人教版2017年高中生物第1部分专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(选修一)课件

第1部分专题2课题2理解教材新知把握热点考向应用创新演练知识点一知识点二考向一考向二1.测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平

板法和显微镜直接计数法。2．稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，

但统计结果往往比活菌数目低。3．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的选择培养基分离该细菌。4．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，据是否变红进行判断。

[自读教材·夯基础]1．筛选菌株的思路(1)自然界中目的菌株的筛选：①依据：根据它对

的要求，到相应的环境中去寻找。②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的

，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。生存环境TaqDNA聚合酶(2)实验室中目的菌株的筛选：①原理：人为提供有利于

生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时

其他微生物的生长。②方法：利用选择培养基分离。a．选择培养基：允许

微生物生长，同时

其他种类微生物生长的培养基。b．实例：选择分解尿素的细菌的培养基，以

作为唯一氮源，只有能合成

的微生物才能分解尿素。目的菌株抑制或阻止特定阻止或抑制尿素脲酶稀释涂布平板稀释度活菌②计数原则：一般选择菌落数在

的平板进行计数。③结果分析：统计的菌落数往往比活菌的实际数目

。原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是

。(2)其他方法：利用

直接计数。30～300低一个菌落显微镜圆褐固氮菌生活于土壤中，能以氮气作为氮源。请探讨、交流实验室分离圆褐固氮菌的方法。提示：配制无氮培养基作为选择培养基。

[跟随名师·解疑难]1．选择培养基的类型及作用(1)在培养基中加入某种化学物质。如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入指的是在培养基的培养成分的基础上加入。(2)改变培养基中的营养成分。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。(3)改变微生物的培养条件。如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。2．统计菌落数目(1)稀释涂布平板法：①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。②注意事项：a．设置重复组：同一稀释度下，至少涂布3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。分析结果时，需考虑重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。[特别提醒]

教材中的实例说明了设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了1个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数值结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。b．设置对照：目的是排除实验中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度。③计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积。M：代表稀释倍数。(2)显微镜直接计数法：①原理：此法利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。②缺点：不能区分细菌的死活。③方法：用计数板计数。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积为1mm2和高为0.1mm的计数室，在1mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都是由400个小格组成的。如图所示。④计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。[自读教材·夯基础]有机质中性3～8cm30～300温度时间数目稳定(4)计数：当菌落数目稳定时，取同一

下的3个平板进行计数，求出

，并根据所对应的

计算出样品中细菌的数目稀释度平均值稀释度2．菌种鉴定(1)原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解为

，使培养基的

增强。(2)方法：在以

为唯一氮源的培养基中加入

指示剂培养细菌，若指示剂变

，可确定该种细菌能够分解尿素。氨碱性尿素酚红红1．当第一次测定时为什么要将稀释的范围放宽一些？提示：为确保能从中选择出菌落数在30～300之间的平板进行计数。2．为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？提示：防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

[跟随名师·解疑难]1．操作中的注意事项(1)无菌操作：铁铲和信封都要灭菌。称取土壤、将称好的土样倒入锥形瓶、稀释土壤溶液，每一步都要在酒精灯的火焰旁进行。(2)做好标记：如在培养皿上注明培养基种类、培养日期以及培养样品的稀释度等。2．结果分析与评价(1)培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落：对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。(2)样品的稀释操作是否成功：如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。(3)重复组的结果是否一致：如果不同同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要分析产生差异的原因。[例1]