实验4-植物细胞骨架的观察

中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学 科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006植物细胞骨架的观察一、实验目的：1.掌握植物细胞骨架处理及染色方法。2.对细胞骨架的形态和分布有一个初步认识。实验原理：真核细胞胞质中存在的纤维网状结构称为细胞骨架，包括：微管（直径20-25nm）、微丝（直径6-7nm）、中间丝（直径10nm）、和粗丝等。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，显示微丝组成的张力纤维。张力纤维（直径40nm）在体外培养细胞中普遍存在，与细胞对基质的附着，维持细胞扁平铺展的性状有关。三、实验材料洋葱表皮细胞试剂：1、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液M-缓冲液1%TritonX-100/M-缓冲液30%戊二醛-PBS溶液四、实验方法撕取1平方厘米见方的洋葱表皮细胞，在培养皿中浸泡于PBS缓冲液中，使其沉底。撕取1平方厘米见方的洋葱表皮细胞，在培养皿中浸泡于PBS缓冲液中，使其沉底。去PBS溶液，加入1%TritonX-100处理30min去PBS溶液，加入1%TritonX-100处理30min去TritonX-100，使用M-缓冲液洗三遍，每次5min去TritonX-100，使用M-缓冲液洗三遍，每次5min加入3%戊二醛溶液固定30min加入3%戊二醛溶液固定30min去戊二醛固定液，用PBS洗三遍，每次5min去戊二醛固定液，用PBS洗三遍，每次5min0.2%考马斯亮蓝R250染色10min0.2%考马斯亮蓝R250染色10min将样品用蒸馏水洗2遍，将表皮细胞延展于在玻片上，显微镜下观察。将样品用蒸馏水洗2遍，将表皮细胞延展于在玻片上，显微镜下观察。实验结果核骨架核骨架六、思考题：1．洋葱表皮细胞中，质膜下，核围，胞质中的细胞骨架分布有无不同？答：质膜下细胞骨架比较稀疏，细胞膜骨架膜骨架(membraneskeleton)是质膜下与膜蛋白相连的由纤维蛋白构成的网架结构，普遍存在于各种细胞中，参与维持质膜的形状,并协助质膜完成多种生理功能。胞质中的细胞骨架比较均匀，主要有微管和纤丝组成，参与物质的运输，维持细胞的形态，参与细胞的运动，参与纺锤体的形成等作用。细胞核中染色最深，是因为细胞核骨架的存在，细胞核骨架包括染色体骨架，细胞质基质和核纤层。在图2中可以观察到细胞核中有好几处染色特别深（箭头所指处），为核仁的致密纤维成分。2．为什么实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状，有的呈串珠状？答：实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状，呈纤维状的细胞骨架主要成分是张力纤维的成分，用于维系整个细胞。呈念珠状的成分有：1.由于在处理条件下，细胞骨架不可避免的存在解聚，由于细胞骨架的解聚，呈现念珠状的细胞骨架。2.在微管上有运输的囊泡，也可以被染成蓝色。3.有的细胞器也可以沿着细胞而运动，所以也有可能被染成蓝色。七、总结与讨论观察到的细胞骨架为张力纤维，由微丝组成，直径40nm，参与细胞对基质的吸附实验中各个试剂的作用为：①、PBS溶液：保持细胞的形态②、TritonX-100通透细胞膜，溶解细胞膜，利于细胞内物质的释放，有利于染液的进入③、M-缓冲液，含有咪唑基，起到缓冲作用，其中含有的EDTA，螯合溶液中的Ca2+，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张④、戊二醛，固定细胞。之所以不用甲醛