脓汁和粪便标本中病原菌的检测-3

斜面4支，空气、手指皮肤、细菌别离培养物〔上次实验平板〕器材准备医学微生物学实验

综合性实验三空气细菌学检查结果分析手指皮肤细菌学检查结果分析空气的细菌学检查组号采样时间(min)采样地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU/m3＝50,000N÷AT≈86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟)CFU：colonyformingunitWHO推荐的医院各部门空气细菌标准级别cfu/m3适用范围Ⅰ级区＜10器官移植、心血管、矫形等外科手术室，保护性隔离室，灌注或配制注射液实验室Ⅱ级区＜200无菌室、手术室、供应室、婴儿室、中心灭菌单位、术后恢复室、早产儿及产房、重症监护病房Ⅲ级区200～500一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手术室浴室我国公共场所空气卫生细菌学标准（GB9663～9673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）撞击法cfu/m3沉降法个/皿适用范围≤1000≤103～5星级宾馆、饭店≤1500≤202星级以下宾馆和非星级带空调宾馆、饭店≤2500≤30普通饭店、招待所、酒吧、茶座、咖啡厅、图书馆、博物馆、美术馆、飞机客舱≤4000≤40音乐厅、影剧院、录像厅（室）、游艺厅、舞厅、理发店、美容院（店）、游泳馆、体育馆、医院候诊室、候机室、旅客列车车厢、轮船客舱、饭馆（餐厅）≤7000≤75展览馆、商场（店）、书店、候车室、候船室手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+第2格为洗手后

常规(甲、丙)洗手方法：?

标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：？第4格空白对照：-医学微生物学实验

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测〔三〕菌落特征观察P11细菌纯培养P10油镜使用方法〔讲解〕脓汁和粪便标本检验〔录像〕菌落特征(ColonyCharacteristics)大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约1～3mm)，小(直径约1mm以下)。形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规那么等。边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。外表：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或枯燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。细菌的纯培养PureCultures脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、外表光滑、湿润、边缘整齐、不透明。37℃培养24小时

粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径1～2mm。37℃培养24小时

假设培养、放置时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色，或者菌落中心黑色，边缘粉红色。密集或半密集区域的菌落，不一定是单菌落，有可能是菌落形成单位〔CFU〕。37℃培养36小时

斜面接种分工甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面丙→伊红美蓝平板→紫黑菌落→1支斜面丁→伊红美蓝平板→粉红菌落→1支斜面

※斜面正面上2/3作标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。※选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落。※在平皿底部玻璃上，画个大圈选取菌落，得到同组同学认可，才能挑取。画圈选菌落画圈选菌落甲→黄色丙→紫黑乙→白色丁→粉红接种环→套住菌落→轻刮取菌斜面接种法StreakSlantMethod甲→黄色,乙→白色。丙→紫黑,丁→粉红。标记：组号，颜色细菌接种在斜面培养基的外表。生物平安警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。灭菌收集平板→灭菌桶内〔平板底部朝下，盖朝上放置〕→速送灭菌室→高压蒸汽灭菌→洗刷。奥林巴斯CX21型生物显微镜使用须知显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。★如果拿住载物台①和镜筒②等部位搬运的话，有可能会造成损坏。开关与调整光强开或关之前，必须将亮度调整旋钮②按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。电源开关①拨到∣侧为开，拨到○侧为关闭。按箭头方向转动亮度调整旋钮②变亮，相反方向转动那么变暗。聚焦从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮①，使物镜③尽可能接近标本。一边看目镜，一边慢慢逆箭头方向转动粗调旋钮①，使载物台下降。看到标本以后，用微调旋钮②来正确对焦。★10倍物镜的工作距离〔WD，从物镜到标本的距离〕为10.5mm。★油镜的WD为0.13mm。调整聚光镜位置和孔径光阑用聚光镜上下移动旋钮①，将聚光镜转到最上面。在孔径光阑环②上刻有物镜倍率〔10倍，100倍等〕，观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。转换物镜旋转物镜转盘①，将希望使用的物镜〔10倍、100倍〕转到标本的上方。100倍浸油物镜使用方法油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油，排除油内气泡。香柏油折射率n=1.515空气的折射率n=1.000玻璃的折射率n=1.520油浸镜的原理光线滴加香柏油可使光线更多进入物镜,防止光线通过折射率低的空气而散失,以提高物镜的分辨率,使物象明亮清晰。放大倍数：目镜10倍×物镜90或100倍。≈奥林巴斯CX21型生物显微镜〔实验柜内，每人一台〕注意：只能横放，不得竖放。显微镜油镜的使用P1310×物镜→标本位置→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中,几乎与标本接触〔工作距离0.13mm〕→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源。油镜处理：擦镜纸拭去香柏油→擦镜纸沾少许乙醇和乙醚〔7:3〕混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。显微镜罩上防尘罩→横放在实验柜内。★(顺德校区〕实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近的电源插座。★〔校本部〕实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧的插座。医学微生物学实验

综合性实验三、一空气、手指皮肤的细菌学检查结果分析脓汁和粪便标本中病原菌的检测菌落特征观察P11细菌纯培养P10油镜使用方法〔讲解〕脓汁标本检验〔录像〕肠道致病菌的别离鉴定〔录像〕思考题在微生物学实验中,怎样才能防止杂菌的污染?空气的卫生标准规定如何