《钦州大蚝人工苗种繁育技术规程》征求意见稿

ICS65.150CCSB5145代替DB45/T1084—2014TechnicalspecificationsforartificialseedlingproductionofCrassostreahongkongensis（本草案完成时间：2023-3-6）在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。IDB45/T1084—2022本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件代替DB45/T1084-2014《近江牡蛎苗种繁育技术规程》，与原文件相比，主要技术变化如下：——标准名称修改为：“钦州大蚝苗种人工繁育技术规程”；——术语和定义中增加了“亲贝”、“浮游幼虫”、“D型幼虫”、“壳顶幼虫”、“眼点幼虫”、“变态”和“稚贝”内容；——增加了术语的英文名称，见3；——调整了培育池的深度，增加了池底坡度的要求，见5.2.2；——调整了饵料培育设施体积范围，增加了培育容器，见5.3.2；——增加了亲贝选择对产地和体重的要求，见6.1；——调整了亲贝促熟培育海水的盐度要求，见6.2；——增加了亲贝培育的日常管理要求，见6.4；——增加了卵液采集中水温和洗卵的要求，见7.3；——调整了各时期幼虫的培育密度，见8.3；——增加了投饵藻类种类，见8.4；——删除了各时期幼虫所需的培育天数，见8.5；——更换了采苗器及处理要求，见9.1；——调整了采苗器的投放密度，见9.2；——调整了附苗时间幼虫的大小范围，增加了附苗条件，见9.3；——调整了出池贝苗的每饼附苗数量，见9.4.5；——增加了病害防治中对育苗池的消杀处理，见11；——修订了藻类培养用水和培养管理，见附录A.3、A.4；本文件所代替文件的历次版本发布情况为：DB45/T1084-2014，本次修订为第一次修订。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出。本文件由广西壮族自治区农业农村厅归口。本文件起草单位：广西农产品质量安全服务协会、广西壮族自治区水产科学研究院、钦州市钦南区水产技术推广站、钦州市水产技术推广站。本文件主要起草人：彭金霞、官俊良、韦嫔媛、何苹萍、张兴志、张立、罗丽俐、黄伟德、苏朝捷、阮良鹏、钟昌艳。1DB45/T1084—2022钦州大蚝人工苗种繁育技术规程本文件规定了钦州大蚝（Crassostreahongkongensis）苗种人工繁育的场地条件、繁殖设施、亲贝培育、人工授精与孵化、幼虫培育、附苗、出池苗及病害防治的技术操作要求。本文件适用于广西行政区域内钦州大蚝苗种的繁育生产。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB11607渔业水质标准GB/T17924地理标志产品标志通用要求SC/T9103海水养殖水排放要求NY/T391绿色食品产地环境质量NY5362无公害食品海水养殖产地环境条件NY/T755绿色食品渔药使用准则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1钦州大蚝Crassostreahongkongensis农业部地理标志产品，学名香港牡蛎（Crassostreahongkongensis隶属于双壳纲(Bivalvia)，珍珠贝目(Pteriodae)，牡蛎科(Ostreidae)，是Lam等学者采用线粒体基因组结合形态学标准从近江牡蛎（Crassostrearivularis）中分离出来的“白肉型”牡蛎。应符合GB/T17924的规定。3.2壳高shellheight两壳完全闭合时，由壳顶至腹缘的最大距离。3.3壳长shelllength两壳完全闭合时，由壳前端至壳后端的最大距离。3.4亲贝parentshellfish可繁殖贝苗的、性腺已成熟的成贝。3.5浮游幼虫planktoniclarva2DB45/T1084—2022指营浮游生活的各期幼虫的总称。3.6D型幼虫D-typelarva又称初期面盘幼虫。此期幼虫的主要特征是由壳腺分泌的贝壳包裹了全身，形成两片侧面观像“D”字形的壳。3.7壳顶幼虫umbolarvaD型幼虫经过一段时间的发育，铰合线开始向背部隆起，形成壳顶的幼虫。3.8眼点幼虫eyepointlarva双壳贝类幼虫后期，在鳃的原基背部形成一对球形的由黑色素聚集起来的感觉器官，称为眼点；是即将进行附着生活的特征，此时的幼虫称为眼点幼虫。3.9变态metamorphosis幼虫面盘和眼点消失、出现次生壳、以鳃作为呼吸和滤食器官、子代从浮游生活转变为固着生活的生物学过程。3.10倒池Invertedpool将幼虫从一个池中收集移入另一个干净的池中的过程。3.11采苗器Seedlingattaching供牡蛎幼体固着、变态和发育生长的基质。本技术规程采苗器规定的是水泥圆饼。3.12稚贝spat在贝类生活史中，幼虫经变态后向成体过渡的一个发育阶段。主要特征是面盘完全退化，钙质的贝壳形成，用鳃呼吸和摄食，足部发达，营底栖生活。4场地条件4.1场地选择选择毗邻潮流畅通海域，淡水水源充足，地势平坦，背风向阳，周边3000m内无工业、农业及生活污染区，交通、水电、通讯方便的场地建设繁育场，其他环境条件应符合NY5362的规定。4.2水质要求水源应符合GB11607和NY/T391的要求。亲贝培育、人工授精与孵化、幼虫培育、藻类培养用海水水源要求盐度20～35，pH8.0～8.4，溶解氧5mg/L以上。5繁殖设施5.1池塘3DB45/T1084—2022亲贝暂养、催熟池塘面积1300m2～3300m2，水深2m以上，沙泥底，平整不渗漏，排灌方便，增氧设施齐备。5.2苗种培育车间5.2.1车间要求采用棚架或房屋结构，要求可以调光、通风、防雨、抗风暴。5.2.2设施要求水泥池，用于苗种孵化及培育，面积为30m2～100m2，池深为1.5m～2.0m，半埋式，池内角为弧形，排灌方便，池底坡度以8.0%～10.0%为宜，增氧设施齐备。5.3藻类培养车间5.3.1车间要求室内间，用于藻类一级培养，要求具有调光、控温功能；室外大棚，用于藻类二、三级培养，要求具有调光、通风、防雨、增氧功能。5.3.2设施要求一级培养用3L～5L的三角烧瓶，二级培养可用18L～50L透光塑料水桶，三级培养可用500L~1000L玻璃钢桶和透光塑料桶或车间池子。6亲贝培育6.1亲贝选择宜选用钦州大蚝地理标志保护范围海域的自然种群或原良种场的成贝，贝龄2.5龄～3.0龄，壳高9cm以上，体重100g以上，壳面完整、附着物少，有活力，软体部肥满，生殖腺覆盖大部分内脏囊。6.2培育条件培育海水盐度15～20，水温25℃~30℃,自然光照。池塘应事先施植物生长素进行藻类培养，水色呈黄褐色或黄绿色，透明度在30cm左右，溶解氧5mg/L以上，阴雨天气时可增氧。6.3培育密度50个/立方米～60个/立方米。宜投喂硅藻,日投喂细胞量为1.0×105个/毫升～3.0×105个/毫升，分3次～4次投喂，辅助投喂金藻、扁藻、螺旋藻粉和鸡蛋黄等，并根据亲贝摄食情况调整投饵量。早晚各换水1次，每次换水量1/3~1/2，2d～3d倒池1次；采卵前3d～4d每次换水1/2，不倒池，每天吸污1次。6.5性腺检查当亲贝性腺覆盖整个内脏囊，配子成熟时可用于人工育苗。4DB45/T1084—20227人工授精与孵化7.1工具准备牡蛎开壳器、吸管、载玻片、玻璃或塑料容器、筛绢网袋等工具用10mg/L高锰酸钾溶液浸泡10min后，用过滤海水冲洗。7.2鉴别雌雄亲贝清洗后解剖，选择生殖腺饱满的个体，用吸管取少量性腺，涂于载玻片上的水滴中，肉眼观察呈颗粒状散开的为雌贝，烟雾状散开的为雄贝，进一步镜检确定雌雄，剔除掉雌雄同体个体。亲贝♀:♂=10︰1，鉴别后分别放置。7.3卵液采集先制备卵液，盆中盛放一半过滤海水，盐度15～20，水温25℃~30℃,将雌贝内脏团放入孔径70μm～80μm的筛绢网袋中，在大盆中轻挤网袋让卵子滤出。获得的卵液需用500目绢网过滤清洗后加入过滤海水，静置30min～60min。7.4精液采集卵液静置时间接近结束时制备精液，盆中盛放少量过滤海水，盐度15～20，将雄贝内脏团放入孔径70μm～80μm的筛绢网袋中，在小盆中轻挤网袋让精子滤出，镜检精子活力。7.5人工授精授精按亲贝♀:♂=10︰1，将卵子密度调整到1×106个/升～2×106个/升，取精液加入卵细胞液中，搅拌3min～5min。7.6孵化受精卵移入孵化池中孵化，孵化密度20个/毫升～30个/毫升。受精卵入池后，加大充气，捞取水面泡沫，定期观察胚胎发育情况。8幼虫培育8.1幼虫收集在水温25℃~30℃下，受精卵经20h～24h发育至D型幼虫，用网目38μm～48μm的筛绢网将D型幼虫收集移入培育池培育。8.2培育条件8.2.1水质条件培育用水需经沉淀沙滤后用1mg/m3～2mg/m3乙二胺四乙酸（EDTA）处理，盐度15～20，水温25℃~30℃,pH8.0～8.4，溶解氧5mg/L以上。8.2.2环境条件5DB45/T1084—2022散气石0.8个/立方米～1个/立方米，24h连续充气，光照控制在500lx～1000lx。8.3培育密度前期（壳高140μm以内）3个/毫升～5个/毫升，中期（壳高140μm～280μm）2个毫升～3个/毫升，后期（壳高280μm以上）1个/毫升～2个/毫升。8.4投饵管理藻类培养见附录A。幼虫培育前期用金藻或小球藻投喂，中后期增加角毛藻和扁藻混合投喂。投饵量根据水中幼虫密度、幼虫胃饱满度和水中剩饵多寡灵活掌握，以适量多次为好，每天2次～3次。8.5水质管理D型幼虫入池1d～2d内采用逐日加水，第3d起用网目48μm筛绢网箱换水，每天1次～2次，每m～280μm）3/5，眼点幼虫期（280μm～340μm）100%。每隔3d～5d倒池一次。养殖海水排放应符合SC/T9103的规定。9附苗9.1采苗器选择及处理采用厚1.5cm～2cm、直径5cm～6cm的水泥圆饼，7个～8个/串，饼间距8cm～10cm，10串/捆，垂直吊放，根据育苗池深度确定采苗器长度，末端离池底10cm～20cm为宜。采苗器经浸泡，反复冲洗后，用20mL/m3的次氯酸钠溶液浸泡18h～24h，硫代硫酸钠（Na2S2O3）中和至无氯，排掉浸泡海水再用淡水冲洗干净待用。9.2采苗器投放密度根据幼虫密度，每立方米水体垂直吊放水泥圆饼串30捆～40捆。9.3附苗时间当幼虫壳高达到300μm～320μm，眼点幼虫比例达30%以上且部分出足时，收集幼虫并移入已投放采苗器的水池中。9.4附苗管理9.4.1附苗环境条件附苗池光照0lx～500lx，附苗初期微充气，眼点幼虫固着完成24h后加大充气量。9.4.2幼虫密度0.5个/毫升～1.0个/毫升。9.4.3投喂管理日投喂单胞藻，附苗前期投饵密度为1.0×105个/毫升～2.0×105个/毫升，稚贝期可增加投饵量。6DB45/T1084—20229.4.4水质管理附苗初期水位应不低于采苗器，采用流水方式换水。固着完成24h后，可加大换水量。养殖海水排放应符合SC/T9103的规定。9.4.5出池附苗完成后7d～10d，当贝苗附着量达到30个/饼～50个/饼时，即可出池。10.1规格壳高1.0mm～2.0mm。10.2质量肉眼可见苗体明显，大小均匀，固着牢固。规格合格率≥90%；数量合格率≥95%；伤残死亡率≤10.3运输采用常温干运法，途中采取防晒、防风干、防雨、防磨擦等措施，一般运输时间控制在8h以内。11病害防治预防为主，防治结合。每次倒池换水，使用10mg/L的高锰酸钾溶液对育苗池进行消毒，育苗过程中可添加1mg/m3～2mg/m3土霉素等抗菌素进行细菌性病害预防。药物使用应符合NY/T755的规定。7DB45/T1084—2022（资料性）藻类培养A.1藻种海水单胞藻，应根据生产季节选用适于培养的藻种，一般采用金藻、小球藻、角毛藻、扁藻。A.2培养液硅藻类培养液各元素浓度为N∶P∶Si∶Fe=10∶1∶1∶0.1，其他藻类培养液各元素浓度为N∶P∶Fe=10∶1∶0.1。A.3培养用水保种及一级培养用水要加热煮沸彻底消毒，密封冷却待用。二级培养用水经沙滤、500目筛绢袋过滤煮沸维持3min～5min；如水质较好，二级培养用水也可采用有效氯30ppm的漂白粉或漂白片消毒。三级培养用水采用有效氯30ppm的漂白粉或漂白片消毒8h以上，曝气后待用，使用前再用硫代硫酸钠（N