第十章-甾体激素类药物的分析

第十章甾体激素类药物的分析

第一节基本结构和分类一、基本结构：主要特点：

A环:多数为脂环，有△4-3-酮，少数为苯环

C3:可能有酮基或烃基;

C10、C13:多数均有角甲基少数C10上无角甲基

Cll:可能有酮基或羟基;

C17:可能有羟基、酮基、甲酮基、α-醇酮基、甲基、乙炔基等;基本结构：环戊烷骈多氢菲二、分类甾体激素肾上腺皮质激素雄性激素及蛋白同化激素性激素孕激素雌激素1、肾上腺皮质激素(简称皮质激素)如氢化可的松、曲安西龙、醋酸地塞米松等。

结构特点：★具有21个C原子★

A环:具有△4-3-酮基★

C17:具有α-醇酮基并多数有α-羟基★C10、C13:具有角甲基★C11:具有羟基或酮基★具有紫外吸收氢化可的松肾上腺皮质激素醋酸地塞米松C1、C2和C4、C5之间双键9抗炎作用增强16羟基形成醋酸酯，肌注时可延长作用时间2、雄性激素及蛋白同化激素雄性激素：睾酮的衍生物，如甲睾酮、丙酸睾酮、十一酸睾酮等蛋白同化激素有苯丙酸诺龙结构特点：★雄性激素母核有19个C原子蛋白同化激素母核有18个C原子★A环:具有△4-3-酮基★C17:无侧链，多数是一个β—羟基，有些是由它形成的酯★具有紫外吸收雄性激素：丙酸睾酮蛋白同化激素：苯丙酸诺龙Cl0上无角甲基3、孕激素黄体激素或孕酮。典型药物为黄体酮。中国药典收载有:黄体酮、醋酸甲地孕酮原料及制剂等。结构特点：★母核具有21个C原子;★A环:具有△4-3-酮基★C17:具有甲酮基，有些具有α-羟基，与醋酸、己酸等形成酯黄体酮醋酸甲地孕酮4、雌激素（卵泡激素）收载有：雌二醇、炔雌醇、苯甲酸雌二醇等结构特点：★母核具有18个C原子;★A环:为苯环，★C3：具有酚羟基且有些形成了酯或醚;★Cl0:无角甲基★C17:具有β-羟基，有些烃基形成了酯，还有些具有乙炔基。炔雌醇雌二醇第二节鉴别试验一、物理常数的测定：熔点、比旋度、吸收系数等二、化学鉴别法（一）与强酸的呈色反应许多甾体激素（母核）能与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，其中以与硫酸的呈色反应应用较广。甾体激素类药物呈色H2SO4

H3PO4HClO4HCl与硫酸显色反应

显色

荧光加水稀释泼尼松龙深红

絮状↓灰泼尼松橙

黄→蓝绿炔雌醚橙红

黄绿

↓红色

炔雌醇橙红

黄绿

絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄

带橙清（二）官能团的反应1、C17-α-醇酮基肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OHˉ具还原性氧化剂此外还有斐林试液、多伦试液甾酮类激素药物腙（黄色）羰基试剂2.酮基的呈色反应:C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化钠（间二硝基酚、芳香醛）3、甲酮基的呈色反应黄体酮蓝紫色亚硝基铁

氰化钠其他甾体淡橙色或不显色专属的鉴别反应有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ4、有机卤素的呈色反应茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓呈色5、酚羟基的呈色反应雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银6、乙炔基的沉淀反应↓三、制备衍生物测定其熔点

与一些试剂反应生成酯、肟、缩氨脲

利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，然后测定其熔点进行鉴别。本法虽繁琐费时，但专属性强，目前仍为一些国家药典采用。盐酸氨基脲苯丙酸诺龙△缩氨基脲衍生物1.缩氨基脲的生成m.p.约182℃（分解）2.酯的水解丙酸睾酮碱性条件睾酮m.p.为150℃~156℃四、紫外分光光度法分子中有α，β—不饱和酮、苯环和其他的共轭结构，在紫外光区有特征吸收

△４-3-酮240nm苯环280nm曲安息龙丙酸倍氯米松溶剂甲醇乙醇20μg/ml浓度20μg/ml结果判断在238nm处有最大吸收在239nm处有最大吸收，A为0.57～0.60，在239nm与263nm处的吸收度比值为2.25～2.45五、红外分光光度法甾体激素类药物结构复杂，红外吸收光谱是鉴别该类药物有效而可靠的方法

中国药典载的甾体激素原料，其中大多采用该法鉴别。结构特征：酚羟基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动六、TLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别

方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。炔诺酮TLC图注意点：★供试品要作前处理；★显色后要立即检视七、高效液相色谱法在一定的色谱条件下，比较甾体激素样品与其对照品峰的保留时间进行鉴别。一般都规定在含量测定项下的高效液相色谱图中，供试品峰的保留时间应与对照品峰的保留时间一致。第三节特殊杂质检查一、其他甾体1、定义与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的药理作用而又互不相同.

2、来源原料、中间体、异构体、降解产物3、特点（1）可能存在多个甾体杂质（2）结构类似4、方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）１、薄层色谱法：中国药典(2005年版)(1)薄层板：硅胶G板，硅胶ＧＦ254或硅胶ＨＦ254。(2)供试液和对照液的制备：分别用溶剂(如氯仿-甲醇或甲醇或氯仿或丙酮)配成一定浓度的溶液。(3)展开剂系统：各种不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶剂用得较多，(4)显色剂：碱性四氮唑蓝试液，硫酸-乙醇(2:8或1:1或3:7),20％硫酸，10％磷钼酸-乙醇液。(5)检出法：★碱性四氮唑蓝试液晾干，１０５℃烘１０分钟放冷，喷以碱性四氮挫蓝试液，立即检★硫酸-乙醇晾干后，先喷显色剂，再在１２０℃烘５分钟★20％硫酸晾干后，先喷显色剂，再在１０５℃烘１０分钟★10％磷钼酸-醋酸晾干，喷显色剂，在1OO℃加热10一l5min,(6)判定法：按规定的斑点数目和颜色判断2、高效液相色谱法中国药典(2005年版)所列的色谱条件如下:(1)色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶。(2)流动相：各种不同比例的甲醇-水混合溶剂。(3)检测器：紫外吸收检测器(241nm、254nm、28nm、218nm、230nm、288nm等，视品种而定)。(4)供试液和对照液的制备：高浓度者为溶液①，低浓度者为溶液②。(5)判定法：溶液①显示的杂质峰数不得超过1个或数个;各杂质峰面积或其总和不得大于溶液②主峰面积的一定分数。即按各药品项下规定的杂质峰的数目和面积的要求进行判定。例如，黄体酮中"其他甾体"的检查方法如下:取本品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成8mg/lm1的溶液①与0.02mg/lml的溶液②。用含量测定项下的方法和溶液，取5u1注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满标度。再分别取溶液①和②各10u1进样。记录色谱图至主成分峰保留时间的1.5倍。溶液①显示的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于溶液②主峰面积的3/4。≤图A中峰1面积的四分之三

二、硒的检查

来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢剧毒方法原理：

三、甲醇和丙酮药典规定采用气相色谱法测定时不得出现甲醇峰。该法测定甲醇时检测限为3.1ng。甲醇≤0.3％丙酮≤5.0%内标法+校正因子四、游离磷酸目的：地塞米松磷酸钠在生产和贮存过程中可能引入磷酸盐，需对游离磷酸盐进行检查。

原理：方法：钼蓝

地塞米松磷酸钠检查游离磷酸

精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。（对照液0.0035%KH2PO4）第四节含量测定一、高效液相色谱法（48%）以反相分配色谱用于甾体激素的含量测定最为广泛。固定相：十八烷基硅烷键合硅胶;流动相：甲醇和水组成的混合液，紫外检测器：具有△4-3-酮基和苯环，在240nm或280nm附近有吸收示例：黄体酮的含量测定

色谱条件：固定相ODS，流动相甲醇-水（65:35），检测波长254nm，内标物己烯雌酚系统适用性试验：n>1000，R符合规定。

测定样品：黄体酮原料、注射液。

定量方法：内标法A、对照品B、供试品二、紫外分光光度法（30%）分子中存在△4-3—酮基、苯环和其他共轭系统，因而在紫外光区有特征吸收。△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环280nm（±）雌激素例：醋酸地塞米松片的含量均匀度检查（1）配制供试液，取10片分别进行测（2）测定：240nm（3）计算规格：0.75mg/片吸收系数＝357计算每片以标示量为100％的含量X，求出平均值和标准差S，差值AA+1.80S≤15.0合格A+S>15.0不合格A+1.80S>15.0且A+S≤15.0复试三、比色法（一）异烟肼比色法1、原理HCl（缩合）肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激