免疫-层析技术

免疫层析技术PPT制作：尼古拉斯猫小妖目录《溯源篇》《云集篇》《冲锋篇》《溯源篇》抛砖引玉仔细回想我们接触的第一个层析技术是什么？纸层析法：又称纸色谱法，是用纸作为载体的一种色谱法，其应用的原理是相似相溶原理，是通过分裂系的在同一介质中分散速度不同来分析的。高中知识胡萝卜素叶黄素叶绿素b叶绿素a色素分离色谱和层析的原理是一样的,只不过色谱是在柱状填料中进行的,而层析则是在薄层介质上进行的，因此层析有时候称为薄层色谱,而色谱则被称为柱层析。层析与色谱的区别层析色谱层析起源20世纪初出现（开始）20世纪20年代广泛应用30~40年代薄层色谱发表21世纪群英荟萃，创新技术共存90年代技术普及70年代高效液相色谱（HPLC）崛起50年代气相色谱（GC）建立免疫层析逆流层析······离子交换层析《云集篇》群英荟萃分支发展胶体金为标记物的免疫层析时间分辨与镧系元素荧光免疫层析量子点免疫层析纳米模拟酶免疫层析胶体金为标记物的免疫层析胶体金是各种还原剂作用于氯金酸(HAuCl４)后生成的一定大小的金颗粒,其在溶剂中表现出稳定的胶体状态.碱性环境中胶体金颗粒与表面带正电的抗原/抗体结合,所形成的胶体金Ｇ蛋白疫复合物既具有稳定性,还保持了生物活性,可以作为一类示踪标记物在免疫层析中参与反应,并显现肉眼可辨的颜色.研究表明,粒径在１５nm以上的胶体金在人肉眼观察结果时较为理想。Au(n)Au+Au+Au+Au+Au+Au+e-e-e-e-e-e-胶体金胶粒时间分辨与镧系元素荧光免疫层析时间分辨荧光免疫荧光法(TRFIA)：是一类通过标记镧系元素,也称稀土元素(REE)，使之与抗原/抗体螯合并被激发出一定波长荧光,同时对荧光波长和发光时间两个参数进行检测的新型检测技术。由于标记物体积小、标记物对被标记的大分子蛋白的空间结构影响极低、信噪比高及波峰尖锐等特点,非特异荧光信号对结果的干扰降低,TRFIA的灵敏度显著提升。镧系荧光免疫方法(LFICA)以TRFIA为基础,可以对超微量的待测物进行快速检测,目前可用于多种疾病的检测，如心血管类疾病，肿瘤类疾病等。时间分辨与镧系元素荧光免疫层析量子点免疫层析量子点(简称QDs,又称半导体纳米粒子)是由Ⅱ～Ⅵ族或Ⅲ～V族元素组成的，半径小于或接近于激光玻尔半径，能够接受激发光产生荧光的一类半导体纳米颗粒。量子点免疫层析量子点是一类半导体材料,比表面积大,生物相容性和稳定性优良。同时,此类材料具有吸收峰宽、激发光谱连续分布、荧光强度高和斯托克斯位移大的特点,因此可以实现同一束光激发下,不同粒径量子点均可以得到激发,达到同时多目标检测的效果。不同粒径量子点的不同颜色纳米模拟酶免疫层析纳米模拟酶免疫层析纳米模拟酶(nanozymes)是近几十年间成功合成并发展的一类兼具了纳米材料特点与酶的催化功能的模拟酶,与辣根过氧化物酶的催化作用类似,在生物传感、免疫测定、医学治疗及去除污染等许多领域中都有广泛的应用。《冲锋篇》庖丁解牛特异性反应:指免疫应答过程中所产生抗体和致敏淋巴细胞与相应抗质(抗原)特异性结合所发生的一系列反应。免疫学知识回顾免疫学知识回顾IgAIgMIgEIgDIgG五种免疫球蛋白免疫学知识回顾IgG:IgM:IgE:IgD:IgA:占血清Ig抗体含量约75%，抗细菌，抗病毒，抗毒素的主要抗体占血清Ig抗体含量约10%，分子量最大，初次免疫最先出现的抗体，是机体抗感染的先头部队占血清Ig抗体含量约13%，参与黏膜免疫识别抗原可抗寄生虫，也可引发过敏反应免疫层析技术是以特异性反应为基础的一类以纳米级标记物探针作为示踪和标记物的检测技术。免疫层析的基本概念特点：简单、快速、灵敏度高、特异性强、应用领域广泛。优缺点因材料选取存在较大的差异。免疫层析技术（ＩＣＡ）是一种将色谱原理和抗原抗体反应相结合的快速检测技术，在兽药残留检测、环境监测、疾病诊断等多个方面都有应用免疫层析的应用样品垫结合垫检测线(T)质控线(C)吸水垫通过观察直接确定检测是否有效可直接观察结果，得出结论免疫层析法中各个组成的作用减缓渗透作用，有利于样品分布均匀，去除杂质，调节PH，粘度等吸附胶金结合物，持续不断将样品转移到NC膜上，保持胶金结合物的稳定性等NC膜固定C、T线，发生免疫反应和显色的场所控制样品流速，促进虹吸现象，使试剂跨过膜而不是留在膜上样品垫结合垫检测线质控线吸水垫侧面构成图检测原理检测线不为红色检测线红色阴性阳性无效质控线不是红色红色样本垫胶金垫吸水纸检测线（鼠抗人IgG抗体）质控线（羊抗鼠IgG抗体）俯视图促进虹吸抗体样品结合物反应场所注：羊抗鼠IgG:一抗为鼠体内抗体，二抗为羊体内分离出能特异性结合一抗的抗体，鼠抗人IgG同理。阳性检测三种检测现象无效检测阴性检测无效检测检测类型（以新型冠状病毒的检测为例）以新型冠状病毒病毒检测为例（胶体金测流免疫层析法）胶体金新冠抗原结合体羊抗鼠IgG新冠抗体样本垫胶金垫吸水纸流向鼠抗人IgG胶体金与鼠IgG抗体结合体检测线（鼠抗人IgG抗体）质控线（羊抗鼠IgG抗体）质控线，检测线均未发生显色，操作失误，很可能稀释不够导致样品留在了NC膜上，而非穿过NC膜致使检测结果无效。以新型冠状病毒病毒检测为例（胶体金测流免疫层析法）胶体金新冠抗原结合体羊抗鼠IgG新冠抗体样本垫胶金垫吸水纸流向鼠抗人IgG胶体金与鼠IgG抗体结合体检测线（鼠抗人IgG抗体）质控线（羊抗鼠IgG抗体）质控线未发生显色，检测线显红色，同理，检测结果无效。（未能将反应进行完全不能认为结果可靠）阳性检测检测类型（以新型冠状病毒的检测为例）以新型冠状病毒病毒检测为例（胶体金测流免疫层析法）胶体金新冠抗原结合体羊抗鼠IgG新冠抗体样本垫胶金垫吸水纸流向鼠抗人IgG胶体金与鼠IgG抗体结合体检测线（鼠抗人IgG抗体）质控线（羊抗鼠IgG抗体）携带一抗的复合物在检测线的检测点与二抗发生特异性结合，同时胶体金聚集形成夹层，聚集显示出红色。此时，血液中的新冠抗体与胶金垫上的新冠抗原特异性结合形成携带一抗的复合物。以新型冠状病毒病毒检测为例（胶体金测流免疫层析法）胶体金新冠抗原结合体羊抗鼠IgG新冠抗体样本垫胶金垫吸水纸鼠抗人IgG胶体金与鼠IgG抗体结合体检测线（鼠抗人IgG抗体）质控线（羊抗鼠IgG抗体）胶体金与鼠IgG结合体与羊抗鼠IgG抗体结合，胶体金聚集显色，使质控线显红色。检测线，质控线均为红色即为有效检测，检测结果为阳性。阴性检测检测类型（以新型冠状病毒的检测为例）以新型冠状病毒病毒检测为例（胶体金测流免疫层析法）胶体金新冠抗原结合体羊抗鼠IgG新冠抗体样本垫胶金垫吸水纸鼠抗人IgG胶体金与鼠IgG抗体结合体检测线（鼠抗人IgG抗体）质控线（羊抗鼠IgG抗体）流向胶体金与鼠IgG结合体与羊抗鼠IgG抗体结合，胶体金聚集显色，使质控线显红色。检测线未变色，质控线为红色，即为有效检测，检测结果为阴性。以新型冠状病毒病毒检测为例（胶体金测流免疫层析法）胶体金新冠抗原结合体羊抗鼠IgG新冠抗体样本垫胶金垫吸水纸流向鼠抗人IgG胶体金与鼠IgG抗