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志贺氏菌检验志贺氏菌检验革兰氏阴性短杆菌增菌分离初步生化试验血清凝集试验革兰氏染色增菌固体样品：25g（电子天平）稀释瓶或具液体样品：25mL（25mL吸量管）塞广口瓶+225mLGN增菌液（量筒）,混匀。培养（于36C°±1C。培养6〜8h）注意：液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。分离从阳性增菌液中用接种环取1环1环HE琼脂平板，划线麦康凯琼脂平板，划线36C±1C培养18〜24hHE琼脂平板麦康凯琼脂平板开始处开始处平板划线示意图HE琼脂平板上的典型菌落特征：呈透明，不发酵乳糖菌落麦康凯琼脂平板上的典型菌落特征：呈透明，不发酵乳糖菌落初步生化试验取有明显典型菌落的HE或麦康凯琼脂平板（在放阳性物品处）或三糖铁斜面：先划线，后穿刺于36C±1C培养18〜24h典型菌落（同一菌落）葡萄糖半固体：穿刺于36C°±1C。培养18〜24h斜面划线方法斜面穿刺方法对照试验三糖铁斜面培养结果：上层红色，下层黄色（产酸）红色：产碱黄色：产酸黑色：产硫化氢葡萄糖半固体培养结果：沿穿刺线生长，无动力对照试验葡萄糖半固体从有典型志贺氏菌的三糖铁斜面取1环，染色。革兰氏染色结果：G-（红色，短杆菌，无荚膜，无芽孢）在无菌室中固定，到微生物实训室染色血清凝集试验①滴1~2滴灭菌生理盐水②从有典型志贺氏菌的三糖铁斜面上用接种环取1环①滴1~2滴志贺氏菌多价血清结果：志贺氏菌多价血清：凝固灭菌生理盐水：不凝固玻片用记号笔在玻片中间画条线革兰氏染色步骤：涂片——火焰固定——结晶紫初染——水洗—碘液媒染—乙醇脱色——水洗——吸干——番红或沙磺复染——水洗——干燥 镜检涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必须均匀。火焰固定：载玻片通过火焰1-2次固定，不可过热，以载玻片不烫手背为宜。结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫1滴，染色1min。水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。碘液媒染：加碘液媒染1min,然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止。乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大约需要20〜30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸水纸吸干水分。番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1-2min。水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。干燥：于室温下自然干

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