酶免及胶体金检测试剂介绍

酶联免疫检测技术简介

万泰各项产品简介李一然2008年4月一、酶联免疫技术的基础及特点什么是ELISA?免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。ELISA是一种免疫测定。基础定义抗原（Antigen）：能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗体（Antibody）：能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。机体被微生物感染后，先产生IgM抗体，然后产生IgG抗体。经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失，而IgG抗体可长期存在，在疾病痊愈后可持续数年之久。重要指标灵敏度：能检测到的分析物的最小量，表示检测下限的能力。特异性：鉴别阴性标本的能力。精密度：指对同一个标本进行重复分析，其结果间的符合率。重要指标稳定性：指在效期内试剂质量参数的变化。一般用非储存条件下较高温度进行破坏性实验数天，参观各质量参数的变化，一般37℃1天相当于4℃45天。质控血清：指为了对实验结果进行控制而配制的血清。一般用无溶血无脂血的血清或血浆。本底：指底色，如HbsAgELISA试剂盒，阳性显色、阴性不显色，本底就是阴性显色的情况；

ELISA检测方法

1.夹心法.2.间接法.3.竞争法.4.捕获法.夹心法双抗原夹心：固相(包被)抗原Ag+样品(抗体Ab)+酶标抗原Ag*→Ag-Ab-Ag*+底物(TMB)→显色双抗体夹心：固相(包被)抗体Ab+样品(抗原Ag)+酶标抗体Ab*→Ab-Ag-Ab*+底物(TMB)→显色夹心法图解TMB+H2O2TMB+H2O2显色样品酶标抗原加样洗涤加酶包被底物包被抗原21114233360’30’30’45554洗涤一步法二步法间接法固相(包被)抗原Ag+样品(抗体Ab)+酶标二抗Ab*→Ag-Ab-抗Ab*+底物(TMB)→显色竞争法固相(包被)抗原Ag+样品(无抗体Ab)+酶标抗体Ab*→Ag-Ab*+底物(TMB)→显色捕获法固相-抗IgM抗体(抗µ)+样品(IgM)→抗µ-IgM+酶标抗原Ag*→抗µ-IgM-Ag*+底物(TMB)→显色检测方法优点缺点酶联免疫EIA高灵敏度及特异性，结果准确性高，成本底。操作时间长。胶体金特异性高，操作简便。灵敏度低。化学发光（包括电化学发光）、时间分辨灵敏度高。需要较高的设备条件和操作技术，特异性一般。PCR可检测标本中极低浓度的病毒，窗口期短。价格昂贵。与其他检测方法比较二、万泰各项产品简介1、HIVHIVELSIA试剂的发展简介全称：人类免疫缺陷病毒HIV（1+2型）抗体诊断试剂盒方法：双抗原夹心酶联免疫法（第三代）检测对象：血液标本中的HIV总抗体原料：基因重组（万泰和厦大合作研制），包被GP41、GP120、GP36，片段齐全。检测窗口期：20天左右优异的自产原料1.大肠杆菌表达高活性、高特异性水溶性抗原；2.多表位表达蛋白抗原；3.相同表位的包被、标记抗原采用不同菌体表达，不同方法纯化；基因重组多表位嵌合抗原向其他试剂生产厂家提供原料对HIV-2型阳性出色的检测能力试剂盒内设置有HIVⅠ型和Ⅱ型阳性对照，为国产试剂首创，我们使用美国BBI

血清盘Panel202对万泰试剂进行考核。

对HIVO亚型的检测O亚型血来源于美国BBI灵活、稳定的操作模式实验温度可以设置在37±1℃。两步孵育时间均为30±2分钟。操作更灵活，试验更稳定，结果更可靠。超强的抗干扰能力临床研究显示，多种其他疾病潜在干扰因素血清标本均不会影响万泰两步法HIV诊断试剂盒的灵敏度和特异性，适合临床使用潜在干扰因素血清标本数阳性数阴性数甲型肝炎（HAV）78078乙型肝炎（HBV）4450445巨细胞病毒（CMV）30030T淋巴白血病病病毒（HTLV）10010风疹（RUV）30030腮腺炎10010EBV病毒10010孕妇40040众多的荣誉第一个国产第三代HIV检测试剂正在申报CE认证单位名称标本总量假阳性数量假阳性率海南血液中心50600541‰北京血液中心2570002060.8‰安徽血液中心29500301‰江西血液中心21733130.5‰河南血液中心827251241.5‰湖北血液中心1200001080.9‰其他中心血站4108864281‰总计31家9724449630.9‰2007年全年部分客户使用情况29首家推出第四代HIV试剂HIV-Ab与HIV-Ag双系统检测

——HIV-Ag和HIVP24抗体共同包被

——双抗原夹心法检测HIV-Ab——双抗体夹心法检测HIV-Ag生物素-亲和素反应系统应用

——包被抗体＋生物素标记抗体＋HRP标记亲和素30临床考核31临床考核汇总研究考核汇总：进一步缩短窗口期，有效降低HIV传播风险

——考核超过700份阳性标本（不同亚型和毒株），灵敏度100％保证高灵敏度的同时，具备优越的特异性

——考核超过15000份阴性标本（包括特殊标本），特异性99.8％32结论

万泰HIVAg/Ab诊断试剂全新第四代HIV筛查试剂为使用者提供:增强检验安全性更可信赖的实验结果33我们在HIV方面的研发新进展1、HIV确证试剂（RIBA试剂）

与艾控中心，地坛医院等单位合作的十五攻关课题目前已进行部分临床考核2、HIV唾液尿液检测试剂（DOT-ELISA）

与艾控中心，地坛医院等单位合作的十五攻关课题目前已进行部分临床考核2、乙肝两对半系列试剂简介1全称：1、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）诊断试剂盒2、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）诊断试剂盒3、乙型肝炎病毒E抗原（HBeAg）诊断试剂盒4、乙型肝炎病毒E抗体（HBeAb）诊断试剂盒5、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）诊断试剂盒乙肝两对半检测原理夹心法：阳性显色、阴性不显色（右）

HBsAg、HBsAb、HBeAg竞争抑制法：阴性显色、阳性不显色（左）

HBeAb、HBcAb

简介3潜伏期: 平均60-90天 范围：45-180天黄疸发生率:<5岁,<10%

5岁,30%-50%急性病死率:0.5%-1%慢性感染: <5岁,30%-90%

5岁,2%-10%慢性肝病患者病死率: 15%-25% 简介4高

中低/未发现

血液血清伤口分泌物

精液阴道分泌物唾液尿液粪便汗液泪液乳汁乙肝标志物及临床意义1乙型肝炎病毒（HBV）具有明显的种属及嗜肝特性，可致持续性病毒感染。我国属乙肝感染的高发区，乙肝表面抗原（HBsAg）的携带者超过10%。通常判断HBV感染及其状况的指标为HBV血清血标志物—乙肝两对半、HBc-IgM、HBVDNA等。乙肝病毒（HBV）又称Dane颗粒（丹颗粒），由外至内可分为包膜蛋白、核壳蛋白、HBVDNA等主要组成。包膜蛋白构成乙肝病毒表面抗原（HBsAg）核壳蛋白构成乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和乙肝病毒e抗原（HBeAg）乙肝标志物及临床意义2乙肝表面抗原（HBsAg）HBsAg于1963年在澳大利亚土著人血中发现，故也称为澳大利亚抗原（简称“澳抗”），具有免疫原性，可刺激机体产生相应的抗体，是机体感染HBV后最早出现的血清血指标。HBsAg分为4个亚型：adw、adr、ayw和ayr。不同亚型的HBsAg刺激机体产生的HBsAb不同。乙肝标志物及临床意义3乙肝表面抗体（HBsAb）HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，能中和体液中的HBV，感染乙肝病毒后6-23周出现。见于乙肝恢复期、HBV既往感染和乙肝疫苗免疫后。HBsAb滴度≥10mIU表示有保护性，可抵御同一亚型的再感染。乙肝标志物及临床意义4乙肝病毒核心抗原（HBcAg）HBV核心颗粒外表面具有HBcAg活性，但外周血中没有游离的HBcAg。HBcAg阳性表示有Dane颗粒存在，有传染性。目前临床较少检测该项指标。乙肝标志物及临床意义5乙肝核心抗体（HBcAb）HBcAb是乙肝核心抗原的总抗体。感染HBV后最早出现的抗体是HBc-IgM抗体，它是乙肝病毒急性感染的重要指标，慢性肝炎的炎症活动期也呈阳性。核心抗体不是中和抗体，HBc-IgG抗体可持续多年不消退，是既往感染的指标。乙肝标志物及临床意义6乙肝e抗原（HBeAg）HBV核心颗粒内表面具有HBeAg活性，也可以由HBcAg经蛋白酶降解后产生，在乙肝潜伏期后期出现，略晚于HBsAg。HBeAg阳性表示HBV在体内复制，有很强的传染性。进入恢复期后，HBeAg随着HBsAg的消失而消失，其消失前后出现HBeAb。乙肝标志物及临床意义7乙肝e抗体（HBeAb）HBeAb的出现预示HBV复制减弱或中止，疾病可能向好的方向转化。HBeAg逐渐消失HBeAb逐渐产生的时期称为血清转换期，即由复制期转为非复制期。在这一时期可能出现eAg、eAb同阳的现象。HBeAb也不是保护性抗体。乙肝标志物产生的先后顺序HBsAg→(HBcAg)→HBcAb→HBeAg→HBeAb乙肝两对半模式见资料万泰HBsAgEIA试剂特点1.最低检出量达到1IU，质量达到国际先进水平。2.特异性好，检测准确性高。3.中国药品生物制品检定所标准血清检验结果全部合格。4.卫生部临床检验中心历年评比全部成绩优秀。3、HCV简介全称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒方法：间接酶联免疫法（第三代）检测对象：血液标本中的HCVIgG抗体原料：基因重组，包被NS3、NS4、NS5、CORE，片段齐全。抗-HCV检测中HCV的抗原5’UTRCE1E2NS2NS3NS4NS53’UTR结构区非结构区第一代c100第二代C22C33cc100第三代C22C33cc100NS5窗口期检测针对HCV四种抗原的抗体第二代试剂在感染后平均10周左右可以检出第三代试剂感染后平均7-8周为阳性在极少数病例中，如免疫抑制、肾功能衰竭等，抗-HCV可以保持阴性2007年武汉血液中心HCV考评试剂厂家检定项目S/CO孔间变异试剂本底新创2NCU3.27.44%好科华2NCU4.989.25%好万泰2NCU3.246.9%好金豪2NCU2.8110.5%一般金伟凯2NCU1.938.14%一般检定所考评市场流通的HCV

抗体检测试剂参加临床考核和质量评价的厂家中，万泰HCV试剂盒的灵敏度、特异性等综合水平名列国产试剂最佳水平。试剂盒阴性假阳性阳性特异性%ABBOTT290424299.93%ORTHO2908040100.00%国产试剂12898113999.62%国产试剂22896143899.52%国产试剂32895153899.48%万泰公司2897133899.85%总体评价易于操作，便于推广，实验条件要求较低，不存在污染问题。筛查献血员，显著降低输血后HCV感染广泛应用于临床，起到辅助诊断的作用，有效减少医疗纠纷。4、TP简介全称：梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒方法：双抗原夹心酶联免疫法检测对象：血液标本中的梅毒总抗体原料：基因重组（万泰和厦大合作研制），包被P15、P17、P47，片段最齐全。常用梅毒检测方法的比较万泰TPEIA与TPPA的比较标本：类风湿病人血清10份，乙肝病人血清20份，红斑狼疮病人血清6份。来源于解放军301医院。病人血清数量梅毒检测阳性梅毒检测阴性类风湿10010乙肝20020红斑狼疮606

结论：在被检测的36份血清中，未发现假阳性反应。万泰TP试剂对特殊标本的检测

检测单位：北医第一医院皮肤科、新疆HIV检测中心结论：万泰梅毒EIA灵敏度较TPHA好部分临床考核数据万泰TP-ELISA双抗原夹心多片段试剂原料自产，根本上保证质量稳定！包被抗原片段多：P15、P17、P47，目前厂家中实际片段最多的生产家，混合包被保证梅毒灵敏度。卫生部临床检验中心血清标准盘合格率100%2001年上市，质量优秀，销量增长最快。5、HEV系列试剂HEV简介及危害戊型肝炎（HepatitisE）由戊型肝炎病毒(HEV)引起、肠道传播为主的急性传染性肝炎。可散发和流行,水源和食源暴发(>50次)发展中国家为主,占急性非甲非乙型肝炎的30~70%左右;临床表现类似甲肝，但不同的是：潜伏期更长,40天(15~60天)；年龄较大；胆汁郁积更明显；病死率较高(1~5%)，孕妇(20%以上)；乙肝患者发生戊肝容易导致重症肝炎；二代病例罕见；无有效疫苗和治疗方法。戊肝是一种人兽共患病?!基因分型---四型9群

亚/非

墨西哥欧美中国/日本戊型肝炎世界流行状况戊肝广泛流行于世界各地，尤其是发展中国家。Non-ABC中>25%是HEV引起的。⊕⊕⊕⊕⊕⊕存在本土HEVRT-PCR(+)的人间病例。⊕⊕⊕⊕⊕●●●●●●●●HEVRT-PCR(+)的猪●万例以上HEV暴发区与人类密切接触的动物如猪、牛、羊、鼠、鸡、狗和野猴等体内陆续检出HEV抗体，以猪的感染率最高；猪、鼠体内分离的HEV与人HEV有很高的同源性；猪HEV和人HEV可成功感染猪、恒河猴和黑猩猩；以猪HEV感染过的猪肝、心、胰(静脉接种)和骨骼肌匀浆物、粪便(口服接种)再感染SPF猪，发现只有接种肝匀浆物的猪在3-7和14-20DPI出现抗体转阳和病毒血症。外环境中HEVRNA污染严重，如印度垃圾（11%）、西班牙垃圾（43.5%）、美国、法国。现有垃圾处理方法只对HAV有效，但对HEV效果不大。2003年Lancet：3例食用被HEVRNA污染的鹿肉均发生急性戊型肝炎；2003年

JGenVirol:日本在超市的猪肝中查到HEVRNA;印度（2003年8月）、江苏连云港（2003年5月）发生戊肝暴发。戊肝是一种人兽共患病!万例以上的戊肝暴发年份国家.城市病例(万)孕妇病死率(%)1955~56印度.新德里2.910.51955~56前苏联.吉尔吉斯共和国1.118.01973~74尼泊尔.加德满都山峡1.020~251976~77缅甸.曼德勒市2.018.01978~82印度.克什米尔5.2NA1981~82尼泊尔.加德满都山峡1.220~251986~88中国.新疆12.0NA1988~89索马里.谢贝利河下游1.1417.01991印度.坎普尔7.9NA戊型肝炎肆虐日本感染者可能已达到650万人新华网东京2002年7月23日电(记者何德功)

一向被认为只在卫生条件恶劣的发展中国家流行的戊型肝炎如今在日本已经开始肆虐。日本国立感染研究所的全国调查表明，日本国民每20个人中可能就有1人感染戊型肝炎病毒，而全国戊型肝炎病毒感染者可能达到650万人。

日本国立感染研究所利用高精度抗体检查药物，抽样检查了1993年以后血库中保存的血清，其中日本北部、中部和南部各300人。分析结果表明，共有49人的血清存在戊型肝炎抗体，而且来自三个地区的人血清中都有感染者，这说明戊型肝炎感染范围涉及全国各地。其中，日本中部地区感染率最高，感染率占14.1%。另据由全国21所国立医院、国立疗养所组成的肝病共同研究组调查表明，从1990年以后各医院诊断为原因不明的242位急性肝炎患者血清中，发现45人有戊型肝炎病毒，占18.6%。日本戊型肝炎感染途径也已初步查明。枥木县自治大学冈本宏明教授等人在本县20个养猪场抽样检查了86头猪的血液，其中在3个养猪场发现3头小猪有戊型肝炎病毒，因此初步断定日本戊型肝炎为“人畜共同感染症”。至于猪通过什么样的方式把病毒传染给人，现在还在