乳痛宁对大鼠乳腺增生病模型的作用效果和机理

乳痛宁对大鼠乳腺增生病模型的作用效果和机理

乳房增生是老年人的常见病。由于乳腺癌增生具有潜在的损伤风险，因此没有必要忽视它。西药治疗本病效果虽好,但副作用较大,因此传统的中成药仍是目前国内治疗乳腺增生病的首选药物,并已通过现代医学手段阐述了其药理和药效。乳痛宁胶囊由鹿角、香附、三棱、莪术等14味中药组成,临床应用多年,疗效确切,本研究采用大鼠乳腺增生动物模型探讨乳痛宁的作用机制,为其广泛应用提供可靠的实验依据。1免疫组化染色超敏试验剂以及生物素化二抗工作液1.1实验动物及分组Wistar成年雌性未孕大鼠50只,体重(220±15)g,45～55日龄,由吉林大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为正常对照组、模型组及低、中、高剂量乳痛宁组(每组各10只)。1.2实验药品及试剂苯甲酸雌二醇注射液及黄体酮注射液,上海第九制药厂出品。乳痛宁胶囊由吉林大学第一医院制剂室生产并提供。雌二醇、孕酮等激素测定用的放射免疫试剂盒为北京科美东雅生物技术有限公司出品。免疫组化染色超敏试剂盒由福州迈新生物技术开发有限公司出品。生物素化二抗工作液由博士德生物工程有限公司出品。1.3乳腺增生动物模型的制作每只实验大鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液,0.5mg·kg-1,每天1次,连续25d。随后注射黄体酮注射液,5mg·kg-1,每天1次,连续5d,建立大鼠乳腺增生病模型。正常对照组大鼠每天肌注相应体积的生理盐水。正常饲养30d,游标卡尺测量大鼠第2对乳头直径。实验大鼠第2对乳头直径与正常对照组相比明显增大(P<0.05),模型制作成功。1.4方法用乳痛宁胶囊配成溶液(低、中、高剂量分别为70、140和280mg·kg-1)对乳痛宁各组大鼠进行灌胃,每天2次,连续30d。正常对照组和模型对照组的大鼠则灌服相应体积的生理盐水。实验结束后将大鼠用乙醚麻醉脱颈椎处死,眼球取血,离心分离血清,送本院核医学科检测血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、催乳素(PRL)、促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)及睾酮(T)含量;取下胸部第2对完整乳房,游标卡尺精确测量左右两个乳头直径;取乳腺组织,多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色,光镜下观察。1.5数据分析数据以ˉx±sx¯±s表示,用SAS统计软件进行分析,组间比较采用F检验。增生率的比较采用χ2ΜΗ检验。2结果2.1水/2m型m模型组大鼠的第2对乳头直径[(1.51±0.19)mm]与正常对照组大鼠[(0.75±0.08)mm]比较明显增大(P<0.05)。乳痛宁灌胃30d后,中、高剂量乳痛宁组大鼠第2对乳头直径[分别为(1.31±0.10)和(1.22±0.15)mm]与模型组比较差异有显著性(P<0.05);低剂量组[(1.35±0.11)mm]与模型组比较,差异无显著性(P>0.05)。2.2lh和p含量的比较模型组大鼠血清中的E2、PRL和FSH的含量均显著高于正常对照组(P<0.05),LH和P的含量则显著低于正常对照组(P<0.05)。经过乳痛宁灌胃后,大鼠血清中的E2、PRL和FSH含量均有所降低,LH和P有所升高,中、高剂量乳痛宁组与模型组比较差异有显著性(P<0.05),T无明显变化,见表1。2.3乳痛宁对大鼠乳腺癌增殖的影响乳腺病理切片观察,正常对照组大鼠的第2对乳腺均未发现有乳腺增生病理学改变(图1A,见封二),而模型组大鼠第2对乳腺均表现有典型乳腺增生病理学改变,出现率为100%(图1B,见封二),与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01),轻度增生为7例(35%),重度增生为13例(65%)。①轻度增生表现为小叶内和小叶间纤维组织增多,腺泡扩张或数目增多,但腺泡细胞仍为单层;②增生活跃不仅表现为腺泡增多,且导管上皮增多,呈多层和/或乳头状改变,腺泡细胞排列紊乱乳腺增生呈弥漫性,乳腺的腺泡及导管大量增生,小叶内腺泡密集,大小不等,腺泡腔扩大,导管扩张,分支繁茂,有部分呈囊性增生,腺泡腔和导管腔扩大,腔内出现大量分泌物。经过乳痛宁灌胃后,乳腺腺泡数目及腔内分泌物减少,腺泡开始萎缩,导管管腔变小,体积缩小,部分可接近正常大鼠的乳腺结构。低剂量乳痛宁组轻度增生9例(45%),重度增生11例(55%);中剂量乳痛宁组轻度增生6例(30%),重度增生6例(30%),无乳腺增生8例(40%),与模型组比较差异有显著性(P<0.01);高剂量乳痛宁组轻度增生8例(40%),重度增生4例(20%),无乳腺增生8例(40%),与模型组比较差异有显著性(P<0.01)。可见中、高剂量乳痛宁组作用效果更为明显(图1C,见封二)。2.4大鼠乳腺癌er、pr阳性细胞数量被染为棕黄色粗颗粒状的细胞为ER、PR表达的阳性细胞,模型组大鼠乳腺ER、PR阳性细胞数量较正常对照组显著增多(图2A和B,见封二)。与模型组相比,乳痛宁组大鼠乳腺ER、PR阳性细胞数量减少,其中中、高剂量乳痛宁组效果非常明显(图2C,见封二)。3乳痛宁对大鼠乳腺癌增殖病的作用乳腺增生病是一种由于体内生殖激素分泌失调导致的疾病,治疗乳腺增生病的关键就是调整体内垂体-性腺的激素分泌活动,调整体内激素紊乱水平。常用的西药有三苯氧胺、甲状腺激素类制剂、溴隐亭、丹那唑、酶类、维生素类、小剂量碘剂以及性激素等,西药治疗效果虽好,但副作用大,尤其是三苯氧胺有诱发子宫内膜癌的危险,因此疗效确切且副作用小的中成药逐渐成为患者的首选药物。乳痛宁胶囊由鹿角、香附、三棱、莪术等14味中药组成,方中鹿角散瘀消肿止痛,是治疗乳痞(乳腺增生病)的最主要药物。香附疏肝理气,大黄宣瘀,三棱、莪术破血逐瘀,行气止痛。方中鹿角、香附在国内治疗乳腺增生病的中药复方中有很多报道,疗效确切。本实验模拟人类乳腺增生病的发病机制,使用外源性雌激素和孕激素诱导大鼠发生乳腺增生,结果模型组大鼠100%出现了乳腺增生病,而正常对照组大鼠无一例发生乳腺增生,说明此种方法复制大鼠乳腺增生模型成功。引起乳腺增生的因素很多,雌、孕激素分泌失调是其中最主要的原因,雌、孕激素的长期过度刺激可促使自身ER、PR的合成,ER、PR表达阳性细胞数增多,成为了乳腺增生病的特征之一。中、高剂量乳痛宁灌胃30d后,大鼠的第2对乳头直径明显缩小,大鼠血液中的E2、PRL和FSH降低,而LH和P升高;乳腺组织病理切片观察,大鼠乳腺组织中腺泡和腺管数目减少,体积缩小,可接近正常对照组大鼠乳腺组织结构状态,ER、PR阳性细胞数量明显减少。由此可见,