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文档简介

第二章

基因工程制药

DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。回顾：基因工程的基础知识一、基因的概念:二、基因工程技术是将目的基因插入载体，拼接、转入新的宿主细胞，构建成工程菌(或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。第二节基因工程药物生产的基本过程

（掌握）⒈目的基因的克隆⒉构建DNA重组体⒊DNA重组体转入宿主菌⒋构建工程菌⒌工程菌发酵⒍表达产物的分离纯化⒎产品的检验等基因工程药物制药的主要程序上游阶段：

下游阶段：一目的基因的获得

一、反转录法反转录法就是分离纯化目的基因的RNA，再反转录成cDNA，然后进行cDNA克隆表达。二、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）

RT-PCR是将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起，该法是mRNA经反转录合成cDNA第一链，在以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始协助下，PCR扩增，特异性的合成目的cDNA链（目的基因）。三、化学合成法

合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷酸短片段，再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段，然后将这些双链片段按正确的次序进行退火连接成较长的DNA片段，再用连接酶连接成完整的基因。

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