临床检验技术操作手册

第一节临床血液学检查血常规检查【标本】抗凝静脉血（有些仪器也可用末梢血）。【方法】血液细胞自动分析仪测定法。【试剂】血液细胞自动分析仪配套试剂。【操作】详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。【附注】1.血常规涉及白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数等项目。这些项目亦有对应的手工办法，详见有关资料。2.半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均规定用抗凝静脉血。其优点为：（1）静脉血能对的地反映病人实际状况，重复性好；（2）利于延长仪器的使用寿命；（3）解决了采血盘的交叉感染问题等。3.血细胞计数应用EDTA·K2：为抗凝剂（EDTA·K2·2H2O1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。4.贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超出6h；如需制作血涂片应在2h内完毕。5.测定前必须将EDTA·K2抗凝血充足混匀。6.血细胞分析仪测定最适温度为18～22℃，低于15℃或高于7.血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的任何一项有明显升高或减少；白细胞分类出现异常成果（中间细胞群百分率≥8.0%）；红细胞、白细胞和血小板的任何一种直方图出现异常图形等状况，须用显微镜检查及分类。嗜酸性粒细胞直接计数【标本】末梢血或抗凝静脉血。【方法】直接计数法。【试剂】1.Hinkelmann液；2.乙醇-伊红稀释液；3.伊红-丙酮稀释液。【操作】1．小试管中加稀释液0.38ml。2．常法取末梢血20ul，加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充池。3．静置3～5min，用低倍镜（必要时用高倍镜）镜下计数10个大方格内嗜酸性粒细胞数。总数×20×106=嗜酸性粒细胞/L。【附注】1.血液稀释后应于1h内计数完毕。2.充池前要充足混匀，但又不适宜用力过猛。3.住院病人采集标本时间力求统一，以免受日间生理变化的影响。红细胞沉降率测定【标本】抗凝静脉血。【方法】魏氏法。【试剂】109mmol/L枸橼酸钠溶液。【操作】1.3mm×100mm试管1支，在2ml容量处刻上记号，加抗凝剂0.4ml。2.静脉采血后，取下针头，加血至刻度，旋转混合。3.用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混匀血液至"0"刻度处，拭去管外附着的血液，将管垂直立在血沉架上。4.记时，室温中静置1h，观察血浆高度，以红细胞下沉的毫米数报告之。【附注】1.红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量与质，血浆中脂类的量和质，红细胞的大小与数量，与否成串钱相聚以及血沉管的内径、清洁度、放置位置与否垂直，室温高低等因素都有关系。2.标本采集时应空腹。3.血液和抗凝剂的比例要精确。4.血沉管内径要原则（2.5mm），放置要垂直。5.做血沉的标本要在采集后3h内测定，并充足混匀。6.室温过低、过高和贫血时，对成果有影响。为此，血沉应尽量放在18～25℃室温下测定。室温过高时血沉加紧，能够按温度系数校正。室温过低时血沉减慢，无法校正。网织红细胞计数【标本】末梢血或抗凝静脉血。【方法】百分计数法。【试剂】10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液或10g/L煌焦油蓝ACD溶液。【操作】1.于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。2.加入末梢血或静脉血2滴于上述试管中，混匀。3.静置15～20min后，取用1滴制成薄片。4.油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。【附注】1.活体染色时间不能过短，室温低时，放37℃2.网织红细胞也可用Miller窥盘计数法、荧光染色或流式细胞仪计数。

嗜碱性点彩红细胞计数【标本】末梢血。【方法】百分计数法。【试剂】1.甲醇；2.碱性亚甲基蓝染液（保存2～3周）。【操作】1.按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。2.用碱性亚甲基蓝染液染色1～2min，水洗待干。3.用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率报告。【附注】1.用碱性亚甲基蓝染液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点彩呈深蓝色。2.也可用瑞氏染色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。3.由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。红斑狼疮细胞检查【标本】静脉血。【方法】改良血块法。【操作】1.抽取患者血液2～3ml，注于干燥试管内，于室温待凝。2.于凝固刚形成时，用竹签将凝块搅碎，并将残存凝块除去。3.以r/分钟离心沉淀10分钟，使白细胞聚集在同一层面，以利于狼疮细胞形成。4.置37℃温箱内温育2h5.取出白细胞层及其上下各少量，置红细胞比积管中，以r/分钟离心，沉淀10分钟。6.吸去上层液，轻轻吸取白细胞层，制成薄片3～4张。7.以瑞氏染液染色、镜检。【附注】1.整个操作时间不能超出3h。2.注意与果馅细胞鉴别。一氧化碳血红蛋白定性实验【标本】末梢血。【试剂】50g/LNaOH。【操作】1.取试管2支，各加蒸馏水3～5ml，一管加患者血液三滴，另一管加正常人对照血3滴，混匀。此时，如患者血中有一氧化碳，则血液呈樱桃红色。2.每管各加50g/LNaOH1滴，轻轻混合，正常对照管呈绿褐色，如患者血液中有一氧化碳血红蛋白，则溶血液仍呈樱桃红色，为阳性；如与正常对照色泽一致为阴性。【附注】1.观察成果须及时，否则樱桃红色逐步退去，不易分辨。2.本实验敏感性较差，血液中一氧化碳含量到一定程度时才显阳性。如患者事先已采用通气方法，血中一氧化碳含量下降，实验可阴性。但临床症状、体征仍可能存在。（徐珍贵朱炎）第二节体液及排泄物检查尿液检查尿常规检查【标本】新鲜尿液。【方法】化学试带法。【试剂】各型号尿液化学分析仪配套试带。【操作】详见自己实验室的尿液化学分析仪使用手册。【附注】1.尿常规检查使用尿液化学分析仪，现在能进行8～10项检测（PH、蛋白、葡萄糖、酮体、隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、比重、白细胞）。这些项目亦有对应的手工办法，详见有关资料。2.必须理解所用试带各膜块注意事项、药品干扰。3.要注意尿液化学分析仪测定成果与手工法的差别，必要时用手工法复查。4.尿液化学分析仪检测仅是一种过筛手段，当蛋白、隐血、白细胞等出现异常成果（如尿蛋白“＋”或以上）时，应进行镜检。5.尿液颜色、透明度等普通性状异常时也应报告。

本－周氏（Bence-Jones）蛋白定性检查【标本】新鲜尿液。【方法】热沉淀反映法。【试剂】1.200g/L2.2mol/L醋酸盐缓冲溶液（pH4.9±0.1）。【操作】1.先将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查，如呈阴性反映，则可认为尿液标本中本－周氏蛋白阴性。2.取透明尿液4ml于试管中，再加入醋酸盐缓冲液1ml，混匀后，放置56℃水浴中15分钟。如有浑浊或出现沉淀，再将试管放入沸水中，煮沸3分钟，观察试管中浑浊或沉淀的变化，如浑浊变清、浑浊削弱或沉淀减少，均提示本-周氏蛋白阳性。若煮沸后，浑浊增加或沉淀增多，表明此尿液中尚有其它蛋白质，此时应将试管从沸水中取出，立刻过滤。如滤液开始透明，温度下降后浑浊，再煮沸时又透明，提示本-【附注】1.过多的本-周氏蛋白，在90℃2.煮沸过滤除去尿中白、球蛋白时，动作要快速，并需保持高温，否则本-周氏蛋白也会滤去。肌红蛋白定性实验【标本】新鲜尿液。【试剂】1.10g/L邻甲联苯胺（о-tolidine2.过氧化氢醋酸溶液；3.硫酸铵粉末。【操作】1.首先测试尿液中有无血红素的存在，即依次加入新鲜尿液4滴，邻甲联苯胺溶液2滴，混和后，加入过氧化氢醋酸溶液3滴，如有蓝色或蓝绿色出现，表达尿中有Hb或/及Mb的存在。2.离心或过滤使尿液透明，吸取5ml，加入硫酸铵粉末2.8g，使之溶解混合，约为80%饱和度，静置5分钟，用滤纸过滤。取滤液重复测试有无血红素存在，如仍有，表达Mb阳性。如不显蓝色，表达血红素已被硫酸铵沉淀，为Hb阳性。【附注】1.标本必须新鲜，并避免激烈搅拌。2.本法为过筛实验，在少数正常人中可出现假阳性。尿含铁血黄素定性实验【标本】新鲜尿液。【方法】罗斯（Rous）法【试剂】1．20g/L2．3%盐酸。【操作】1.取混匀的新鲜尿液15ml，以r/min离心5min，倾去上清液。2.在沉渣中加入新鲜配制的20g/L亚铁氰化钾水溶液及3%盐酸液各2ml，充足混匀，室温静置10min。3.再离心沉淀，取沉淀物涂片，加盖玻片后用高倍镜（必要时用油镜）检查。4.如见有分散或成堆蓝色闪光颗粒（直径1～3um）即为阳性，如在细胞内则更为可信。【附注】1.全部试管、玻片、试剂均应避免铁剂污染，以免出现假阳性。2.普通应做阴性对照，如亚铁氰化钾与盐酸混和后即显深蓝色，表达试剂已污染高铁，不适宜再用。

尿乳糜定性检查【标本】新鲜尿液。【试剂】1.乙醚（AR）；2.苏丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液。【操作】1.取尿5～10ml，加乙醚2～3ml，混合振摇后，使脂肪溶于乙醚。静置数分钟后，r/min离心5min。2.吸取乙醚与尿液的界面层涂片，加苏丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液1滴。3.镜检观察与否有红色脂肪小滴。【附注】1.尿液中加少量饱和氢氧化钠，再加乙醚，有助于澄清。2.将分离的乙醚层隔水蒸干，若留有油状沉淀，也可加苏丹Ⅲ，镜检证明有无脂肪小滴。

尿胆色素原定性实验【标本】新鲜尿液。【试剂】1.对二甲氨基苯甲醛试剂；2.饱和醋酸钠溶液；3.氯仿；4.正丁醇。【操作】1.在试管中，加入尿标本2ml及对二甲氨基苯甲醛试剂2ml，混合。2.立刻加饱和醋酸钠溶液4ml，混合，加氯仿3ml，振摇混合后，上层水溶液呈红色者为阳性反映。3.阳性成果应用下法证明：如尿胆原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿胆原，应多次用氯仿抽提，直至氯仿层呈淡粉红色或无色为止，再观察上层水溶液色泽。如上层水溶液为红色时，再加正丁醇4ml抽提，如水溶液仍呈红色则证明尿中胆色素元为阳性。【附注】1.醋酸钠溶液必须为饱和液。2.当尿胆色素原浓度太高时，应将尿标本稀释25～100倍。3.尿液必须新鲜，不能久置。

尿苯丙酮酸定性实验【标本】新鲜尿液。【方法】三氯化铁法。【试剂】1.100g/L2.磷酸盐沉淀剂。【操作】1.尿液4ml加磷酸盐沉淀剂1ml，混匀，静置3min，如出现沉淀，可用滤纸过滤或离心除去。2.滤液中加入浓盐酸2～3滴和100g/L三氯化铁溶液2～3滴，每加1滴立刻观察颜色变化。以尿液显蓝绿色并持续2~4min，为阳性。【附注】1.尿中若含酚类药品（如水杨酸制剂）及氯丙嗪，也可与氯化铁结合显色，实验前应停用这类药品。胆红素也可造成假阳性。2.小儿出生后6周内不易查出。故于出生6周后检查为宜。3.大多数苯丙酮尿症患者的尿液可出现阳性。但约1/4～1/2病例可能会漏检4.亦可采用2，4-二硝基苯肼法。

尿沉渣检查【标本】新鲜尿液（最佳采集清晨中段尿）。【方法】显微镜检查法。【操作】1.取刻度离心管，倒入混合后的新鲜尿液10ml，1500r/min离心5min。2.弃去上层清液，留下0.2ml沉渣，轻摇离心管，使尿沉渣有形成分充足混匀。3.取尿沉渣0.02ml，滴在载玻片上，用18mm×18mm的盖玻片覆盖。4.镜检观察，用10×10镜头，观察其中有形成分的全貌及管型。用10×40镜头观察鉴定细胞成分及计算数量，应观察10个视野所见最低和最高值，统计成果。管型用高倍镜鉴定，但计数数量按低倍镜观察20个视野，算出一种视野的平均值，统计成果。尿结晶和盐类数量以每一高倍视野＋、2＋、3＋、4＋报告。【附注】1.清晨空腹第一次尿（普通状况应采集中段尿），应在1h内送检。2.见到多个上皮细胞也应报告，报告方式参考白细胞。3.亦可采用染色尿沉渣镜检。

尿沉渣定量检查【标本】新鲜晨尿。【方法】一小时尿沉渣计数法。【操作】1.标本收集：患者先排尿弃去，精确收集3h尿液于干燥容器内送检（标本留取时间5:30～8:30）。2.精确测量3h尿量，充足混合。取混匀尿液10ml，置刻度离心管中，1500r/min离心5min，用吸管吸弃上层尿液9ml，留下1ml，充足混匀。吸取混匀尿液1滴，注于血细胞计数板内。细胞共数10个大方格，管型共数20个大方格。最后计算出红细胞/h、白细胞/h、管型/h。【附注】1.尿液应新鲜，PH应在6下列。2.尿液比重最佳在1.026以上。3.如尿液中含多量磷酸盐时，应加少量稀醋酸液（切勿加多），使其溶解；含大量尿酸盐时，应加温使其溶解。4.亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自动分析仪进行尿沉渣定量检查，详见有关资料。

绒毛膜促性腺激素检测【标本】新鲜尿液。【方法】金标抗体检测法。【操作】见试剂盒阐明书。【附注】若质控点和测定点均不呈现红色，表达试剂失效。

粪便检查粪便的显微镜检查【标本】新鲜粪便。【方法】直接涂片镜检法。【操作】1.干净玻片上加等渗盐水1～2滴，选择粪便的不正常部分，或挑取不同部位的粪便做直接涂片（最佳取大玻片，制成涂片后，应覆以盖片。涂片的厚度以能透过印刷物笔迹为准）检查。2.在涂片中如发现疑似包囊，则在该涂片上滴加1滴碘液，在高倍镜下认真鉴别，如仍不能决定时，可取全量粪便浓缩法检查。

隐血实验【标本】新鲜粪便。【方法】免疫学检测法。【操作】取一片干净干燥的载玻片，滴加2～3滴蒸馏水，取粪便少量，调成均匀混悬液。取粪便隐血试纸条，按阐明书操作，将试纸条的反映端浸湿。在5min内观察成果。以反映线及质控线均呈蓝色带为阳性。【附注】1.若两条线均不显色，阐明试纸条失效。2.本法由于间断性出血或出血在粪便中分布不均等因素，可造成假阴性成果。3.本法由于药品等因素，对正常人检查有时会得到阳性成果。4.亦可采用化学试带法、邻甲联苯胺法、愈创木酯法等。收集标本前3日应禁食动物性食物及富含叶绿素食物、铁剂、中药。但本法不受动物血红蛋白的干扰，实验前不须禁食肉类。粪胆素检查【标本】新鲜粪便。【方法】氯化高汞煮沸法。【试剂】饱和氯化高汞溶液。【操作】1.于小试管内置粪便一小块，加饱和氯化高汞溶液数毫升。2.将粪块调匀，加热煮沸3min，立刻观察颜色反映。【附注】1.成果不易鉴定时，应注意粪便颜色，必要时以盐水替代试剂做空白对照。2.当粪便颗粒经煮沸后如有红色又有绿色出现，阐明标本内既含粪胆素又含胆红素，常见于肠炎、腹泻等。

脑脊液检查潘氏（Pandy）球蛋白定性实验【标本】新鲜脑脊液。【试剂】5%苯酚溶液（棕色瓶内保存）。【操作】取试剂2～3ml，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液1～2滴，衬以黑色背景，立刻观察成果，报告阴性或阳性及阳性的程度。

细胞计数【标本】新鲜脑脊液。【试剂】1.细胞计数板；2.红细胞稀释液；3.冰乙酸；4.1%冰乙酸。【操作】1.细胞总数：（1）澄清脑脊液：混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每ul的细胞数。（如细胞较多，可计数一大格内的细胞数×10）。（2）浑浊或带血脑脊液：用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20ul，加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，再乘以50即为每ul脑脊液的细胞总数。2．白细胞数：（1）非血性标本：小试管内放入冰乙酸1～2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3～4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。（2）血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数，成果×稀释倍数。3．细胞分类：（1）直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换成高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞（涉及淋巴细胞及单核细胞）和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表达。若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。（2）染色分类法：如直接分类不易辨别细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃如见有不能分类的细胞，应另行描述报告。【附注】1.脑脊液常规涉及普通性状检查、潘氏（Pandy）球蛋白定性实验及细胞计数。2.计数应及时进行。3.细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。4.计数池用后，应用75%乙醇消毒60min。浆膜腔积液检查浆膜粘蛋白定性实验（Rivalta反映）【标本】新鲜浆膜腔积液。【试剂】冰醋酸。【操作】取100ml量筒，加蒸馏水100ml，滴入冰醋酸0.1ml（PH3～5），充足混匀，静止数分钟，将穿刺液靠近量筒液面逐滴轻轻滴下，在黑色背景下，观察白色雾状沉淀的发生及其下降速度等，报告阴性或阳性及阳性的程度。细胞学检查【标本】新鲜浆膜腔积液。【操作】1.细胞总数及有核细胞计数办法基本与脑脊液同，漏出液中有核细胞数量常在100×106/L下列；渗出液中有核细胞数量较多，常在500×106/L以上。2.细胞分类：穿刺液应在抽出后立刻离心，用沉淀物涂片后以瑞氏染色法进行分类。必要时制备稍厚涂片，在干燥前放置乙醚乙醇等量混合液中固定30min，用苏木素-伊红（HE）或巴氏法染色查找癌细胞。精液检查精子活动率【标本】新鲜精液。【操作】取新鲜标本混匀后，在温热玻片上用高倍镜观察100个精子，计数活动精子与不活动精子的比例，计算精子活动的百分率。【附注】如室温低于10℃时，应将标本先放入37℃温育5～10min精子活力【标本】新鲜精液。【操作】取上述新鲜湿片标本，观察精子的活动力，以0级至Ⅳ级报告。精子计数【标本】新鲜精液。【试剂】精子稀释液。【操作】1.于小试管内加精子稀释液0.38ml，吸液化精液20ul，加入稀释液内摇匀。2.充足摇匀后，滴入血细胞计数池内，静置1～2min，待精子下沉后，以精子头部作为基准进行计数。3.如精子数少，可计数2个大方格内精子数，数得总数乘10万即为每毫升精液内精子数，再换算成×109/L报告。4.如精子数多，可计数5个中方格内精子数，加6个零，即为每ml精液内精子数再换算成×109/L报告。【附注】1.收集精液前应避免性生活3~7天，精液宜用清洁干燥之小瓶收集，避孕套内的精液不适宜采集。收集精液标本后应在一小时内检查，冬季应注意保温。2.出现一次异常成果，应隔一周后复查，重复查2～3次方能得出比较对的的成果。3.如低倍镜、高倍镜检查均无精子，应将精液离心沉淀后再涂片检查，如两次均无精子，报告“无精子”。

精子形态观察【标本】新鲜精液。【试剂】革兰或瑞氏染液。【操作】革兰或瑞氏染色后用油镜观察，报告异常精子的比例。

前列腺液检查【标本】新鲜前列腺液（临床医师作前列腺按摩术后，采集标本于清洁玻片上，立刻送检）。【操作】1.肉眼观：统计液体颜色、与否混有血液、粘稠度（有无脓块）。2.湿片镜检：高倍镜下观察白细胞、红细胞、卵磷脂小体，另一方面为上皮细胞、精子、淀粉样体等，必要时革兰染色查细菌。阴道分泌物检查【标本】阴道分泌物。【操作】1.清洁度：取阴道分泌物，用生理盐水涂片，高倍镜检查，根据所含白细胞（或脓细胞）、上皮细胞、杆菌、球菌的多少，分成Ⅰ～Ⅳ度。2.滴虫检查：在湿片镜下如见梨形，比白细胞大2倍，顶端有鞭毛4根，在25～42℃温度下可活动的滴虫（在严寒天气，标本要采用保温方法），报告之。

3.胃液检查基础胃酸分泌量（BAO）及最大胃酸分泌量（MAO）测定【标本】胃液。【操作】1.先将晨间空腹残存胃液抽空弃去。持续抽取1小时胃液放入瓶内，作为一种标本计胃液量。用酸度计精确测定氢离子浓度（也可用pH纸测定，或做胃酸浓度滴定）。2.一次皮下注射五肽胃泌素（Pentagastrin）6ug/kg，注后每15min收集一份标本，持续抽4次，分别用上法测胃液量、胃酸氢离子浓度。3.根据上述测定值，分别计算出BAO及MAO值。pH值测定【标本】胃液。【操作】可先用pH试纸测定，凡pH值＞3者，用pH计测定氢离子浓度。十二指肠引流液及胆汁检查【标本】胆汁及十二指肠引流液。【操作】1.按照胆汁来源不同，分为甲、乙、丙、丁四管（在容器上必须注明）。2.观察各管胆汁的颜色、透明度、粘稠度。3.测定酸碱度，每管分别统计。4.高倍镜下镜检，注意细胞、寄生虫、结晶等存在的状况。痰液检查显微镜检查【标本】痰液。【操作】选择脓样、干酪样或带脓样血液部分，取1小块置玻片上，直接与生理盐水混合，涂成薄片，加盖片后轻压之，用低倍镜及高倍镜检查。注意有无红细胞、白细胞、上皮细胞、弹力纤维、枯什曼螺旋体、夏科-雷登结晶、胆红素结晶、硫磺样颗粒（放线菌块）、寄生虫卵（可见蛔虫卵、肺吸虫卵）、痢疾阿米巴、真菌孢子、心力衰竭细胞、载碳细胞、癌细胞等。嗜酸性粒细胞检查【标本】痰液。【试剂】瑞氏或伊红-美蓝染色液。【操作】取痰液做直接涂片，干燥后用瑞氏或伊红-美蓝染色液染色，油镜下计数100个白细胞，报告嗜酸性粒细胞百分数。（徐珍贵朱炎）第三节血栓与止血的检查血管壁与内皮细胞检查出血时间（BT）出血时间检测是指皮肤受特定条件的外伤后，出血自行停止所需的时间。此过程反映皮肤毛细血管与血小板互相作用，涉及血小板粘附，血小板活化和释放以及血小板聚集等反映。1.出血时间“测定器法”自肘前窝凹下二横指处，经常规消毒后，使刀片由“测定器”内刺入皮肤，启动秒表，每隔半分钟用干净滤纸吸干流出的血液，直至出血自然停止，按停秒表，统计出血时间。2.Duke法，自耳垂或指尖取血。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）【注意事项】测定器法：1.采用部位应保暖，血液应自动流出。2.由于刺入皮肤的刀片长度和深度均固定，故“测定器法”的成果较为精确。3.滤纸吸干流出血液时，应避免与伤口接触。4.实验前1周内不能服用抗血小板药品，如阿司匹林等，以免影响成果。阿司匹林耐量实验（ATT）口服少量阿司匹林后，可使某些血栓和出血患者的出血时间延长。【办法与操作】定量口服阿司匹林后2h，测定出血时间，当成果可疑时，可于4h后重复测定出血时间一次，详见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【试剂】阿司匹林片（0.3g/片）。【附注】1.服药前出血时间明显延长者，或临床有明显出血症状者，或有阿司匹林禁忌证患者，不适宜作此实验。2.阿司匹林有引发出血副作用，对准备手术或术后1周以内及血友病患者忌作本实验。内皮细胞功效实验血管性假血友病因子抗原（vWF:Ag）测定（ELISA法）【标本】自静脉取血1.0~1.5ml，注入抗凝管〔30mmol/L枸缘酸-枸椽酸钠缓冲液（PH5.0）〕内，（1:9v/v）充足混匀，在1h内分离血浆，立刻测定或放-20℃1【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）【附注】1.对血浆中血管性假血友病因子抗原含量过高的标本，应作稀释后再测定。2.凡ELISA检测中须注意的问题均要重视。3.除此法外，还可选用免疫火箭电泳法或单抗酶联免疫吸附法。6-酮－前列腺素Fla（6-酮－PGFla）测定【标本】采用血浆标本。【办法与操作】ELISA法。现有商品试剂盒出售，严格按阐明书环节操作。【附注】1.如第二抗体为羊抗兔，则不适宜测定兔血标本。2.除ELISA法外，尚有放射免疫法。血小板数量和功效检查血小板计数和平均血小板体积测定血小板计数：目视计数法。【标本】末梢血或抗凝静脉血。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【试剂】1.草酸铵法稀释液。2.许汝和稀释液。【附注】1.血小板稀释液要清洁。防微粒和细菌污染。试管和吸管也应清洁、干净。2.针刺应稍深，使血流畅通。拭去第一滴血后，首先采血作血小板检测，动作要快，避免血小板聚集和破坏。采用标本后尽快计数。3.血液稀释液充足混匀后，滴入计数池内后，要静置10~15min。室温高时注意保持计数池周边的湿度，以免水分蒸发。4.计数时光线要适中，注意有折光性的血小板与杂质灰尘相区别，附在血细胞旁边的血小板也要注意，不要遗漏。血小板计数仪计数【标本】末梢血。【办法与操作】使用血小板计数仪及与其相匹配的稀释液。操作详见仪器使用阐明书。平均血小板体积（MPV）测定【标本】根据仪器的规定用末稍血或静脉取血注入抗凝管（EDTA.Na2或肝素）【办法与操作】自动化血细胞计数仪均可检测血小板功效检查血小板粘附实验【标本】自静脉取血1.0~1.5ml。【方法】1.玻珠柱法：（1）操作：见《全国临床检查操作规程》（第二版）。（2）注意事项：1）取血过程必须顺利，掌握血液通过玻珠柱的速度，流速太快，粘附率减少，流速太慢会使粘附率增高。2）玻珠柱为一次性用品，用后即弃去。3）待用玻珠柱应置于干燥器中贮存，受潮后粘附率下降。2.玻璃滤器法：【标本】自静脉取血1.5ml。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。血小板聚集实验（PAgT）【标本】自肘静脉取血4.5ml注入于含0.5ml109mmol/L枸椽酸钠的硅化离心管内，充足混匀。【试剂】1.富含血小板血浆（PRP）及贫含血小板血浆（PPP）。2.血小板聚集诱导剂ADP、肾上腺素、胶原、瑞斯托霉素（Ristocetin）等。【办法与操作】PAgT比浊法，按《全国临床检查操作规程》（第二版）环节操作。【注意事项】1.血标本中pH6.8~8.5之间时，可测得最佳成果。pH＜6.4或＞10.0时，可使聚集克制或消失。2.阿司匹林、潘生丁、肝素、双香豆素等可克制聚集，特别阿司匹林克制聚集作用时间可持续1周。3.采血后标本应放在15~25℃下，切忌冰箱内保存，并在3h凝血因子检查全血凝固时间检查（CT）【标本】静脉取血3ml。【办法与操作】试管法、硅管法操作参见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】1.静脉取血要一针见血，尽量减少组织液和空气混入。2.水浴箱温度要恒定，过高或过低，可影响成果。活化部分凝血活酶时间测定（APTT）【标本】自静脉取血，用109mmol/L枸椽酸钠作1:9抗凝。【试剂】市售成套试剂。【办法与操作】按试剂及有关仪器阐明书规定进行。【附注】1.标本应及时检测，最迟不超出2h。2.分离血浆应在3000r/min，离心10min。3.本实验较试管法全血凝血时间敏感，能检出因子Ⅷ：C＜25％轻型血友病。血浆凝血酶原时间测定（PT，一期法）【标本】静脉血1.8ml，用109mmol/L枸椽酸钠0.2ml抗凝。【试剂】1.组织凝血活酶浸出液；2.0.025mol/LCaCl2【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】1.采血后宜在1h内完毕，置冰箱4℃保存,不应超出4h，-20℃下可放置2周，-702.水温箱控制在37℃±1简易凝血活酶生成实验（STGT）【标本】取全血0.04ml加5ml蒸馏水，混匀，即成溶血液，备用。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）纤溶系统检查优球蛋白溶解时间测定（ELT）【标本】采用静脉血1.8ml注入含0.2ml109mmol/L枸橼酸钠液中，混匀。【试剂】1.109mmol/L枸橼酸钠液；2.1%醋酸液；3.（pH9.0）硼酸盐缓冲液；4.0.025mol/LCaCl2【办法与操作】加钙法。操作参见《全国临床检查操作常规》（第二版）。【注意事项】1.采血时，止血带不适宜扎得过紧，不得超出5min。2.观察溶解标本以不见絮状物为准。3.当纤溶极度亢进时，体内纤酶原基本被消耗尽时，本实验可呈假阴性。组织纤溶酶原激活物测定（t-pA:A）【标本】自静脉采血。【办法与操作】发色底法。操作见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【注意事项】1.采血时最佳不用止血带，加压后会引发t-pA进入血液，取血后尽快在低温分离血浆。2.标本必须酸化解决，否则受纤溶酶原激活克制物（PAI）的影响较大。纤溶酶原活性测定（PLG:A）【标本】自静脉取血0.9ml,加0.1ml109mmol/l枸橼酸钠液混匀。【试剂】1.0.05mol/LTris缓冲液（PH7.42.尿激酶。3.50%（v/v）甘油溶液。4.50%（v/v）醋酸液。5.正常人混合血浆。6.国产发色底物140450（上海生化所东风试剂公司产品）。【办法与操作】发色底物法。操作参见《全国临床检查操作规程》（第二版）。D-二聚体测定高凝状态的患者，血栓性疾病和弥漫性血管内凝血时，血浆D-二聚体明显升高是诊疗DIC的重要根据。【标本】采静脉血1~1.5ml，注入抗凝管（枸橼酸钠，EDTA.Na2及肝素）内混匀。【办法、试剂与操作】ELISA法，操作严格按商品出售的试剂盒阐明书进行。【注意事项】1.使用的抗凝剂量，不应超出血总体积10%。2.待检血浆在室温保存8h或4℃4天内，D-二聚体含量基本不变，若需长久保存，可置-20℃保存，操作时置于3.市售D-二聚体乳胶试剂盒及金标试剂盒使其检测更为方便，但不能定量。血浆鱼精蛋白副凝固时间（3P）实验【标本】自静脉抽取1.0~1.5ml血，注入枸橼酸钠抗凝管内，混匀。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【试剂】1.109mmol/L枸橼酸钠液。2.10g/L硫酸鱼精蛋白液（pH6.5）。【注意事项】1.本实验不适宜用草酸盐、肝素或EDTA盐作抗凝剂。2.抽血不顺利、抗凝不完全、标本保存于冰箱、实验时间已到未及时观察成果等均可致假阳性成果。3.水浴箱温度太低或纤维蛋白原的含量过低，会出现假阴性成果。血清纤维蛋白降解产物（FDP）测定【标本】采用无溶血的血清。【办法、试剂与操作】ELISA法。试剂现已有商品试剂盒供应，操作按阐明书环节进行。

循环抗凝物质检查凝血酶时间测定（TT）【标本】自静脉取血1~1.5ml，注入枸橼酸钠抗凝管内，混匀。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）【试剂】1.109mmol/L枸橼酸钠液2.凝血酶溶液【附注】1.采血后宜在1h内完毕，置冰箱内保存不应超出4h。2.肝素或EDTA.Na2抗凝血浆不适宜作本实验。血浆肝素或类肝素抗凝物质检查（甲苯胺蓝纠正实验）【标本】静脉枸橼酸钠抗凝血。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】本实验中加甲苯胺蓝后，凝血酶时间缩短5s以上者，提示待检血，有肝素或类肝素增多。蕲蛇酶时间测定（AT）【标本】采静脉血0.9ml加0.1ml（109mmol/L）枸椽酸钠抗凝。【试剂】1.蕲蛇酶溶液0.5mg/支；2.109mmol/L枸椽酸钠液。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。（何金昌徐淑屏）第四节溶血性贫血的检查红细胞渗入脆性实验【标本】1.简易法，静脉血为宜。2.比色法，用肝素抗凝管，抽取静脉血1.0~1.5ml，混匀。【办法及操作与试剂】1.简易法：用配有6号针头的干燥无菌注射器取静脉血1.0~1.5ml，立刻滴入试管架上含有不同量的NaCL及蒸馏水的各管中，每管１滴，贫血患者可加2滴，摇匀，静置，室温2h，观察成果。详见《临床实验诊疗学上册》。2.比色法：见《临床实验诊疗学上册》。【附注】1.简易法：（1）试剂配制要精确，每次配制量不适宜过大，1~2个月内需更换1次试剂。（2）如取耳垂血要使血液流出畅通，如静脉血规定注射器干燥。（3）如用抗凝血，以去纤维蛋白或肝素抗凝血为适宜。（4）如开始及完全溶血的成果不易判断时，可离心后观察。（5）地中海贫血的渗入脆性减少，需作低浓度NaCL液检测。2.比色法：（1）如在室温下实验，需在2小时内比色结束。（2）血与NaCL缓冲液的PH值及温度对检查成果都有一定影响。红细胞孵育后渗入脆性实验【标本】用肝素抗凝血1~1.5ml，混匀后备用。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》第二版【试剂】9g/LNaCl磷酸盐缓冲液（pH7.4）【附注】1.试剂及试管需消毒，试管需加塞。2.试管中PH及温度必须恒定，pH变化0.1或温度升高5℃红细胞自体溶血实验本实验是测定患者的红细胞在自体血清中经孵育后，自发发生的溶血程度。【试剂】1.100g/L葡萄糖（无菌）；2.等渗盐水（无菌）；3.HiCN稀释液；4.0.4mol/LATP【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》第二版。【附注】应严守无菌操作规程。热溶血实验【标本】静脉全血。【办法与操作】以无菌干燥注射器取静脉血2ml，取下针头，缓缓地沿管壁注入消毒小试管中，避免产愤怒泡，加少量消毒石腊油覆盖，37℃孵育24h【附注】1.注射器及试管要干净，操作过程避免发生溶血。2.在孵育24h后，血块仍未改收缩，可用小玻璃棒沿管壁轻轻分离之，然后再离心沉淀，观察成果。酸溶血实验【标本】取静脉血5ml，取下针头，将血沿瓶壁注入放有玻珠的三角烧瓶内，轻轻摇动，使纤维蛋白析出，并附于玻璃珠内，继续摇转至血液不凝止。【方法】1.Ham's实验法。2.简易酸溶血实验法。【试剂】1.0.2mol/LHCL液。2.8.5g3与患者同型或AB型血清（最佳采用多人混合新鲜血清，以确保足够的补体）。【操作】见《临床实验诊疗学》上册。【附注】1.血清酸化后，试管须塞紧，否则二氧化碳逸出，可使血清酸度减少。2.抗凝剂会影响PH值，故不适宜用抗凝血浆，可自末梢取血10余滴，直接滴入盐水中，混匀，离心弃去上清液，再配成50％红细胞悬液。蔗糖水溶血实验【标本】取枸橼酸盐或草酸盐抗凝管，抽静脉血1ml。【试剂】92.4g/L蔗糖溶液。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》第二版。【附注】1.所用仪器清洁干燥，以免溶血。2.若无蔗糖也可用葡萄糖替代。葡萄糖6－磷酸脱氢酶活性测定【标本】取静脉血0.5~1.0ml注入抗凝管（肝素、EDTA或ACD液抗凝管），混匀。【方法】比色法。【试剂】1.0.25mol/LTris-HCL缓冲液（pH7.42.0.154mol/LKCl。3.0.12mol/LMgCl4.0.00625mol/LG－6－PNa2（2mg/ml）。5.0.00625mol/LNADP（TPN）（5mg/ml）。6.氰化血红蛋白试剂。【操作】见《临床实验诊疗学》上册。【附注】新鲜抗凝血（EDTA或ACD抗凝血），在4℃下保存，48高铁血红蛋白还原实验【标本】采静脉血2~2.5ml于含0.2ml枸橼酸钠（109mmol/L）试管内，混匀。【试剂】1.0.18mol/L亚硝酸钠和0.28mol/L2.0.4mmol/L3.0.02mol/L磷酸盐缓冲液（PH7.44.109mmol/L枸橼酸钠液。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》第二版。【附注】1.红细胞比积低于30％时，高铁血红蛋白还原率显暑减少，因此，须调节红细胞与血浆比例为1：1后，再取标本作实验。2.如采用ACD作抗凝剂，用量ACD与血之比为0.15：1。该抗凝血可保存1周。不适宜使用草酸盐作抗凝剂，因其含有还原性。3.标本不应有凝块或溶血。分光光度计的波长应精确，普通规定St比B大8倍以上。变性珠蛋白小体（Heinz小体）检查【标本】采用新鲜未梢血一滴。【方法】1.耐尔蓝法。2.结晶紫法。【试剂】1.1.5g2.2.10g【操作】见《全国临床检查操作规程》第二版。红细胞谷胱甘肽（GSH）含量及其稳定性检查【标本】取静脉血2.0~2.5ml，加入于抗凝管（肝素、EDTA.Na2或ACD抗凝剂），混匀。【方法】1.还原型谷胱甘肽比色测定法。2.谷胱甘肽稳定性实验。还原型谷胱甘肽比色测定法：【试剂】1.0.3mol/LNa2HPO4液。2.1g/LEDTA.Na2液。3.沉淀剂：偏磷酸1.67g、EDTA.Na20.2g、NaCl30g4℃4.二硫代双硝基苯甲酸（DTNBN）试剂。5.1.62mmol/LGSH贮存液。6.162umol/LGSH应用液。【操作】见《全国临床检查操作规程》第二版。【附注】1.GSH相称稳定，标本用ACD抗凝，置于冰箱内，可贮存3周不影响成果。2.血液中GSH几乎全部存在于红细胞内。故用PCV除以全血GSH得红细胞GSH含量。谷胱甘肽稳定性实验:当红细胞内G6PD缺少时，GSH含量明显减少，因此，本实验可间接则知G6PD的含量。【标本】取静脉血2.0~2.5ml于抗凝管（ACD、枸橼酸钠、EDTA.Na2）中，混匀。【试剂】取乙酰苯肼100mg，溶于1ml丙酮中，每管加0.05ml（含乙酰苯肼5mg），然后置于37℃【操作】见《全国临床检查操作规程》第二版。冷溶血实验【标本】采静脉血8ml，以玻璃珠去纤维蛋白后，制备血清和红血球悬液。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】操作中第1、第2管最佳在20℃血红蛋白电泳检查【标本】采用末梢血或静脉血1.0~1.5ml于EDTA.Na2抗凝管内，混匀。【试剂】1.0.26mol/LTris缓冲液（pH9.1）（用于阳极）。2.pH8.6巴比妥缓冲液（用于阴极）。3.醋纤薄膜浸泡液：用于阳极和阴极的缓冲液等量混和。4.氨基黑10B染色液。5.漂洗液。6.0.4mol/LNaOH。7.透明液。8.或市售成套试剂盒。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）或严格按试剂盒和配套仪器的使用阐明书操作。血红蛋白H包涵体检查【标本】取末梢血3~4滴加入于含0.5ml煌焦油蓝液中。【试剂】10g/L煌焦油蓝液：煌焦油蓝1g，枸橼酸钠0.4g溶于100ml生理盐水中，贮于棕色瓶中，临用前过滤。【操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】1.HbH普通要在10min后在1h内产生包涵体。其它不稳定Hb形成Heinz小体，需更长时间（3h或更长）。2.网织红细胞呈蜘蛛网状，与红细胞包涵体的颗粒状不同需注意鉴别。血红蛋白A2定量【标本】自静脉取血1.0~1.5ml，注入抗凝管（EDTANa2肝素）【办法及操作与试剂】见《临床实验诊疗学》上册。Hb－F碱变性实验【标本】采静脉血1~2ml于抗凝管（肝素、EDTANa2、ACD液）内，混匀。【试剂】1.0.083mol/L氢氧化钾（PH12.7）。2.半饱和硫酸铵液。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》第二版。【附注】1.如滤液呈淡黄或淡红色，可能为血红蛋白含量高；但首先要检查使用的碱液及酸性半饱和硫酸铵的质量。因碱液的碱度局限性或酸性半饱和硫酸铵的浓度和酸度局限性，皆可引发滤液不呈水样透明，而致检测成果偏高。2.碱浓度必须精确，pH值必须不不大于12，校准后最佳是小分装密闭保存，使用量和作用时间都必须十分精确。3.酸性半饱和硫酸铵须配准，pH应为3.0，最佳小批量分装。4.过滤的滤纸应为化学实验用品，滤液必须澄清，透明，否则应重新过滤１次或离心沉淀。5.实验用试管，吸管等仪器不可沾污酸碱。6.每次实验最佳重复做二份，用正常人血和脐带血（Hb－F含量高）作对照实验。见《全国临床检查操作规程》第二版。不稳定血红蛋白过筛实验异丙醇实验【标本】自静脉取血0.5~1.0ml，注入抗凝管（肝素、EDTA.Na2、ACD液），混匀。【试剂】1.17%（V/V）异丙醇液。2.Hb溶液：用四氯化碳抽提，不能用甲苯。【操作】取2ml17％异丙醇溶液，置有塞试管中，37℃水浴预热数分钟后，加入0.2mlHb溶液，加塞混匀，计时观察，同时作正常对照。若放在37℃水浴中，5min出现混浊，【附注】1.异丙醇溶液（17％）及温度（37℃）要严格控制pH不得低于7.22.Ｈb液浓度应控制在70~130g/L之间，最佳为100g/L，抗凝剂无影响。3.Ｈb液需新鲜配制，久置可转变为Ｍet－Ｈb，造成假阳性。4.Hb－F含量超出4％，可出现假阳性；新鲜的溶血液或贮存于4℃2周内的全血，在８滴Ｈb液中加１滴20g/L热不稳定实验【标本】采静脉血0.5~1.0ml，注入抗凝管（肝素，EDTA.Na2，ACD液），混匀。【试剂】1.0.1mol/LTris缓冲液（PH7.4）。2.氰化高铁血红蛋白稀释液。【办法与操作】见《全国临床检查操作常规》（第二版）。丙酮酸激酶活性测定【试剂】1.0.3mol/LTris-HCl缓冲液。2.ADP溶液。3.5mmol/LNADH溶液。4.LDH溶液600u/ml。5.30mmol/L磷酸烯醇型丙酮酸(PEP)溶液。【办法与操作】见《全国临床检查操作常规》（第二版）。【附注】1.血液标本需新鲜，若以4℃2.白细胞中含相称高PK活性，即使在红细胞PK缺少症亦是如此。因此，须尽量从红细胞悬液中除去。血浆游离血红蛋白测定【标本】采用静脉血1~1.5ml于干燥试管内，分离血清。或收集尿液送检。【试剂】1．0.2g/100ml邻一甲联苯胺溶液。2．1%H2O2溶液。3．10%乙酸溶液。4．Hb原则应用液。【办法与操作】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。血清结合珠蛋白测定【标本】采静脉血0.5~1.0ml于干净试管内，分离清晰透明血清。【试剂】1．pH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05）。2．醋酸纤维薄膜浸泡液。3．3%H2O2液。4．4mol/LH2SO4液。5．0.5mol/L醋酸缓冲液（pH4.70）。6．5mmol/L联大茴香胺溶液。7．联大茴香胺－过氧化氢显色剂。【办法及操作】醋酸纤维薄膜电泳法，详见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】在pH4.7时，结合的与游离的血红蛋白显色强度基本相似，因此，用PH4.7联大茴香胺醋酸缓冲液显色效果最佳。（何金昌徐淑屏）第五节骨髓细胞检查及血细胞化学染色骨髓检查骨髓取材1.骨髓穿刺部位：普通取胸骨、棘突、髂骨前嵴或髂骨后嵴等部位。两岁以内小儿主张用胫骨穿刺。穿刺部位不同，取材可能有明显差别。如再生障碍性贫血的患者，进行不同部位骨穿，可发现不同的细胞增生程度，以胸骨穿刺最佳，棘突次之，髂骨最差。故必要时应多部位取材，方便能全方面地理解骨髓状况。2.吸骨髓液：普通不超出0.2ml，否则易于稀释。3.骨髓取材满意的几项指标：抽吸骨髓时，患者有特殊酸痛感，骨髓液中应含有骨髓小粒。镜下可见骨髓特有细胞，如巨核细胞、浆细胞、网状细胞、组织嗜碱细胞、幼稚红细胞、幼稚粒细胞。涂片与染色1．涂片：所用的载玻片应干净无油污，涂片均匀，有头、体、尾三部分。选择骨髓小粒部分制涂片。2．染色：用瑞氏和姬姆萨混合染色：选择涂片良好的骨髓片或血片平放染色，染色普通为10～15min。骨髓增生程度的预计1．骨髓涂片观察：首先在低倍镜下全方面观察成熟红细胞与有核细胞的大致比例，以拟定增生程度。2．国内普通分为5级，判断原则以下：（1）增生极度活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为1:1，见于白血病、红白血病。（2）增生明显活跃：成熟红细胞与有核细胞之比为10:1，见于白血病，增生性贫血。（3）增生活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为20:1，见于正常骨髓和某些贫血。（4）增生减低：成熟红细胞与有核细胞之比约为50:1，见于造血功效低下时。（5）增生严重减低：成熟的红细胞与有核细胞之比约为300:1，见于典型的再生障碍性贫血。粒、红比值计算将粒细胞系统从原始到成熟阶段的总和与红细胞系统从原始到晚幼红细胞总和相比，称为粒、红比值。参考值：成人为2～4：1粒红比值增高见于化脓性感染，类白血病反映。粒细胞性白血病，红细胞生成受克制等。减少见于粒细胞生成受克制，如粒细胞缺少症或红细胞系统增生，如急性溶血或失血，缺铁性贫血等。骨髓有核细胞计数采用试管法：用血红蛋白吸管吸取骨髓液20ul，放入装有1ml血细胞稀释液的试管中，充足振荡2分钟，摇匀，按白细胞计数办法，数5个大方格细胞，其成果乘以102，即得每1ul有核细胞数。注意事项：骨髓穿刺时，勿混入血液，取骨髓液时，先计数后涂片，避免凝固。骨髓巨核细胞计数【操作】取骨髓液涂片，低倍镜查找巨核细胞，寻找1.5×3cm为一单位面积，计数其巨核细胞。【注意事项】取材必须良好，涂片不适宜过厚，以透过涂膜看到笔迹为度。计数时应浏览全片。【参考值】巨核细胞参考值：7～35个，分类：原巨核细胞0；幼巨核细胞0～0.05（0～5％），颗粒型巨核细胞0.10～0.27（10％～27％）；产板型巨核细胞0.44～0.60（44％～60％）；裸核型巨核细胞0.08～0.3（8％～30％）。骨髓象分析与报告阅读骨髓片时，首先在低倍镜下观察取材、涂片、染色与否满意，成熟红细胞与有核细胞的大致比例，以拟定增生程度，计数全片巨核细胞数，注意有无体积较大的细胞，如转移瘤细胞，尼曼匹克细胞，高雪细胞等。此后，用油镜作分类计数，普通以体尾交界处为宜。在分类计数时，一张骨髓片计数200～500个有核细胞，发出骨髓报告时，应将骨髓检查成果与临床及其它实验成果，特别是外周血的检查成果联系起来全方面分析。报告时应提出下列方面所见：1．骨髓有核细胞增生状况。2．粒、红比值。3．粒细胞系统：观察粒细胞系统在全部骨髓细胞中所占比例。正常状况下约占1/2左右（50%～60％），各阶段细胞之间的比例，原粒＜2％；早幼粒＜5％；中、晚幼粒百分率依次增多，但普通各＜15％。成熟细胞中，杆状核细胞多于分叶核粒细胞，嗜酸粒细胞普通＜5％，嗜碱粒细胞＜1％，写明各个细胞形态有无异常，如胞浆与胞核的发育与否平行，胞浆中有无空泡，毒性颗粒和Auen小体等。4．红细胞系统：观察幼红细胞系统在全部骨髓细胞中所占有的比例，正常状况下约占有核细胞的1/5（20％）左右。各阶段幼红细胞之间的比例，原始红细胞普通＜1％；早幼红细胞＜5%；中、晚幼红细胞约为10％。观察有无异常红细胞。5．淋巴及单核细胞系统：注意细胞形态有无异常，各阶段的比例关系。淋巴系统比例约为20％，小儿偏高，有时可达40％，单核细胞普通＜4％。6．其它细胞：如浆细胞，网状细胞，组织嗜碱细胞，内皮细胞，吞噬细胞等的形态及比例。7．巨核细胞总数：分类及形态，血小板形态及数目。8．有无寄生虫：如疟原虫、利朵小体。9．有无异常细胞。最后提出诊疗，如不能提出诊疗意见，可描述形态学所见，以供临床参考。细胞化学染色检查过氧化物酶（POX）染色检查【标本】已干的血片或骨髓片。【办法与试剂】3-氨基-9-乙基咔唑法：固定液；染色液；Mayer苏林素复染液。改良Pereira染色法：固定液；含磺化钾的磷酸缓冲液；10g/L0.03%H2O2溶液；染色应用液。【操作与成果判断】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】标本需新鲜制作并固定，染色液应临用前新鲜配制。苏丹黑B（SB）染色检查【标本】新鲜或陈旧血片或骨髓片。【试剂】37%甲醛液；苏丹黑B贮存液；缓冲液；染色液。【操作与成果判断】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色检查【标本】用末梢血或肝素抗凝血制血涂片均可。【试剂】固定液；缓冲液；染色液；苏木素复染液。【操作与成果判断】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】1．涂片要新鲜，厚薄适宜，及时固定。2．每次染色，最佳同时做1份化脓性感染患者血片作阳性对照。酸性磷酸酶（ACP）染色检查【标本】新鲜骨髓涂片或血片。【试剂】1.固定液；2.底物染色液1号（不含酒石酸）；3.酒石酸液；4.底物染色液2号（含酒石酸）。【操作与成果判断】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】ACP染色也有用Gomori硫化铅法，但因操作复杂且成果不稳定，现为本法取代。糖原染色检查【标本】干血片或骨髓涂片。【试剂】1.乙醇－甲醛固定液；2.淀粉酶缓冲液（pH6.0）；3.10g/L过碘酸液；4.Schiff液；5.苏木素复染液。【办法、操作与成果判断】高碘酸－雪夫反映，PAS法见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】1.过碘酸质量要确保，氧化时间以15~20min为宜。2.染好的涂片不适宜久置，超出8天左右即逐步褪色。铁粒染色检查【标本】干血片或骨髓片。【试剂】1.4％盐酸液；2.40g/L亚铁氢化钾液；3.碱性复红贮存液；4.碱性复红应用液。【办法、操作与成果判断】见《全国临床检查操作规程》（第二版）。【附注】1.使用器材须除铁解决，特别是载玻片。2.亚铁氰化钾－盐酸应用液须临用时配制。3.作细胞外铁检查时，需用含有骨髓小粒的涂片。4.细胞内铁计数应以中、晚幼粒细胞为准。（何金昌徐淑屏）第六节临床微生物及寄生虫检查细菌涂片检查涂片不染色显微镜检查标本规定：多个标本或细菌培养物。实验办法：直接涂片法、压滴法或悬滴法。操作环节：见《全国临床检查操作规程》（第二版）。成果观察：观察标本中有无细菌或真菌，如有再观察细菌的形态及运动状况，报告所见。注意事项：注意微生物操作安全；标本量不适宜太多，以免影响观察；涂片制作后立刻观察，涂片干涸后应重新制作涂片。涂片革兰染色显微镜检查标本规定：多个标本或细菌培养物。实验办法：常规法、快速法。操作环节：见《全国临床检查操作规程》（第二版）。成果观察：观察染色涂片有无细菌或真菌，如有则进一步观察细菌的染色性、形态、特殊构造及排列方式。涂片中如有细胞，则观察细菌菌体在细胞内或细胞外。报告所见。注意事项：涂片厚薄适宜均匀；固定及染色不能超时，否则染色变性；只能报告所见细菌的染色性、形态、特殊构造及排列方式，不能直接报告细菌菌种如报告涂片见淋病奈瑟菌、白喉棒状杆菌。涂片抗酸染色显微镜检查标本规定：多个标本或细菌培养物。实验办法：萋尼染色法、快速染色法或荧光（金胺－罗丹）染色法。操作办法：见《全国临床检查操作规程》（第二版）。成果观察：抗酸菌在萋尼染色法中呈红色，在金胺－罗丹染色法中呈荧光金黄色。观察染色涂片有无抗酸杆菌，如有则进一步观察细菌数量大致状况。涂片中如有细胞，则观察菌体在细胞内或细胞外。报告所见。注意事项：涂片厚薄适宜均匀；固定及染色不能超时，否则染色变性；只能报告有无抗酸杆菌，如有，可报告其数量大致状况及与否在细胞内，不能直接报告见分枝杆菌或结核分枝杆菌，因奴卡菌属、放线菌属细菌也可为抗酸阳性菌。涂片墨汁染色显微镜检查标本规定：多个标本或细菌培养物。实验办法：直接染色法。操作环节：见《全国临床检查操作规程》（第二版）。成果观察：涂片背景为黑色，新型隐球菌或细菌荚膜在染色中呈折光环形菌体构造。观察染色涂片有新型隐球菌或细菌荚膜时为检查阳性。报告所见。注意事项：染液与标本液的比例为1:1，比例不当影响观察效果；只能报告所见即有无折光性环状样菌体，不能直接报告见新型隐球菌等。细菌培养细菌需氧培养标本规定：多个标本或细菌培养物。实验材料：隔水式培养箱及多个细菌培养基。操作环节：见《全国临床检查操作规程》（第二版）。成果判断：培养基上有细菌生长为阳性，无细菌生长为阴性。注意事项：严格控制培养箱内温度、湿度；培养阴性不完全表达标本中无细菌，细菌含量小、接种量少、接种工具温度太高、培养基营养达不到规定等亦可造成培养阴性。细菌微需氧培养标本规定：多个标本或细菌培养物。实验材料：二氧化碳培养箱、烛缸或化学产气箱、盒、袋及多个微需氧细菌培养基。操作环节：见《全国临床检查操作规程》（第二版）成果判断：培养基上有细菌生长为阳性，无细菌生长为阴性。注意事项：严格控制培养箱内温度、湿度，确保气体质量；培养阴性不完全表达标本中无细菌，细菌含量小、接种量少、接种工具温度太高、培养基营养达不到规定、气体不合原则等亦可造成培养阴性。细菌厌氧培养标本规定：多个标本或细菌培养物用厌氧菌专用运输工具或封闭性容器采集和运输。标本采集后严格隔离空气并立刻送检。实验材料：厌氧培养箱、换气罐或化学产气箱、盒、袋及多个厌氧菌培养基。操作环节：见《全国临床检查操作规程》（第二版）。成果判断：培养基上有细菌生长为阳性，无细菌生长为阴性。注意事项：严格控制培养箱内温度、湿度，确保气体质量；操作过程速度要快，并严格隔离空气；培养阴性并不完全表达标本中无细菌，细菌含量小、接种量少、接种工具温度太高、培养基达不到规定、气体不合原则等亦可造成培养阴性。细菌分离血液及骨髓细菌培养与分离