靠近抗体孔，量的分析（1）分子量小者扩散快，反之则较慢。（2）由于慢者扩散圈小，局部浓度则较大，形成的沉淀线弯向分子量大的一方；如果两者分子量大致相等，则形成直线。双扩平板法测量两种不相关成分的抗原时，沉淀线A.二条直线相交叉B.二条弧线完全融合C.二条弧线部分融合D.二条弧线不连接E.二条直线平行『答案解析』双扩平板法测量抗原性质的分析（1）两条沉淀线互相吻合相连，表明抗体与两个抗原中的相同表位结合而沉淀，两个抗原相同2）沉淀线呈部分相切，说明两个抗原之间有部分相同3）两条沉淀线交叉而过，说明两个抗原完全不同。双扩平板法出现多条沉淀线的原因是A.抗原过剩B.抗体过剩C.抗原缺乏D