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文档简介

酶联免疫吸附测定

（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,

ELISA

）

抗原-抗体反应的特点与影响因素反应条件：

自身因素:环境因素:适宜温度电解质酸碱度特点：

特异性可逆性最适比例CompanyLogo凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。补体参与的反应免疫标记技术（immunolabellingtechnique）:用示踪物质标记抗原或抗体，进行抗原-抗体反应的检测。

抗原-抗体反应的基本检测方法CompanyLogo用示踪物质标记抗体或抗原，使其与相应的抗原或抗体反应，使微量的、不可见的反应成为可见的或可测定的。CompanyLogo用FITC-抗IgM单抗计数B细胞免疫荧光技术CompanyLogo课程内容ELISA的原理ELISA的分类间接ELISA的具体操作ELISA在医学中的应用实例CompanyLogoELISA的原理

1.抗原抗体反应的特异性2.抗原或抗体的固相化3.抗原或抗体的酶标记ECompanyLogo间接ELISA实验目的：小鼠IgG免疫兔，检测兔血清中抗小鼠IgG抗体的效价实验材料：包被抗原：小鼠血清待检抗体/一抗：兔抗小鼠IgG酶标抗体/二抗：HRP-驴抗兔IgG聚苯乙烯酶标板水浴箱

移液器枪头包被液：pH9.6的碳酸盐缓冲液

封闭液/

封：5%脱脂奶粉(ALB)稀释液/稀：pH7.40.05M的PBS（磷酸盐缓冲液）

洗液：PBST（PBS+0.05%吐温20）

显色液：四甲替联苯胺(TMB)

终止液/终：2M硫酸阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。鼠IgG(抗原)兔抗小鼠IgG(一抗)HRP-驴抗兔IgG(二抗)免疫兔免疫驴CompanyLogo操作步骤包被：1：2000稀释的正常小鼠血清，4℃过夜封闭：5%脱脂奶粉，37℃，20min加待检抗体：倍比稀释兔抗鼠IgG抗血清，37℃15min加酶标抗体：1:5000稀释的HRP标记的驴抗兔IgG抗血清(已稀释好)，37℃15min加底物液显色→→→→洗涤：3次，1min/次洗涤：3次，1min/次洗涤：3次，1min/次→终止液终止显色（黄）空白对照无显色待测样品显色明显(蓝)EEEE底物液底物、终止液加50ul／孔封一抗二抗无色避光从此步开始本次实验！CompanyLogo倍比稀释法与加样除第一列孔外，先在其余每孔加100ul稀释液(稀)；在第一列孔加入200ul一抗；取100ul加入第二列孔，混匀从第二列孔取100ul液体至第三列孔；。。。。。。AB123456789101112blank

每孔终体积为100ul,上下两排一致一抗

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