毕业论文茶多糖提取工艺的优化

毕业论文题目： 茶多糖提取工艺的优化 专业： 药学方向：药物化学

目录TOC\o"1-5"\h\z论文正文 20中文摘要 20英文摘眼 21前言 22\o"CurrentDocument"实验部分 22\o"CurrentDocument"结果与分析 25\o"CurrentDocument"问题与讨论 32结论 33\o"CurrentDocument"参考文献 34错误!未定义书签错误!未定义书签错误错误!未定义书签错误!未定义书签错误!未定义书签错误!未定义书签课题任务书 外文翻译 文献综述 开题报告 茶多糖提取工艺的优化摘要目的：本文以粗茶为主要原材料进行茶多糖提取工艺的研究。 方法：采取水提醇沉法，对茶叶中的茶多糖进行提取分离，然后运用苯酚-硫酸法测定茶多糖的含量。本文重点以pH值对茶多糖提取率的影响进行了探讨，在单因素实验结果的基础上，考察了 pH值、浸提温度、浸提时间以及乙醇浓度四因素对茶多糖提取率的影响，采取 L9（3）4的正交实验设计，通过极差分析，得到茶多糖提取的最佳条件组合。结果：对茶多糖提取率影响最显著的因素为浸提温度，其次为乙醇浓度、浸提时间、 pH值，茶多糖的最佳提取工艺条件为 pH值为4、浸提温度为85°C、浸提时间为1.5h、乙醇浓度为75%,茶叶中茶多糖的平均含量为2.67%。结论：采用上述浸提工艺，既可以节省提取工艺的成本，也可以提高提取工艺的效率，并能最终为粗茶的综合利用提供社会经济效益的新途径。关键词茶多糖；提取；正交试验；最佳工艺条件；平均含量第#页2茶多糖的提取工艺茶叶提取条件的不同对多糖的提取率产生不同的影响，对于茶叶多糖的提取方法，我们常见的般分为水提取法、酶提取法、微波辅助提取等。2.1水提取法的工艺分析用水作溶剂来提取多糖是最常用的方法之一，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。水提取的多糖多数是中性多糖。一般植物多糖提取多数采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去不溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，用高浓度乙醇沉淀提纯多糖。苏永昌 【2］对乌龙茶多糖提取工艺的研究表明，用热水 (80°C)和丙酮进行多糖浸提和沉淀效果好；设计正交试验对提取工艺进行分析，得到最佳的提取工艺条件：料液比 1:1,浸提温度100°C,浸提时间3h,沉淀剂量为3倍体积丙酮。周小玲［3］采用二次响应面方法(responsesurfaceanalysis，RSA)对水法提取TPS的提取工艺进行了优化， 得到了水浸提TPS最佳条件为提取温度80°C、漫提时间1.5h、料水比1：20时，实际测得的提取率为1.22%。1.22%与理论预测值相比相对误差在2%左右。因此，采用RSA法优化得到的浸提条件参数准确可靠，具有实用价值。曹鹏飞 ⑷从料液比、提取时间、温度及酒精浓度4个因素对茶多糖的提取工艺进行研究，最佳提取条件为：料液比 1:10,浸提时间为60min，浸提温度为100°C，沉淀时所用的乙醇浓度为75%。分析表明，浸提时间、浸提温度对茶多糖的提取率的影响最为显著。分析水提取法所用条件不同，达到茶多糖的提取率各不相同，通过正交试验设计或采用二次响应面方法等优化水提取的工艺条件得到各自的最佳提取率，条件参数准确，具有实用价值。2.2酶提取法的工艺分析郭艳红等［5］用酶法提取茶叶多糖，研究酶种类、添加量、温度和pH值对多糖含量的影响，并在最佳工艺基础上探讨茶多糖得率。结果表明，质量分数为 0.8%的茶叶水解酶，在pH值5.5,温度48°C的条件下，茶多糖含量最高，得率为 2.01%。王元凤⑹研究了一次热水提取后的茶渣采用热水提取、复合酶提取、果胶酶提取对茶多糖提取效果的影响，并对酶法提取工艺进行了优化。结果表明，热水提取后的茶渣采用复合酶提取，在最佳工艺参数下茶多糖的提取率为 3.29%，是水提法的2.70倍；采用果胶酶单独提取，在最佳工艺参数下茶多糖的提取率为 2.21%，是水提法的1.81倍。通过对两种酶法的提取工艺分析与比较，我们可以得到酶法提取的最佳工艺条件，在此条件下酶法提取可提高茶多糖得率。2.3微波辅助提取的工艺分析对微波技术的应用，近年来得到很大的发展，微波具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。何传波等⑺采用微波辅助方法提取铁观音茶多糖，通过正交实验考察了微波功率、时间、水浴浸提温度、料液比对多糖得率的影响，结果表明铁观音茶多糖得率随微波功率和时间的增加而增大，随料液比的升高先增后降。江和源等 ［8］以微波辅助提取茶多糖，并与热水浸提法进行比较。结果表明在微波辅助下，水和 20%乙醇提取多糖的效果好，微波功率越高越有利于多糖提取，总提取时间以60min以上为宜，液固相比达到15:1即可，茶多糖的最高提取率为4%左右，而传统水提法，多糖的提取率为1.43%o通过分析比较得到知，微波辅助提取法与传统热水浸提法相比较，提取率高，节省时间， 明显提咼了提取效率。3茶多糖的含量测定方法研究文献报道的茶多糖的含量测定方法包括比色法、薄层色谱法、气质联用法、高效液相色谱法等。其中比色法比较常见，使用历史悠久，目前已广泛应用于多糖含量测定，特别是蒽酮一硫酸法和苯酚一硫酸法应用最广。3.1比色法测定茶多糖的含量蒽酮-硫酸法测定多糖含量，是利用多糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成羟甲基糠醛，羟甲基糠醛与蒽酮络合成蓝色化合物，通过该化合物颜色的深浅来计算多糖浓度的高低。傅博强等【9］采用蒽酮-硫酸法比色测定茶叶多糖含量，对江西婺源不同茶场茶叶中多糖的含量进行了测定，并与其它产地、品种的茶叶多糖含量进行了比较，江西婺源绿茶中多糖含量在 4.17%-6.35%之间，CTC红碎茶多糖含量为3.10%-3.53%，其含量与茶叶品种、等级、生长海拔高度、产地有关。苯酚-硫酸法的基本原理是利用糖类在浓硫酸作用下，水解生成糠醛或其衍生物，可与苯酚试剂缩合产生颜色物质， 反应后溶液呈橙黄色， 于480-49Onm处有特征吸收，其颜色深浅与糖的浓度成正比。在测定多糖含量时，因难以得到相应的多糖对照品，而常以葡萄糖等单糖作为对照，测定结果则以单糖来表示多糖的含量。 SHAOQing-song等［10-12］采用苯酚-硫酸法测定传统中药温郁金多糖的含量，采取L9（3）3的正交试验设计，得到了最佳的比色方案，多次测定吸光度，分别得到温郁金中多糖的含量为3.21%,3.23%,3.20%,3.18%,3.22%和2.38%。蒽酮-硫酸法，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差。苯酚 -硫酸法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度咼，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定 160min以上。3.2薄层色谱法测定茶叶多糖的含量薄层色谱又叫薄层层析，是根据样品组分与吸附剂的吸附力及其在展层溶剂中的分配系数的不同而使混合物分离。薄层层析对设备要求不高，分离效果好、操作简便、分离速度快 （1-3h）、样品需要量较少（500ng〜1g）。邓国栋等［13］采用双波长薄层扫描法定量测定 1种茶叶多糖的单糖组成，单糖组成比例为阿拉伯糖 ：葡萄糖：半乳糖：木糖=10.30:11.40:8.37:1.28。实验证明其方法具有分离效果好，操作简便，速度快，实验成本低等优点。3.3气质联用法测定茶多糖含量GC法可定性、定量分析多糖的组分及含量，常采用衍生物法以增加其挥发性。一般是将多糖酸水解物或甲醇解物（用盐酸-甲醇），用三甲基硅烷基化（TMS）或三氟乙酰化（TFA）转化为硅烷化产物或二酰化产物进行气相色谱分析。周鹏等 ［14］用水提取茶叶并采用凝胶纯化，从茶叶中分离得到一种多糖蛋白复合物TGP。TGP被硫酸完全水解，单糖产物用盐酸 -羟胺和乙酸酐进行衍生化处理，然后进行GC-MS进行分析。结果表明：TGP的单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。气相色谱法对6种单糖进行分离测定，6种糖全部达到基线分离，表明本方法可有效测定茶多糖中的糖类物质。3.4高效液相色谱法测定茶多糖的含量HPLC法测多糖含量常选用TSK、SW凝胶排斥色谱柱为分离柱，样品经简单预处理，在示差折光检测器中进行检测，以不同分子量的标准右旋糖酐作标准，同时测定样品中多糖的分子量分布情况及其含量。聂少平等［15］以自制茶叶多糖纯品作为标准品，以 UltrahydrogelTM500（7.8>300mm）为固定相，0.6ml/min蒸馏水为流动相，折光示差检测，对多种茶叶中茶多糖含量进行了测定，回收率在80.4%〜93.2%（RSD=5.42%）之间，回归方程为： C=0.2503X10-6A-0.0087,r=0.9997，其浓度在0.604~6.04mg/ml范围内呈良好的线性关系。与其他方法比较， HPLC法有分析速度快，分离效能高、灵敏度高等方面的优点。研究表明该方法是简单、准确、可靠的，适合于作为茶叶多糖原材料和产品质量控制的方法。4茶多糖的药理活性研究茶多糖（TPS）是茶叶中极具开发价值的一种生理活性物质，现代药理学研究表明茶多糖具有降血糖、降血脂、增强免疫力、降血压、减慢心率、增加冠脉流量、抗凝血、抗血栓和耐缺氧等作用，近年来发现茶多糖还具有治疗糖尿病的功效。王丁刚等［16-18］研究表明茶多糖具有（1）降血压及碱慢心率作用 （2）耐缺氧作用（3）增加冠状动脉流量（4）具有降血脂作用（5）抗凝血及抗血栓作用。初步的研究表明TPS对于某些心血管疾病的预防及治疗具有进一步研究和开发价值。聂少平等 【佝从婺源粗老绿茶叶中提取纯化出了茶叶多糖，研究了它对超氧自由基、DPPH自由基的清除作用，表明茶叶多糖对超氧自由基、 DPPH自由基有较好的清除作用。冯磊［2°］研究表明TPS能降低高脂大鼠模型TC，升高HDL-c,HDL2-C，提高LCAT活力,对于动脉粥样硬化能起到一定的预防作用。江和源 ［21］研究表明茶多糖能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高，改善小鼠的糖耐量，具有降血糖功能。5展望在茶叶生产及加工过程中有大量的修剪枝叶及加工副产品 ，大多数都作为废弃物未加以利用，可对废弃物进行深加工综合利用，提取有价值的咖啡碱、茶多酚、茶多糖。 用氯仿、乙酸乙酯依次回流提取可有效地将咖啡碱、茶多酚以及其它脂溶性的物质分步提取出来，防止茶多酚氧化变质，且能破坏细胞壁膜，使多糖裸露出来，有利于多糖的提取。茶多糖作为茶叶中继茶多酚后极具开发利用价值的又一种生物活性物质，其生产工艺已有大量研究，但是其含量测定因提取工艺的不同而不同，分析鉴定还有待进一步完善。目前虽然有一些一级结构的研究，但还不够全面和深入，同时关于多糖的高级结构以及高级结构是如何影响生物活性的研究还不清楚。随着生化分离技术和现代分析仪器的发展和完善，茶多糖的一级结构和空间构象与生物活性关系的详细研究将是今后茶多糖研究领域的热点。参考文献全吉淑尹学哲,金泽武道等•茶多糖抗氧化作用的研究 [J].中药材，2007,30(9):1116-1118.苏永昌.乌龙茶多糖的提取工艺、生物活性及高多糖优异种质资源的研究 [D].福建农林大学,2006.周小玲.茶多糖的定量、定性及生物活性研究 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