ABO血型鉴定及交叉配血

血型鉴定及交叉配血

血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗传性状，血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一。ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。前

言通过本节课的学习，我们应该掌握的内容1、ABO血型正反定型原理及操作2、Rh血型的鉴定原理及操作4、交叉配血原理及操作3、疑难血型鉴定的基本思路目录CATALOG03010204ABO正、反定型鉴定Rh血型鉴定疑难血型鉴定交叉配血

ABO正、反定型鉴定PART0101发现

ABO血型系统是奥地利维也纳大学Landsteiner（兰德斯坦那）于1900年发现的人类第一个血型系统基因位置血型基因位于第9对染色体上，基因名为ABO，由A、B和O三个等位基因控制遗传。基因特性ABO血型系统中A和B基因是显性基因，O基因是隐性基因。各基因编码产物A基因编码N-乙酰半乳糖胺转移酶各基因编码产物B基因编码半乳糖转移酶各基因编码产物O基因编码产物无酶活性ABO血型系统根据红细胞膜上所具有的抗原，将血型分为四个血型A型ABO血型红细胞膜上只具有A抗原1234B型红细胞膜上只具有B抗原AB型红细胞膜上同时有A抗原和B抗原O型红细胞膜上A、B抗原都没有血型抗原抗体A型A抗BB型B抗AO型无AB型A+BABO血型系统抗A+抗B无ABO正定型鉴定

正定型是检测红细胞表面的抗原，用标准抗A和抗B定型试剂测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原标准抗A和抗B定型试剂玻片法、试管法和微柱凝胶法等待检者的血液，红细胞抗凝或不抗凝样本。严重溶血、脂血、污染等标本不适合用于本项目检查。原理样本要求试剂方法ABO正定型鉴定玻片法加抗A和抗B试剂各一滴于玻片两端，再加1滴10%的被检红细胞悬液抗A血型定型试剂（单克隆抗体）抗B血型定型试剂（单克隆抗体）受检者10%红细胞悬液或悬浮于自身血浆或血清中的红细胞加样混匀2分钟左右结果ABO血型凝集示意图抗-B抗-A血型：A型抗-B抗-A血型：B型抗-B抗-B抗-A抗-A血型：AB型血型：O型抗A在两支试管中各加入1滴受检者血2~5%红细胞悬液加入1滴抗A加入1滴抗B混匀后离心离心机无凝集凝集血型：B型抗B抗A抗B观察结果检查是否溶血试管法速度和时间选择以下二种之一1.转速1000rpm，时间1分钟2.转速3400rpm，时间15秒ABO正定型鉴定1%受血者红细胞稀释10ul压积红细胞＋1ml生理盐水中（配置0.8~1%红细胞悬液）受血者全血50ul离心判读结果微柱凝胶法ABO正定型鉴定微柱凝胶法结果判读ABO反定型鉴定反定型是检测血清（浆）中的抗体，用标准A1型细胞、B型细胞和O型细胞测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B抗体。标准A1型细胞、B型细胞和O型细胞试管法等待检者的血清或血浆原理样本要求试剂方法A1在标记好的三支管中各加1滴对应的试剂红细胞分别在三支试管中加入1滴（50ul）待检者血浆（血清）混匀后离心离心机无凝集凝集血型：A型BA1O观察结果检查是否溶血试管法速度和时间选择以下二种之一1.转速1000rpm，时间1分钟2.转速3400rpm，时间15秒ABO反定型鉴定OB无凝集ABO反定型鉴定ABO血型表现型反应格局表受检者红细胞与标准血清（正定型）受检者血清（浆）与标准红细胞（反定型）受检者血型抗-A抗-BAcBcOc+--+-A-++--B--++-O++---ABABO反定型鉴定思考题？1.ABO反定型中试剂为什么会有O型细胞？2.只做ABO反定型，结果出来后能否直接报告血型？不能！单独反定型结果不能作为判断血型的依据，反定型必须与正定型一起进行。(人出生时，正常的抗A和抗B还没产生或较弱，一般认为婴儿ABO血型抗体3~6个月才合成。5~10岁时，抗体的产生达到高峰，具有较高效价

。老年人和体弱患者的抗A和抗B水平一般低于年轻人。所以一般新生儿不建议做反定型；当老年人正反定型不相合时应考虑这一影响因素。)

如果在反定型试验中，受检者的血清（血浆）与O型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性，则表明被检者血清（血浆）中可能存在ABO系统以外的其他系统的抗体干扰定型。

Rh血型鉴定PART0202Rh血型系统的抗原Rh系统已经发现的有50多种抗原，最为常见而且用一般实验室方法可以鉴定的有D、E、e、C、c五种抗原。这五种抗原也是与临床关系最密切的，其中又以D抗原性最强；引起溶血性输血反应和新生儿溶血病，抗D最常见。我们现在通常把红细胞上含有D抗原的称为Rh阳性，而不含有D抗原的称为Rh阴性Rh血型鉴定根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阴性。RhD（IgM）血型定型试剂玻片法、试管法和微柱凝胶法等红细胞抗凝或不抗凝样本原理样本要求试剂方法Rh血型鉴定玻片法加抗D试剂1滴在玻片上，再加1滴35—45%的被检红细胞悬液，也可以是悬浮于自身血浆中的红细胞。抗D（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）受检者35—45%的被检红细胞悬液1滴，也可以是悬浮于自身血浆中的红细胞1滴。加样混匀2分钟左右结果备注：RhD血型定型一般同ABO血型定型同时进行，方法基本一样。抗D在试管中加入1滴受检者血3~5%红细胞悬液加入1滴RhD（IgM）试剂混匀后离心离心机无凝集凝集RhD阳性抗D抗D观察结果检查是否溶血试管法速度和时间选择以下二种之一1.转速1000rpm，时间1分钟2.转速3400rpm，时间15秒Rh血型鉴定RhD阴性Rh血型鉴定思考题？

为什么ABO血型系统有正、反定型鉴定而Rh血型鉴定没有反定型？

Rh血型抗体是由妊娠、输血或其他明确原因产生的同种异体免疫抗体。Rh血型系统的抗体由获得性免疫产生，血清中几乎无天然抗体，故不需要做反定型。

疑难血型鉴定PART0303疑难血型相关定义,概念血型：血液中各种成分的遗传多态性标志说明:通常所称血型,不加限定(如白细胞血型,血小板血型),则专指红细胞血型疑难血型:

是指一种血型难以判定的”现象”,本质不是一种血型,无定义→因为是否疑难,与输血科试验条件,工作人员技术水平及经验有关；

例如,某医院认为AIHA血型难定,国家血型参比实验室就认为很容易检定。疑难血型鉴定（一）生理性因素1.年龄

老年人(ABO抗原或ABO抗体减弱),6个月前的婴儿(ABO抗原或ABO抗体不成熟),可能导致ABO血型误定。2.ABO亚型包括A(B)型、B(A)型,ABO抗原减弱导致细胞定型(正定型)受干扰,或血清中出现不规则抗体干扰血清定型(反定型)。3.冷凝集素

有些健康人血清中含有冷凝集素,且在<4℃才有活性,不干扰ABO血型检定,如果冷凝集素效价升高,或在室温以上反应,致敏自身红细胞可能干扰ABO正定型,存在于血清可能干扰ABO反定型。干扰ABO血型正确判定的因素（二）实验技术原因1.标本混淆

如采错被检者,红细胞和血清非同一人,记录结果与标本编号不对应。2.静脉输液处采样ABO抗体被输液稀释,干扰ABO反定型。3.采样不规范

用凝血块洗下红细胞检定血型，其中混有凝集程度不一的红细胞；用血浆做ABO反定型,操作过程中纤维蛋白析出凝集试剂红细胞。4.试剂质量问题或漏加试剂

定型试剂过期失效，未达标准，被污染。操作中未遵循“先加血清后加细胞”的原则，大批量样本试验时漏加试剂血清或试剂红细胞。5.实验操作不规范

被检红细胞未洗涤,非特异性粘附血浆蛋白,或被检红细胞悬液过浓或过稀。（三）临床治疗的影响1.大量输液

患者ABO抗体被稀释,干扰ABO反定型。2.静脉输入高分子药物

静脉输入高分子药物，如甘露醇、右旋糖苷和羟乙基淀粉等，可导致红细胞成钱串状，干扰结果判定。3.近期输过异型红细胞、异型血浆

近期输过异型血的样本正定型可能呈mf,近期输异型血浆可能干扰ABO反定型。4.单采血浆或血浆置换治疗

如果患者血浆被稀释,干扰ABO反定型。5.异基因造血干细胞移植：ABO或RhD异基因造血干细胞移植,可一度呈嵌合体。（四）疾病影响1.白血病或某些其它造血系统恶性疾患

白血病或造血系统恶性疾患可能引起ABO或RhD血型抗原表达变化，一般是“变弱不变强”。2.自身抗体

自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、淋巴瘤、红斑狼疮SLE等患者的自身抗体干扰血型检定。3.不规则抗体

输血、妊娠等产生的不规则抗体可能干扰反定型。4.感染

G-菌感染可导致类B、全凝集或多凝集；某些病毒感染可导致高冷凝集素综合征,有时干扰反定型或正定型。5.急性大量失血外周血网织红细胞增多,并出现有核红细胞,年轻红细胞血型抗原强度可能比成熟红细胞弱。

对ABO正、反定型不一致的疑难血型标本检定,不是一定要达到正、反定型的结果一致,而是首先要对ABO正、反定型不一致的原因做出科学合理的解释,然后对ABO血型做出正确判定。对ABO正、反定型不一致的标本的检定,特推荐我们归纳的“三步分析法”ABO正、反定型不一致的疑难血型样本“三步分析法”（一）排除人为因素或操作失误(第一步)

复检ABO血型:

1)重新采集血样:分抗凝血和不抗凝血的2管,排除血样采错、静脉输液处采样和血样不规范等因素。2)核对试剂、器材：核对试剂效期,仔细阅读试剂说明书,特别是操作规程和注意事项;核对离心机转速、时间、离心力,以及其它器材有无污染,排除试剂、器材,特别是离心力不标准的干扰。（二）复习临床资料(第二步)分析可能导致正、反定型不一致的原因并予以,归纳、分类1.患者年龄、性别

<6个月的婴儿或老年人ABO正反定型不合可能为生理性的因素,有妊娠生育史的妇女可能产生不规则抗体干扰ABO反定型。2.临床治疗

1)大量输液；2)静脉输注高分子药物；3)输异型血；4)血浆置换治疗；5)造血干细胞移植。3.临床诊断1)白血病或某些其它造血系统恶性疾患导致ABO抗原减弱或漏检；2)引起血浆蛋白紊乱的疾病(肝脏病、代谢性疾病、多发性骨髓瘤、某些慢性消耗性疾病)导致反定型试剂红细胞非特异性凝集；3)AIHA、淋巴瘤、SLE等疾病的自身抗体干扰ABO正、反定型；4)真性红细胞增多症,红细胞呈钱串状,干扰ABO正定型;5)细菌感染可能导致类B，全凝集/多凝集,病毒感染可能产生病理性冷凝集素干扰ABO定型；6)急性大失血，既可能干扰ABO正定型,扩容治疗又可能干扰ABO反定型。1.红细胞抗原减弱或丢失（1）ABO亚型

提示:反定型试剂红细胞凝集明显,正定型被检红细胞凝集弱或呈mf、或抗-AB与抗-A(或抗-B)的凝集强弱不一致(一般是抗-AB凝集强于抗-A或抗-B)。鉴定:1)血清学试验,根据各种ABO亚型的特征,选择相应的试验验证(吸收/放散试验,血型物质检测,特殊的分型试剂,如抗-H,抗-A1,等)；2)DNA鉴定,有些ABO亚型有DNA分型试剂盒,但一些少见或罕见的亚型DNA分型技术还不成熟,必要时测序。（三）根据第二步的分类结果，设计针对性试验验证(第三步)（2）输(异型)血

提示:临床3个月内输过异型血，正定型可能呈mf。鉴定:1)直接抗球蛋白试验(DAT)阳性为有力佐证，但直抗阴性不能排除；2)离心法分离患者红细胞复检血型；3)DNA鉴定(DNA抽提自外周血中白细胞，供者白细胞在受者外周血中存活期短，一般不干扰血型鉴定)。（3）造血干细胞移植

提示：临床ABO血型不同的造血干细胞移植后，如果植入存活，受者在逐渐转变为供者血型的过程中，可能呈嵌合体状态，如果供者O型，受者非O型，嵌合体可能呈现“A或B抗原减弱”样。鉴定:1)ABO正定型凝集呈mf；2)DNA鉴定，这也是移植成功的指标之一。2.红细胞额外反应（1）红细胞上粘附大量蛋白

提示:用未洗涤的红细胞检定ABO血型，应想到红细胞上粘附大量蛋白可能干扰正定型。鉴定:红细胞经充分洗涤后复检血型。（2）红细胞未洗涤(标本血清含对试剂成分反应的物质)提示:用未洗涤的红细胞检定ABO血型，应想到标本血清可能干扰正定型。鉴定:红细胞经充分洗涤后复检血型。（3）输(异型)血

提示及鉴定：见红细胞抗原减弱或丢失条目。3.血清定型减弱或无反应（1）年龄提示:<4-6个月的幼儿、老年人。鉴定:1)<6个月的幼儿不做ABO反定型、或反定型仅供参考；2)老年人ABO抗体效价降低,可采用增强抗原-抗体反应技术(见红细胞抗原减弱或丢失条目)。（2）ABO亚型

提示及鉴定:见红细胞抗原减弱或丢失条目。（3）低丙种球蛋白血症

提示:多无特殊病史可循。鉴定:1)正定型无异常;2)血清蛋白测定。（4）造血干细胞移植

提示:临床造血干细胞移植史,正定型凝集呈mf。鉴定:DNA鉴定。（5）先天性ABO抗体缺失

提示:国内报告多在献血者中发现，一般无特殊临床表现。鉴定:定期追踪确认。（6）大量输晶体盐或胶体扩容剂

提示:临床扩容治疗或血浆置换治疗病史,患者ABO抗体被稀释。鉴定:追踪观察,晶体盐或胶体扩容剂代谢后,干扰消失。4.血清额外反应（1）自身抗体

提示:病毒感染或其它临床诊断(冷凝集素综合征,阵发性寒冷性血红蛋白尿)。鉴定:1)预温法(标本采集、分离血清、试剂红细胞试验等过程均在37℃进行,被检血清加试剂红细胞37℃放置1h观察结果替代离心法)；2)自身红细胞4℃吸收冷自身抗体后试验。（2）同种抗体提示:一般有输血史或妊娠史,也可见于疫苗注射或输注血制品,如静脉免疫球蛋白者；也可能无病史可循。鉴定:抗体筛查,抗体鉴定。（3）输(异型)血浆提示:临床输(异型)血浆史。鉴定:定期复查,异型血浆体内代谢后干扰消失。（4）造血干细胞移植

提示及鉴定见血清定型减弱或无反应条目。（5）输(含某种血型抗体)免疫球蛋白

提示:临床输免疫球蛋白史。鉴定:定期复查,输入体内的免疫球蛋白代，谢后干扰消失。血型鉴定在生活中的应用

交叉配血PART040446交叉配血的定义

交叉配血试验也称配合性试验，使病人，献血者血液之间没有可测到的不相配合的抗原、抗体成分，试验应在37℃下进行。在配血的任何步骤中均不产生溶血或凝集的献血者的血液才能输注给病人。47

交叉配血的目的交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要目的是为了防止输血后产生溶血性反应。尽可能确保任何一个病人，在输了供血者的血之后不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持最长的存活时间。

交叉配血标本要求交叉配血标本一般选用EDTA抗凝血标本，也可以是血清标本，但鉴于交叉配血需要患者红细胞，临床多选用EDTA抗凝血标本；标本凝块、溶血、严重脂血、标本被细菌污染等应为不合格标本应拒收。

交叉配血试验的内容主侧配血用患者血清与供者红细胞进行试验次测配血

供血者血清与患者红细胞进行试验患者供血者主侧次侧4950

交叉配血的“交叉”含义

交叉配血的要求主侧配血要求：

不可以有凝集或溶血现象。次测配血要求：

供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但不可以有溶血。凝集不凝集51★特殊说明：输血不一定要主次侧都相合，主侧不合在有些病种、病情下也可以输血，严格按照相应的配血原则即可。52常见交叉配血试验方法盐水介质配血聚凝胺配血抗人球蛋白检测卡配血生理盐水法生理盐水法

盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗体分子上的抗原结合位点结合，交叉连接形成肉眼可见的凝集块。盐水介质凝集试验用于IgM抗体的检出。

盐水介质配血方法患者献血者主侧次侧离心看结果阳性阴性552%-5%红细胞悬液聚凝胺试验57聚凝胺试验原理凝聚胺法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合。再加入带高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。最后加入悬浮液具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则凝集不散开，试验结果为阳性。操作步骤

1.取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受血者血清(血浆)2滴，和供血者3～5％红细胞悬液1滴，次侧管反之。2.各加低离子溶液0.65ml，混合均匀后，再各加凝聚胺溶液溶液2滴，并混合均匀。3．用离心机3400转/min离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。4．轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。聚凝胺试验5．最后加入悬浮液2滴，轻轻转摇动试管混匀并同时观察结果。6.结果判定：如果在60秒内凝集散开，代表是由凝聚胺引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。凝聚胺配血方法患者献血者主侧次侧混合均匀凝聚胺主次侧均加低离子溶液混匀后再加凝聚胺混匀60凝聚胺配血方法离心凝聚胺引起红细胞非特异性凝集阳性阴性悬浮液主次侧均加悬浮液看结果61抗人球蛋白检测卡63抗人球蛋白检测卡（微柱凝胶法）检验原理

抗人球蛋白检测卡利用微柱凝胶卡中的微管来代替传统意义上血型血清学试验用的试管，采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，利用凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过的特性，将生物化学的凝胶过滤技术、离心技术和血型血清学的抗原抗体特异性反应结合在一起，专供血型血清学试验使用。将红细胞和抗血清加在凝胶上部反应，离心后观察。凝集的红细胞，被阻挡在凝胶的上部或中央，判断凝集反应阳性；游离的红细胞，可通过凝胶间隙而沉积在凝胶的底部，判断凝集反应阴性。抗人球蛋白检测卡—交叉配血操作示意图641%受血者红细胞稀释10ul压积红细胞＋1ml低离子介质受血者全血供血者全血1%供血者红细胞受血者全血供血者全血25ul血浆50ul25ul血浆50ul抗人球蛋白检测卡——交叉配血操作示意图65离心判读孵育阳性：表示受（供）血者血浆或血清中含供（受）血者红细胞血型抗原相应的抗体（IgG或IgM），供受血者不相容；阴性：表示供受血者相容。孵育器离心机检测卡凝集强度示意图及结果判断表664+3+2+1+±dcpPHH-

阳性4+表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。3+表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层。2+表示部分RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。1+表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。±表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底。dcp表示混合凝集外观，部分红细胞凝集颗粒集结于凝胶表层，部分红细胞沉于胶底。PH表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留红细胞。H表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无红细胞。阴性—表示RBC全部沉积于胶底。

结果判断表几种交叉配血方法的比较方法优点缺点盐水法操作方便,费用低廉

只能检出不相配合完全抗体,不能检出不相配合的不完全抗体聚凝胺法方便、应用最广，实用于急诊

对罕见不规则抗体抗K敏感性低，且肝素对其有影响,易引起假阴性。抗人球蛋白检测卡（微柱凝胶法）国际安全输血检查的推荐方法，灵敏度高、重复性好、特异性好、检测结果可较长时间保存费用高68配血注意事项在抗体筛查或交叉配血试验时出现弱凝集时，一定要考虑是否有临床意义，有时一些简单的方法可解决问题。如将试管放入37℃水浴数分钟，凝集消散，则很可能该抗体为无临床意义抗体；对有妊娠史（包括流产）、输血史或有过器官移植的病例输用血液时，受血者血清抗体筛查、交叉配血等检查一定要进行不完全抗体的检测；69配血注意事项日常工作中，交叉配血，包括ABO血型正反定型、RHD血型定型、受血者血清中不规则抗体检测最好使用两种方法进行平行检测，结果均符合才能发出报告；尤其，在交叉配血时，盐水法、聚凝胺法或微柱凝胶法，一起使用保障输血安全。在分析输血前血型血清学检测结果时，还要注意受血者的一些疾病状况：严重感染、低血浆蛋白血症、肿瘤和器官移植等情况时，患者的血型抗原抗体会发生变化，尤其在治疗前后会出现检测结果不一致。输血前标本采集时间限制：采集患者血液标本与输血时间的间隔越短，与其体内血液真实情况越能相符合。练习题(课堂回顾)1.