健脾养心安神方治疗杂病验案3则

健脾养心安神方治疗杂病验案3则

失眠属于中医学的“眠”、“睡”、“不睡”范畴，主要用于临床应用。近年来,运用中药治疗失眠临床报道比较多见,但对中药的镇静催眠作用及其机制研究较少。因此,在中医药理论指导下,运用现代科学方法研究中药镇静催眠作用及其机理,寻找和开发安全可靠的镇静催眠药物具有重要意义。健脾养心安神方是笔者在南阳医学高等专科学校附属中医院多年从事中医临床的经验方,具有健脾、养心、安神的功效。为印证该方的临床效果,我们进行了部分药效实验研究。本文对其研究结果报道如下。1材料表面1.1体重202健康昆明种小鼠,60只,3月龄,体重(20±2)g,雌雄各半。实验动物由我校实验动物中心提供,实验动物生产许可证号:00011225。1.2两组不同剂量的生药健脾养心安神方由归脾汤合天王补心丹加减而成。方药组成:人参15g,白术15g,茯苓20g,远志20g,酸枣仁20g,当归15g,生地10g,五味子5g,夜交藤20g,珍珠母15g,煅龙齿20g,甘草3g。分别浓缩成每毫升含生药1g、2g的两种药液,作为低剂量组和高剂量组。置冰箱内4℃保存。阳性对照药:艾司唑仑片。1.3“被”指数对氯苯丙胺酸(PCPA):Sigma公司提供;磷酸二氢钠:(NaH2PO4);色谱条件:色谱柱为4mm×150mm,Nova-pakC18,5(大连色谱中心填装)流动相为0.01mmol/LNaH2PO4缓冲液pH7(内含4%乙晴),流速1mL/min。1.4gl-3g-iii高速冷冻离心理工艺Waters高效液相色谱仪,美国;GL-20G-II高速冷冻离心机,上海安亭;WKYII型微量移液器,上海荣泰生化工程有限公司。2方法2.1各组健脾养心安神方低剂量的比较动物随机分成5组,每组12只。分别为正常组、模型组、安定组、健脾养心安神方高剂量组(简称健高组)和健脾养心安神方低剂量组(简称健低组)。2.2小鼠睡眠总有效率取健康昆明种小鼠,腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA,美国Sigma公司产品,批号:C6506),300mg/kg。28~30h后,造模小鼠昼夜节律消失,白天活动不停,总睡眠量少,几乎均达到完全失眠。予普通饲料喂养。2.3灌服等容积盐水造模同时即开始给药。健高、健低组分别灌服高、低浓度健脾养心安神方水煎液,分别相当于含生药50g·kg-1·d-1和25g·kg-1·d-1。安定组灌服等容积的安定混悬液,正常组和模型组灌以等容积生理盐水。各组均按0.25mL·10g-1·d-1灌胃。1次/d,连续6d。2.4血氯酸钠测定小鼠连续给药6d后,禁食24h,断头,迅速取脑,生理盐水冲洗,滤纸拭干,加预冷的0.1mol/L的高氯酸(内含0.1mol/LEDTA),950uL,玻璃匀浆器中匀浆,以2000r/min匀浆10s,取上清液20uL进行测定,以ng/g脑组织湿度表示。2.5统计学分析数据应用统计软件SPSS13.0进行分析,计量资料组间比较采用t检验,同组治疗前后比较采用配对t检验,计数资料组间比较采用x2检验。3对比低剂量组与低剂量组的剂量与正常对照组比较,模型组脑中的DA含量明显升高。安定组能降低PCPA所致的脑中DA含量的升高(P<0.01),与低剂量组无显著性差异(P>0.05),但没高剂量组明显(P<0.05)。健脾养心安神方高、低剂量组能降低由PCPA所致的脑中DA含量的升高作用,与模型组有显著性差异(P<0.01),且高剂量优于低剂量(P<0.05),见表1。4分析与讨论4.1安氏针药对单胺类神经递质的调节睡眠是中枢神经系统内发生的一个主动过程,与脑内神经递质的动态变化密切相关。与睡眠密切相关的中枢神经递质有5-羟色胺、多巴胺和去甲肾上腺素。多巴胺(DA)神经元主要集中于中脑,其中以尾核、壳核内含量最高,其次为黑质和苍白球,尤其是中脑腹侧被盖区存在着大量的DA神经元,其纤维除投射到纹状体、边缘系统、大脑皮层外,还与视前区、蓝斑、中缝核等与睡眠-觉醒有关的神经结构有着广泛的联系。单胺类神经递质是一类调节中枢神经系统生理功能(兴奋与抑制)的重要物质,包括多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)等。在生命活动中,中枢神经系统所含有的单胺类的递质对机体各种生理能力不断地发挥调控作用,它们在脑组织中含量变化范围较小,但可反应出中枢神经系统的生理功能状态,这类物质含量变化又可通过不同药物调节改善中枢神经系统的稳定平衡。失眠可能是中枢神经过度兴奋所致,临床上应用安神药治疗失眠多从调整或较低单胺类神经递质,使中枢神经由兴奋转向抑制而获得疗效。推测安神药的药理作用方式可能是通过调节中枢神经组织中单胺类神经递质及其代谢物的含量达到稳态平衡。本课题应用高效液相色谱仪检测安神中药健脾养心安神方对小鼠脑组织中的DA含量的影响,为探讨该方的作用机理提供依据。4.2pcpa对小鼠睡眠质量的影响人们在研究睡眠、失眠及其机制的过程中,采用了多种方法,目前建立的失眠动物模型主要有“孤立脑”“半孤立脑”制备的睡眠-觉醒周期模型,有用“旋转圆筒”或用对氯苯丙氨酸(PCPA)建立的睡眠剥夺模型。前三种模型多被使用来观察睡眠过程中及失眠状态下,体内各生理物质功能的变化,难以用于研究药物对失眠的疗效判定。有试验研究证实,用PCPA建立的睡眠剥夺模型,能使动物中枢神经系统兴奋并能影响动物的睡眠质量,导致动物失眠。故本试验采用PCPA建立的睡眠剥夺模型。28~30h后,造模小鼠昼夜节律消失,白天活动不停,总睡眠量少,几乎均达到完全失眠。本模型能较好的模拟失眠症的临床表现,是一种较理想的动物模型。本实验采用高效液相色谱法测定大脑下丘脑DA的含量,结果发现用PCPA造模后,脑中多巴胺(DA)的含量明显升高,也就是说,用PCPA造模后动物所出现的烦躁、兴奋、失眠可能与其可以使DA等单胺类递质含量升高有关。经健脾养心安神方治疗后,能减少失眠小鼠下丘脑中升高的DA含量,与正常对照组比较,模型组脑中的DA含量明显升高。安定组能降低PCPA所致的脑中DA含量的升高(P<0.01),与低剂量组无显著性差异(P>0.05),但没高剂量组明显(P<0.05)。健脾养心安神方高、低剂量组能降低由PCPA所致的脑中DA含量的升高作用,与模型组有显著性差异(P<0