康美肤烧伤膏的抗真菌作用研究

康美肤烧伤膏的抗真菌作用研究

烧伤伤口是烧灼感和烧伤感染中明显而重要的病原体。烧伤后伤口和全身感染是患者死亡的主要原因。控制感染是烧伤治疗中非常重要的环节。局部用药仍是烧、烫伤治疗中控制感染的重要手段。康美肤烧伤膏是根据闽南名医黄金钢验方,由福建地产药材九龙藤、金线莲、冰片、蜂蜡、麻油等组成,临床上主治各种Ⅱ度烧伤。本实验研究用体外抑菌试验和大鼠感染性Ⅱ度烫伤创面的动物模型,观察康美肤烧伤膏防治感染的功效。1材料和方法1.1材料表面1.1.1铜绿假单胞菌回复突变试验质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853。其它实验菌株从临床分离所得,由福建医科大学微生物教研室保存并提供。所有操作均按《全国临床检验操作规定》。1.1.2培养基肉汤琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基均经121℃高压蒸汽灭菌30min备用,其中液体培养基不加琼脂。1.1.3福建东南角SD大鼠,体重180~220g,50只,由福建医科大学动物中心提供。合格证号:SGXK(闽2004-0002号),分笼饲养,给予统一饲料。1.1.4试验药物京万红烧伤膏由天津达仁堂药厂生产(批号:203417);康美肤烧伤膏(自制,定容浓度为300g/L,放置4℃冰箱保存备用)。1.2方法1.2.1马铃薯葡萄糖培养基的制备最小抑菌浓度的测定采用试管两倍稀释法。取无菌试管10只,于每一试管中加入液体培养基3ml,再于第1管加入浓度为300g/L的康美肤烧伤膏3ml混合均匀后,取3ml加入第2管,依次类推,至第8管吸出3ml滴入营养琼脂平皿上,供无菌检查。8只试管中的药物质量浓度为250、125、62.5、31.25、15.625、7.80、3.90、1.90g/L,然后于1~8管加入稀释好的菌液200μl;第9管为培养物对照,第10管为培养基对照。在37℃培养18~24h,当对照物混浊,对照培养基不混浊,以不发生混浊变化的最小浓度为该药的最小抑菌浓度。真菌培养基选用马铃薯葡萄糖琼脂培养基,方法同上,在25~28℃培养36h。相同过程重复3次。1.2.2不同方法所含细菌菌落数测定50只体重180~220g大鼠于实验前24h,用硫化钠脱毛,面积约30cm2,用戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔麻醉,浸入100℃水浴槽孔(面积约30cm2)内持续烫15s,造成约10%Ⅱ度烫伤创面。致伤后立即腹腔注射5%葡萄糖盐水复苏。伤后5min,用苦味酸划出创面边界,计算面积,并取经培养制备浓度为1.5×107细菌/ml金黄色葡萄球菌0.4ml,均匀涂布于创面上。将50只大鼠随机分为5组,即京万红烧伤膏组,康美肤烧伤膏0.436、0.872、1.744g/g(剂量均以生药量计)3种剂量组及赋形剂组。于动物伤后10min分别对烫伤局部施以相应外用药并予以包扎。各治疗组每日换药一次,于感染后24、48h各采样一次作创面菌落计数。采样时,用2只消毒无菌棉签轻浸渍肉汤并挤干,先后由创面一侧向另侧滚动均匀涂抹创面一次,并立即置入盛5ml无菌肉汤培养液中。将标本充分振荡80~100次,用无菌吸管吸取1ml至9ml1%蛋白胨水稀释液中混匀,按此法连续稀释至10-2、10-3、10-4、10-5倍,吸取每一稀释液2ml分别注入到两个灭菌平皿内,每皿1ml。将熔化并冷却到45~50℃的营养琼脂注入平皿,每皿15ml,以另一不加标本的空白皿作为对照。转动平皿使标本与菌液充分混合均匀,待凝固后,翻转平皿并于37℃孵育18~24h,观察结果,计数菌落,以求得标本中所含活菌数。并折算出单位创面面积所含细菌菌落数。以t检验测定各治疗组与赋形剂对照组组间的差异显著性。同时进行3个治疗剂量组间等效性分析。2结果2.1其他常见菌株结果表明康美肤烧伤膏的无菌培养基及空白对照培养在37℃培养18h(真菌25~28℃,36h)条件下,未见细菌及真菌生长。康美肤烧伤膏对金葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、甲链球菌(α-hemolyticstreptococcua)、乙链球菌(β-hemolyticstreptococcua)、粪链球菌(Staphylococcusfaecalis)、大肠埃希菌(Escherichiacoli)、克雷伯菌(Klebsiellapeneumoniae)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumanii)、阴沟肠杆菌(Enterbactercloacae)、白色念珠菌(Candidaalbicanspneumonia)、青霉菌(Penicilliumnotatum)、黄曲霉菌(Aspergillusflavus)等均有一定程度抑制作用,其中以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌尤为敏感,铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌次之(见表1)。2.2抑菌活性测定见表2。与赋形剂对照组比较,不同浓度康美肤烧伤膏及京万红烧伤膏均有不同程度的抑菌活性,其创面24h和48h菌落计数显著低于赋形剂对照组。3药物敏感试验体外抑菌试验表明康美肤烧伤膏对细菌和真菌均有一定程度抑制作用,其中以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌尤为敏感,铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌次之。试验过程发现对标准菌的MIC值较低,标准菌对药物敏感;而各分离菌的MIC值较高,对药物表达了一定的耐受性,这可能与分离菌采自临床,而在临床中均长期大量应用了多种抗药物防治疾病,致使病原菌产生耐药性有关。采用大鼠Ⅱ度烫伤后创面接种金黄色葡萄球菌作为实