版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
第5章荧光光谱5.1基本原理5.2荧光探测5.3荧光光谱法的应用5.1基本原理荧光属于光致发光
包括吸收和发射两个过程荧光光谱属于发射光谱光致发光可以在紫外-可见光区、X射线区等
我们将关注紫外-可见光区,常用于有机化合物分析5.1.1荧光发光原理光致发光的能级向下跃迁过程无辐射跃迁:激发态→第一电子激发态的最低能级在激发态因碰撞以热的形式损失能量,跃迁到第一电子激发态的最低能级荧光发射:第一电子激发态的最低能级→基态能级由第一电子激发态的最低能级跃迁至基态,光的形式释放能量,即荧光磷光发射:三重态→基态能级先无辐射跃迁至三重态,逗留较长时间后再跃迁至基态能级,发射磷光荧光与磷光的区别从激发态跃迁到基态的路径不同从激发到发光的时间不同,荧光10-9~10-7s
磷光10-3~10s(三重态是亚稳态)
发光波长不同,荧光波长比磷光波长短5.1.2荧光光谱与吸收光谱形状波长谱带数荧光光谱与吸收光谱的比较
荧光光谱灵敏度高,检测限可达ppb量级(10-9)
荧光光谱选择性好,能吸收光的物质不一定能发射荧光,一定波长下不同物质的荧光光谱不同
荧光光谱没有吸收光谱使用广泛,许多物质不产生荧光,并且荧光对环境因素非常敏感5.1.3产生荧光的基本条件入射光要能被物质粒子吸收,使粒子能够跃迁到激发态,然后经第一电子激发态的最低能级,降落到基态振动能级
物质粒子要具有高的荧光效率荧光过程速率常数,由物质粒子本身决定物质分子结构与荧光效率
具有大共轭双键的分子容易发射荧光,π→π*跃迁的量子效率高,寿命短(10-9~10-7s)
共轭效应越大,荧光效率越高,苯<萘<蒽苯萘蒽物质分子结构与荧光效率(Cont.)
刚性平面分子荧光效率更高,会减小分子振动,从而减小与其它分子碰撞的可能,芴≈1.0>联苯0.18芴联苯
取代基也会影响荧光效率给电子基(-NH2,OH)会增强荧光效率(共轭作用)吸电子基(-NO2,-C=O,-C=NH)会减弱甚至猝灭荧光取代基的空间阻碍作用会减弱荧光5.1.4影响荧光光谱的因素(外部)
入射光强,荧光强度与入射光强成正比
溶剂,一般溶剂效应,折射率和介电常数的影响
特殊溶剂效应,物质分子与溶剂的化学作用
增大溶剂极性,向长波移动,荧光强度增加
温度,升高温度→物质粒子碰撞增多→减弱荧光
pH值,荧光物质本身弱碱或弱酸性时影响较大
内滤光,溶液中存在能吸收荧光的物质,减弱荧光
自吸收,溶液浓度较大时,部分荧光会被物质本身吸收吸收光谱与荧光强度(激发的选择?)波长强度吸收光谱波长强度荧光光谱吸收强度越大,被激发到高能级的粒子数越多,则向下跃迁产生的荧光越强5.2荧光探测5.2.1荧光探测装置吸收光谱荧光光谱两点区别:在入射光的垂直方向探测探测器前还有一个单色器F-4500荧光光度计光路图(日立)5.2.2荧光团许多物质不会发射荧光或荧光效率低需要利用强荧光发射的荧光团(或荧光探针分子)荧光探针分子需满足两个条件:
(1)能与待测物质某个微区专一而牢固的结合
(2)这种结合不会破坏物质分子的结构和空间构象一些典型的荧光团色氨酸348nm4‘,6-二脒基-2-苯基吲哚461nm
增强型绿色荧光蛋白509nm四甲基罗丹明576nm染料667nm
染料cy3的吸收、发射光谱最大激发波长550nm最大发射波长570nm(黄绿光)绿色荧光蛋白(GFP)
GFP荧光是生物细胞的自主功能,GFP是一种广泛应用的活体报告蛋白5.2.3荧光探测方法
同步荧光光谱技术
(1)
在同时扫描激发单色器和发射单色器波长的情况下测量荧光光强,由测得的荧光强度对发射或激发波长作图
(2)两种同步扫描形式——固定波长和固定能量
(3)固定波长:激发波长与发射波长间隔固定
(4)固定能量:激发光波光子能量与发射光波光子能量差固定
(5)特点:①与激发光谱及发射光谱都有关系,能使选择性进一步改善②
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 阳泉职业技术学院《港口与航运管理》2025-2026学年期末试卷
- 长春金融高等专科学校《超声影像学》2025-2026学年期末试卷
- 江西水利电力大学《新疆地方史》2025-2026学年期末试卷
- 复工健康指南
- 心病健康宣教
- 《雷雨》教学设计与教学反思
- 浮选工安全意识强化竞赛考核试卷含答案
- 兽用生物制品制造工安全宣教水平考核试卷含答案
- 磁头装配工创新方法水平考核试卷含答案
- 园林植保工变更管理水平考核试卷含答案
- 安徽绿沃循环能源科技有限公司12000t-a锂离子电池高值资源化回收利用项目(重新报批)环境影响报告书
- 三年级第二学期绘本教学《Prince Seb's Pet》课件
- GB/T 26610.5-2022承压设备系统基于风险的检验实施导则第5部分:失效后果定量分析方法
- YS/T 582-2013电池级碳酸锂
- SB/T 10782-2012钟表销售服务规范
- 第九章初起火灾处置基础知识
- GB/T 17466.24-2017家用和类似用途固定式电气装置的电器附件安装盒和外壳第24部分:住宅保护装置和其他电源功耗电器的外壳的特殊要求
- 安全风险辨识记录
- 供方履约评价表(工程施工类)
- 风湿性多肌痛的诊断与治疗课件
- 烤箱能效测试标准
评论
0/150
提交评论