DB21-T 3648-2022 鹿冷冻精液生产技术规程

65.020.30CCS

B

4421 21/T

3648—2022鹿冷冻精液生产技术规程 辽宁省市场监督管理局 发

布DB21/T

3648—2022本文件按照

GB/T

1.1—2020《标准化工作导则 第

1

部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。督检验中心、桓仁满族自治县重点产业发展服务中心。本文件主要起草人：关春梁、邓福金、赵刚、李宁、关伟国、许传友、刘映雪、罗剑通、陈庆利、杜岳纯、樊琳琳、田景鑫、丁国伟、杜学海、宫婷、范雪、周金丹。我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

2

号），联系电话本文件起草单位通讯地址:桓仁强风鹿业科研繁育基地（本溪市桓仁县铧来镇），联系电话：024－48123222。DB21/T

3648—20221 范围冻、冻精活力检查、冻精包装储存和记录等技术内容。本文件适用于梅花鹿、马鹿的冷冻精液生产。2 规范性引用文件文件。GB/T

5458 液氮生物容器GB/T

6935 GB/T

6936 东北马鹿种鹿NY

1181 输精细管3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 采精前准备4.1采精场所应保持安静、宽敞、明亮，地面清洁卫生。4.2 采精员应剪短指甲，更换好工作服和鞋帽，戴上工作手套。4.3 种公鹿4.3.1种公鹿应符合

GB/T

6935

和

GB/T

6936

体质健康，无规定疫病。4.3.2 种公鹿采精前

h

应停止饮水和饲喂。4.4 器具和药品电子天平（0.01

mg）、磁力搅拌器（20

mL～1000

）、三角烧杯（

mL）、量筒（50

）、0.5

～5

mL32

℃～

0

V～30

V电极棒（Φ

mm）、双目生物显微镜（200倍）、恒温加热板（37

38

℃）、简易冷冻箱DB21/T

3648—2022（50

mm×80

mm×40

mm）、自动冷冻仪、自动细管灌装机、精子密度测定仪、托架（支）、冷藏柜（3

5

℃）、冰箱（0℃～5

℃）、塑料盒（

mm×15

mm）、液氮罐（

L）、一次性长臂塑料手套、灭菌纱布、毛巾、医用不锈钢手术剪、细管夹（23

cm）、集精杯（

mL）、液体石蜡、包装袋（170

mm×45

）、拇指管（Φ13

）、细管（

mL）、封口粉（聚乙烯醇粉）、载玻片（76

mm×26

×1

mm

）、盖玻片（18

mm×18

mm精（75%）、陆眠宁（盐酸塞拉嗪）、鹿醒宁（盐酸苯噁唑）、（三羟甲基氨基甲烷）、柠檬酸、果糖、甘油、青霉素、链霉素等。4.5 器具清洗和消毒使用后或新购置的玻璃器皿、金属制品、橡胶制品，如集精杯、烧杯、量筒、滴管、剪子、镊子、胶塞、电极棒等，先在加有洗涤剂的温水中洗刷，之后用清水冲洗干净，晾干后用精自然挥发后放无菌箱中保存备用。4.6 稀释液4.6.1稀释液配方Tris2.42

g

、柠檬酸

g

、果糖

1.0

g、甘油

7.0

、卵黄

mL、双重蒸馏水

mL、青霉素、链霉素各

10

万

IU。4.6.2稀释液配制方法准确称取Tris2.42

g、柠檬酸

1.38

g、果糖

1

g，倒入三角烧瓶中，加入73

mL双重蒸馏水轻摇混62

℃～

℃水浴锅中30

7

mL、卵黄20

mL、青霉素、链霉素各10万

，用磁力搅拌器搅拌30

，盖紧胶塞，放入3

5

℃冰箱中待用，放置时间不得超过

h。4.7 细管4.7.1质量应符合

NY

1181

的规定。4.7.2标记应符合附录

A

的规定。4.8 包装袋包装冻精前，包装袋上依次标记品种、鹿号、生产数量、冻精活力、生产日期和鹿场名称等信息。5 采精5.1 采精频率岁～32

w采精14107

d～

d1次。5.2 采精方法5.2.1保定用陆眠宁2

mL将鹿麻倒，头部稍垫起，拉出舌头，四肢用木棒和麻绳固定。c)

精子密度≥6×

个c)

精子密度≥6×

个/mL；5.2.2 处置擦干阴茎及龟头。5.2.3 采精方法15

～

cm先将电刺激采精器电压调至“0”位，打开电源开关，刺激电压从2

V开始由低向高，但不应超过6

V。每次增加1个档位，在每档通、断交替刺激23次，每次通电3

s、间断2

s，直至射精。从开始射精1次更换1电刺激采精器旋钮归“0”，然后拔出电极棒，公鹿注射鹿醒宁4

mL～6

mL使其苏醒。6 精液品质评定6.1 质量要求新鲜精液应符合下列条件：a)

色泽乳白色或灰白色；b)

精子活力≥65%；8d)

精子畸形率≤。6.2 评定方法6.2.1 外观检查色，略有腥味。6.2.2 采精量采用目测法，用肉眼直接观看量筒上刻度读取数量值（精确到0.1

mL），单位为mL。6.2.3 精子活力取精液5

µL～10

µL于载玻片上，加盖盖玻片后在37

℃恒温装置的显微镜上进行评定，观察视野中前向运动的精子所占比例，确定活力，用百分率或相应数值表示。评定时每个样片至少观察3取其平均值，精子活力应大于等于。6.2.4 精子畸形率取精液5

µL～10

µL于载玻片上，加盖盖玻片后在37

℃恒温装置的显微镜上进行评定，观察视野中畸形精子所占比例，确定畸形率，用百分率或相应数值表示。评定时每个样片至少观察3个视野，取其平均值，精子畸形率应小于等于15%。DB21/T

3648—20226.2.5 精子密度使用精子密度测定仪器进行测定，精子密度应大于等于6亿/mL。7 精液稀释7.1 稀释液量的确定根据精液的活力、密度、采精量等确定应加稀释液量。稀释液量按公式（1）进行计算。V

P1000

0.23

L………………（1）式中：V

——应加稀释液量，单位为毫升（mL）；——采精量，单位为毫升（mL——精液密度，单位为亿个/mL；

——解冻后预估的精子活力；1000——每支细管冻精所含有效精子数，单位为万个；0.23

——每支细管精液容量，单位为毫升（mL）。7.2 稀释方法在

22

℃～25

℃环境条件下，用经

℃水浴加温的稀释液加入精液中至最终稀释量。稀释时，把稀释液沿着精液容器的壁缓缓加入精液中，轻摇混匀。7.3 活力检查精液稀释后，按照

6.2.3

规定的方法评定活力。8 精液分装8.1 精液分装8.1.1 人工分装精液稀释

后，在

22

℃～

℃环境条件下，用移液枪或胶头滴管把精液吸入细管，要求细管上部精液充溢，底部有

8

mm～10

空隙，并用封口粉把细管底蘸封。8.1.2 机械分装精液稀释

后，在

22

℃～

℃环境条件下，用自动细管灌装机进行精液的分装、标识和封口。8.2 精液平衡分装后的细管精液放在塑料盒中或用毛巾包裹，放入

3

℃～5

3

h～4

h。DB21/T

3648—20229 精液冷冻9.1

上架在4

6

作者，放进冷冻箱时也应如此摆放。如同一个托架上有不同鹿的细管精液，应分开码放。9.2 冷冻9.2.1

简易冷冻箱冷冻箱要有良好的隔热性能，深度应在50

cm以上。使用前加入液氮预冷，液氮面的高低应根据冷冻细管精液的数量多少确定。托架下沿与液氮面之间的距离应保持在

～3

cm，调整好液氮面后，把已放置细管精液的托架迅速放入箱内，盖严盖子，8

～

完成冷冻过程。9.2.2

自动冷冻仪操作程序冷冻。10 冻精活力检查用细管夹随机取1支冻精迅速浸入

℃水中，待冻精溶解10

s～

s后取出，擦干细管表面水珠，剪掉细管两端，取一滴精液于载玻片上，按照6.1.3规定的方法评定活力，活力大于0.3为合格。11 冻精包装与储存11.1 包装11.1.1 冻精包装应在-140

℃以下的环境中进行，包装后的细管冻精其棉塞端应朝向拇指管底部，不应倒置。拇指管底部应朝向包装袋底部装入包装中，系好封口绳。11.1.2 每个拇指管包装冻精数量不应超过

支，每个包装袋包装拇指管数量不应超过

4

11.2 储存11.2.1 冻精应浸没于液氮罐的液氮中，并定期添加液氮，液氮罐应符合

5458

的要求。11.2.2 冻精由一个液氮罐转移到另一个液氮罐时，在液氮罐外停留时间不应超过

3

s。12 记录鹿冷冻精液生产记录见附录B，鹿冷冻精液生产记录应保存2DB21/T

3648—2022附 录 A（规范性）鹿细管冷冻精液标识方法鹿细管冷冻精液标记由四部分组成，排列顺序如下：a) 第一部分：公鹿所在鹿场名称前四个汉