生化实验指导书

第一部分生理生化实验目的要求（自学识记）一、 实验课的目的植物生理生化实验课在我院作为一门独立的课程开设。通过实验课，学生可验证和巩固课堂理论知识，初步掌握有关植物生理生化的实验方法和操作技术，培养分析问题和解决问题的能力。二、 实验教学安排及评分方法根据教学大纲及各类学生的不同要求，对本科生开设15个单位时间的实验内容（8个生化实验、7个生理实验），最后安排一个单位时间作为实验操作考试，安排的实验内容既有定量的，又有定性实验。对专科生开设5个单位时间的实验内容，不单独进行实验考试。本科生成绩按百分制计算，分为平时成绩（占80%，每次实验5分，共75分，实验课具体要求考试5分）和考核成绩（占20%）；专科生实验按15%（每次3分）计入理论课成绩中。实验课成绩主要按（1）预习报告（包括提问）；（2）操作；（3）实验结果和结果分析；（4）思考题；（5）态度（包括卫生情况）方面进行综合评分，侧重操作和结果。三、 实验课的具体要求（一） 植物生理生化实验的要求1、 充分预习：预习是做好实验的关键，实验前必须详细阅读实验指导，参考有关理论知识，弄清原理，了解实验过程中的各个环节，注意事项及其仪器使用方法，在自己所备的预习报告书上写一简单提纲，内容包括：实验名称实验目的实验原理；（简单扼要）实验步骤；（简单直观）注意事项等教师课前检查预习报告，发现不做预习报告者一律不给予做实验。2、 认真操作：严格地按照实验步骤独立进行操作，掌握每个实验地关键，明确操作原理，同事细心观察实验中出现的现象。若对实验步骤、材料等有不同看法，提出修改者，需在预习报告中写明，取得老师同意后，方可进行。3、 详细记录实验结果：每次实验过程中，应及时、详细地记录自己实验的一切数据及现象，杜绝抄袭等现象，一经发现该次成绩按0计算。在实验结束后，应交上一份原始记录，经老师阅后，再洗仪器，切记先清洗仪器，以免发现有错时，难以弥补。4、 认真写好实验报告：实验结束后，按照自己的实验结果及老师布置的思考题独立写好实验报告，文字要求简练、明了、准确。实验报告必须独立完成，发现抄袭者、抄袭者和被抄袭者，一律不给予评分。（二） 生理生化实验室规则1、 参加实验者，一律穿鞋进入实验室，实验室禁止抽烟，对待实验操作应认真严肃，并且冷静思考问题，不得在实验室谈笑，喧哗！2、 遵守学校规章制度：因故不能参加实验者必须在课前由组长代交假条（需经系同意），无故不参加实验者按旷课论处，不得补做实验；迟到者扣该实验分20%，迟到超过10分钟，不准进入实验室，也不得补做实验。3、 保持实验室清洁整齐：实验台上务须清净，放置仪器药品要有次序，勿使试剂药品洒在桌面上，进入仪器要遵守仪器室规则，实验完毕，须将试剂药品排列整齐，玻璃仪器洗净，并由组长安排两位同学进行值日。值日生职责：（1）整理台面；（2）打扫地板；（3）倒掉废液；（4）关好门窗水电。4、 养成认真负责的态度：本实验室采取赔偿制度，学生爱护好仪器，不经老师批准，不得随意动实验仪器；打烂仪器要登记，课前按清单清点仪器，发现不够或者有烂，应立即报告老师给予补换，实验完毕洗净放整齐，接受检查合格者方能离开实验室，学期结束，将根据你丢失损坏的多少，酌情赔偿60—100%。5、 仪器的洗涤：普通的玻璃仪器，如烧杯、烧瓶、试管等用水和洗涤粉洗刷即可，定量的玻璃仪器（滴定管、移液管）必要时可用洗液浸泡，用水冲洗后倒置于架上，让水自行流出，不能用布擦拭。6、 废液废物的处理：废液可倒入水槽内用水冲走，废纸、植物材料及固体废物都应倒入废液桶中，不能倒入水槽，以免堵塞水槽。强酸须先用水稀释再倒入废液桶里。7、 冰箱与烘箱：平时门应关紧，放进植物材料或取物品时，应随手关紧，冰箱和保持的温度不得随意改动，冰箱、烘箱内存放物品、实验材料必须注明姓名、药品、材料名称、浓度和时间。8、 贵重精密仪器：天平、分光光度计、pH酸度计及其他有关仪器应重视爱护，使用前，熟悉使用方法、实验中如发生故障，须立即报告实验老师，不得私自动手检修，实验完毕后，应登记姓名及使用情况，切断电源，对于第一次接触的仪器，必须要有教室的指导，弄通性能，严格按照操作规程进行操作。9、 厉行节约：使用的玻璃仪器及其他仪器应细心使用，应尽量避免损失、药品须注意节约。10、 试剂与标准溶液：取用药品后，立即将瓶塞塞紧，放回原位，量取有毒试剂时，须用吸管或量筒，如用移液管时，只能用吸耳球，千万不能用嘴吸，从瓶中取出的试剂，如未用尽，切勿再倒回瓶中，以防混杂。11、 实验室安全：使用酒精、乙醚等易燃的液体时，切不能接近火焰，使用电炉、水浴锅、离心机等仪器时，用完须关掉电源，若不小心引起火焰应先切开总开关，再用沙土、灭火器灭火，如衣服着火，可用水淋或随地翻滚。（三）生理生化仪器室守则1、 不得穿脏鞋进入仪器室。2、 必须熟读有关仪器使用方法，才能进入仪器室操作。3、 一切仪器的使用，必须严格按照操作规程进行，不得随意更改，当仪器出现故障时，应立即报告知道老师，不得自行拆开仪器。4、 正式使用仪器前后，必须检查仪器的性能是否完好，并填写于登记本上。5、 仪器使用完毕，必须保持仪器的干净整齐，然后切断电源，才能离开实验室。四、实验报告格式（务记写上学号）注意：按如下格式书写的正式实验报告分两个不同时间完成：1-3项在上课前写好，4-6项在上课时课堂上完成。1、 实验名称、实验目的、日期、同组者。2、 实验原理。3、 简单的实验步骤和注意事项。以上3项为预习报告内容（在进入实验室前写好，否则不给做实验）4、 实验数据和实验现象。5、 结果计算、结论和结果分析。6、 思考题解答。前五项要求课堂完成缴交，思考题则要求实验后第二天完成。此目的要求学生必须熟记，第一个实验前10分钟进行闭卷考试。实验1 蛋白质的性质实验（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应-、目的和要求：（1） 了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式（2） 了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理（3） 学习集中常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验原理：反应名称反应基团反应产物用途反应现象1、双OHOH测定蛋白缩脲反C~一N—C—C—N一CH厂3肽键铜一铜一双缩脲络合物质含量、鉴定蛋

CTyrRTry应OH苯核反应产物用途反应基团鉴定Try、Tyra一氨基酸［亚氨酸（黄色）］白质水解是否完全鉴定Tyr鉴定Arg、测定Arg含CTyrRTry应OH苯核反应产物用途反应基团鉴定Try、Tyra一氨基酸［亚氨酸（黄色）］白质水解是否完全鉴定Tyr鉴定Arg、测定Arg含量3、黄色反应酮反应4、坂口反应5、乙醛酸反应反应名称反应现象^HC..二NHNH （胍基）Arg测氨基酸量检验氨基酸及蛋白质yn」N吲哚环TryIVHOF—O硝琨酸中间成环VNO2硝基苯酚戒2=\C二C、.、^—尸。NH<O>R2、茚二iL心入、〃LC、N康ONH4C'_c—NCO6、偶氮反应*N'N 丫His* Tyr（咪唑基）FTn-n；、，SO3HNx/NL-产、yN=N~c^f~so3h鉴定HisTyr6、醋酸铅反应-SH CysCyshPbS（黑色1）H2S（臭鸡蛋味）鉴定含S氨基酸CysCysh三、实验内容（一） 双缩脲反应1、 操作方法：取一支试管，加入卵清蛋白溶液约1毫升和10%NaOH约2毫升，摇匀，再加1%CuSO4溶液两滴，随加随摇。观察是否有紫玫瑰色的出现。2、试剂：（1）10%NaOH （2）1%CuSO4 （3）2%卵清蛋白溶液（二） 茚三酮反应1、 操作方法：（1） 取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1%前三酮溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色是否由粉红色变紫红色再变蓝色。（2） 在一块小滤纸上滴一滴0.5%的甘氨酸溶液，风干后再在原处滴一滴0.1%前三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察是否有紫红色斑点的出现。2、 试剂：（1） 0.5%甘氨酸溶液 （2）0.1%前三酮水溶液 （3）0.1%前三酮一乙醇溶液（4）蛋白质溶液：2%卵清蛋白或鸡蛋青溶液（蛋青：水=1：9）（三） 黄色反应1、操作方法向6个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可稍放置一会或微火加热，待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10%NaOH溶液至碱性，

观察颜色变化。管号123456材料鸡蛋清液指甲头发0.5%苯酚0.3%色氨酸0.3%酪氨酸（滴）4少许少许444浓硝酸（滴）22020444现象加入NaOH呈碱性后现象变化2、试剂：（1）鸡蛋清溶液 （2）头发 （3）指甲 （4） 0.5%苯酚 （5）浓硝酸（6）0.3%色氨酸溶液（7）0.3%酪氨酸（8）10%NaOH（四）坂口反应（可定性鉴定含有精氨酸的蛋白质和定量测定精氨酸）1、操作方法：向各管中按下表加入试剂，记录出现的现象^剂管（滴）x——、—H2O0.3%精氨酸蛋白质溶液20%NaOHa一萘酚NaBrO现象记录1005531241053135005312、试剂：（1）0.3精氨酸 （2）蛋白质溶液（鸡蛋清：水=1：20） （3）20%NaOH（4）NaBrO溶液：2克漠溶于100ml5%NaOH中，置棕色瓶中，可在暗处保存两周（5） 1%a一萘酚乙醇溶液，临用时配制

（五）乙醛酸反应1、操作方法：取3支试管，编号，分别按下表加入蛋白质溶液，色氨酸溶液和水，然后各加入冰醋酸2毫升，混匀后倾斜试管，沿壁分别缓慢加入浓硫酸约1毫升，静置，观察各管液面紫色环的出现，若不明显，可于水浴中微热。试管\剂H2O0.3%色氨酸（滴）蛋白质溶液（滴）冰醋酸（ml）浓硫酸（ml）现象记录15212412135212、试剂：（1）蛋白质溶液（鸡蛋清：水=1：20） （2）冰醋酸 （3）0.3%色氨酸溶液（4）浓硫酸（分析纯）（六）偶氮反应1、操作方法：取三支试管，编号，按下表所示顺序和剂量加入试剂，并观察有色产物形成。剂管\滴'——、——0.3%组氨酸0.3%酪氨酸鸡蛋清偶氮试剂20%NaOH溶液现象记录1482248234822、试剂：（1）鸡蛋清 （2） 0.3%组氨酸溶液（3） 0.3%酪氨酸溶液（4） 20%NaOH（5）偶氮试剂：溶液A：5克亚硝酸钠溶于1000ml水中；溶液B：5克对氨基苯磺酸溶于1000ml水中，溶解后再加入5ml浓硫酸。A、B溶液分别保存在密闭瓶中，用时以等体积混合。（七）醋酸铅反应1、 操作方法：向试管中加入10%醋酸铅溶液1毫升，再加10%NaOH至产生的沉淀完全溶解为止，摇匀。加入被水稀释一倍的鸡蛋清0.4毫升，混匀，小心加热，至溶液变黑后，加入浓盐酸数滴，嗅其味，并将湿润醋酸铅试纸置于管口，观察其颜色的变化。2、试剂：(1)蛋白质液(鸡蛋清：水=1：1) (2)10%NaOH(3)浓盐酸(4)醋酸铅试纸，用10%醋酸铅水溶液浸泡滤纸后晾干。三、注意事项1、 实验内容繁多，请认真预习、操作2、 操作请按步骤进行思考题：1、 如果蛋白质水解后双缩脲反应呈阴性，对水解作用的程度可作出什么结论？2、 茚三酮反应的阳性结果为何颜色？能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质存在？3、 黄色反应的阳性结果说明什么问题？4、 为什么蛋清可作为铅或汞中毒的解毒剂？实验2 蛋白质的性质实验(二)蛋白质的沉淀反应一、 目的和要求：1、 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。2、 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。3、 了解蛋白质变性与沉淀的关系。二、 原理在水溶液中的蛋白质分子由表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类：可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或低温下用乙醇(或丙酮)短时间作用于蛋白质，提纯蛋白质时，常利用此类反应。不可逆沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大变化，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中，加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与金属例子或某些有机酸的反应都属于此类。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出，因此变性的蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。三、操作方法：（1） 蛋白质的盐析加5%卵清蛋白溶液2毫升于试管中，再加等两的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀，倒出少量浑浊沉淀，加少量水，是否溶解？为什么？将管内溶液过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白，取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，再观察沉淀的再溶解。（2） 重金属离子沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白质溶液2毫升，再加入3%AgNO31—2滴，振荡试管，由沉淀生成，放置片刻，倾出上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？注意使用醋酸铅或硫酸铜沉淀蛋白质时不可过量，否则引起沉淀的再溶解，不妨以实验验证之，取一支试管加入约1毫升蛋白质溶液，加入1%CuSO4观察至有沉淀，再继续加入过量的CuSO4,观察沉淀消失，当然也可用0.5%的醋酸铅进行验证。（3） 某些有机酸沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白质液2毫升，再加入1毫升5%三氯乙醇溶液，振荡试管，观察沉淀的生成，放置片刻，倾出上清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。（4） 有机溶剂沉淀蛋白质取一支试管，加入2毫升蛋白质溶液，再加入2毫升95%乙醇，混匀，观察沉淀的生成。（5） 加热沉淀蛋白质几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固，变成不可逆的不溶状态，盐类和氢离子浓度对蛋白质加热凝固有很大影响，少量盐类促进蛋白质的加热凝固，当蛋白质处于等电点时，加热凝固最完全，最快速。在酸性或碱性溶液中，蛋白质分子带有正电荷或负电荷，虽加热蛋白质也不凝固，若同时有足量的中性盐存在，则蛋白质可因加热而凝固。取5只试管，编号，按下表加入有关试剂，将各管摇匀，观察，然后放入沸水浴中加热10分钟，注意观察比较各管的沉淀生成情况。试管、剂号、蛋白质溶液0.1%醋酸10%醋酸饱和NaCl10%NaOH蒸馏水实验结果110滴7滴210滴5滴2滴310滴5滴2滴410滴5滴2滴510滴2滴5滴四、试剂与材料蛋白质溶液：5%卵清蛋白液或鸡蛋清的水溶液(蛋清：水=1：9)3%AgNO395%乙醇5%三氯乙酸饱和硫酸铵溶液硫酸铵结晶粉末0.1%醋酸10%醋酸饱和NaCl10%NaOH思考题：1、 为什么鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂？2、 如何解释上述实验现象？实验3 酶的抑制剂与激活剂及温度对酶活性的影响一、 目的和要求：1、 加深对酶性质的认识2、 了解酶促反应的激活与抑制，学习检测激活剂和抑制剂影响酶反应的方法和原理。二、 实验原理：酶的活性常受到某些物质影响，有些物质能增加酶的活性，称为酶的激活剂；另一些物质则降低酶的活性，称为抑制剂。很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性(值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则成为该酶的抑制剂，NaCl是唾液淀粉酶的激活剂，但NaCl浓度到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活性)。酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最大，大多数动物酶的最适温度为37-40°C。植物酶的最适温度为50-60°C。酶对温度的稳定性与其存

在形式有关，有些酶的干燥剂，虽加热到100°C，其活性并无明显改变，但在100r的溶液中却很快的完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。三、操作方法1、酶的激活剂与抑制剂管号12340.1%淀粉溶液（ml）1.51.51.51.51%CuSO4(ml)0.51%NaCl(ml)0.51%Na2SO4(ml)0.5蒸馏水（ml）0.5酶（ml）0.50.50.50.537C恒温水浴保温10分钟（注）碘化钾一碘液（滴）1—21—21—21—2现象［注］保温时间根据个人唾液淀粉酶活力调整2、温度对酶活力的影响淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色，紫色，暗色或红色。最简单的糊精遇碘不呈蓝色。麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。取3支试管，编号后按下表加入试剂，摇匀，将2号、3号两试管放入37C恒温水浴中，1号管放入冰水中，10分钟后取出，（将1号管内液体分为两半）用碘化钾一碘溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果，将1号管中剩下的一半溶液放入37C水浴中继续保温10分钟后，再用碘液检验，结果如何？管号预处理加底物处理检测11ml酶液冰浴5分钟每管加入0.2%淀粉1.5ml冰浴10分钟分两半保t对。(比较一尸一半在37C水浴10分钟后，加I21-2滴1一半立即加I21-2滴，留此半管以便和另一半比上述两半颜色的差别)21ml酶液/37°C水浴10分钟加I21-2滴31ml酶液沸水浴5分钟37C水浴10分钟加I21-2滴四、试剂稀200-500倍的新鲜唾液0.2%淀粉的0.3%氯化钠溶液，需新鲜配制碘化钾一碘溶液，20克碘化钾及10克碘溶于100毫升蒸馏水中，用前稀释10倍。思考题：1、 试说明酶的激活剂与抑制剂实验中，3号管的意义，并推断出C「和Cu2+各是唾液淀粉酶的激活剂还是抑制剂？2、 什么是酶的最适温度？它是特征常数吗？与哪些因素有关？有何实践意义？3、 为什么温度会影响酶的活性？实验4pH对淀粉酶活性的影响一、 目的和要求：加深对酶性质的认识，了解几种常见酶的最适pH值。二、 原理：酶的活性受环境pH的影响极为显著。通常各种酶只有在一定的pH范围内才能表现出它的活性。一种酶表现其活性最高时的pH值，称为该酶的最适pH。低于或高于最适pH时，酶的活性逐渐降低，不同酶的最适pH不同。酶的最适pH值，受到底物性质和缓冲液性质的影响。唾液淀粉酶的最适pH约6.8,但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4-6.6，在醋酸缓冲液中则为5.6。三、操作方法pH值对酶活性由影响，环境pH越远离最适pH值，酶活性越低。唾液淀粉酶能催化水解淀粉为还原性的麦芽糖、单糖。通过3、5一二硝基水杨酸（DNS）与产物反应成有色物质，有色物质越多，溶液颜色越深，依此颜色的相对深浅可推知酶的相对活性大小。按下表加入试管相应试剂，调整好保温时间，一般的保温时间为5-10分钟。如果保温5分钟各管反应液加DNS后颜色过深，则应吧唾液淀粉酶再适当稀释至获满意效果为止，测出各管OD540值，以OD值为纵坐标，作出一个表征pH-酶活性关系图，并确定在此条件下酶的最适pH值。试管编号对照管123456淀粉缓冲液pH值右边任意一个pH值5.86.26.66.87.28.0磷酸缓冲液用量（ml）2.52.5淀粉溶液（内含0.5%NaCl）（ml）2.52.0淀粉酶液（ml）00.5［注］37°C保温（分钟）552mol/LNaOH(ml)0.50.5DNS(ml)0.50.5沸水浴（分钟）55冷却流水冷却到室温OD5400［注］对于保温时间要根据个人唾液淀粉酶活性大小而进行调整，直至各管反应后颜色差异较大，清楚易辨。一般保温约为5-10分钟。四、仪器与试剂1、仪器（1） 试管10支（2） 习惯1mlX5，5mlX1（3） 电炉2、试剂稀200-500倍的新鲜唾液；配制pH分别为5.8；6.2；6.8；7.2；8.0,浓度为0.1mol/L的磷酸钠缓冲溶液底物(淀粉缓冲液)，5克可溶性淀粉，加入相应pH的50ml缓冲液调成糊状，将次糊状物加到煮沸约500ml对应pH的磷酸缓冲液中，继续煮沸1分钟，然后冷却到室温，并用相应pH的缓冲液稀释至1升。3、5—二硝基水杨酸盐试剂：①10克硝基水杨酸溶于200毫升2MNaOH；②酒石酸甲钠300克溶于大约500ml水中①与②混合，用水配到1升。思考题：1、 pH影响试验中，试剂1%NaCl、2MNaOH，DNS各有何作用？2、 pH对酶活性有何影响？什么是最适pH?与哪些因素有关？实验5维生素C的定量测定、目的:学习维生素c定量测定法的原理和方法。进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技能。二、原理：还原型抗坏血酸能还原染料2,6—二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2,6—二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。

HOIlHOOHUH+2,6-二氯酚靛酚(红色)HOIlHOOHUH+2,6-二氯酚靛酚(红色)还原型抗坏血酸OHH—C—'I 还原型力6-二氯酚靛酚(无色)HO—CHCH2OH脱氢抗坏血酸因此，可用2,6一二氯酚滴定样品中还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使墙定液呈谈红色，即为终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所合的还原型抗坏血酸量成正比。三、实验材料与仪器：实验材料：新鲜辣椒吸管1.0m1(X1)、10m1(X1).容量瓶100ml(X1)。锥形瓶100m1(X3)。微量滴定管2m1(X1).研钵。漏斗O8cm（X2）o四、 试剂2%草酸溶液：草酸2g,溶于100m1蒸馏水。1%草酸溶液：溶1g草酸于100ml蒸馏水。标准抗坏血酸溶液：准确称取50.0mg纯抗坏血酸，溶于1%草酸溶液，并稀释至500mL。贮棕色瓶，冷藏，最好临用时配制。1%HCl溶液。0.1%2，6一二氯酚靛酚溶液，溶500mg2，6一二氯酚靛酚于300m1含有104mgNaHC03的热水中，冷却后加水稀释至500m1，滤去不溶物，贮棕色瓶内，冷藏（4°C约可保存一星期）。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。五、