补肾中药更康颗粒的药效学及急性毒理实验研究

补肾中药更康颗粒的药效学及急性毒理实验研究绝经综合征是女性性激素的转变所致一系列症候群,可能导致身体、情感和社交障碍,每一位女性都要经历这一时期,只是症状轻重不一,而且中国人口基数大,发病率高,绝经综合征引起了重视。现代医学治疗以激素治疗为主,临床见效快,但其使用时机、持续治疗时间、剂型选择、副作用等备受争议。中医药疗效好、治疗方式丰富,副作用小的特点已受到人们的关注,近来随着中医药事业的崛起,中药复方的开发研究成了热点。国内外许多学者都从临床随机对照试验、动物实验、基因研究等多方面对中药复方进行了作用和机制的研究,而实验研究主要通过中药复方对调节生殖内分泌、抗氧化衰老、增强镇静催眠作用、增强免疫功能、增强学习和记忆功能等方面来进行,采取的动物模型主要有自然衰老模型、去势模型、化学药物诱导模型、细胞模型等。更康颗粒是王小云主任经过临床验证30余年的验方,功效:补肾填精,燮调阴阳。主要适合绝经综合征肾虚型人群。绝经综合征中医病机以肾虚为本,更康颗粒用药从治疗肾虚着手,兼顾他脏。目的:1.围绕补肾中药更康颗粒的临床疗效进一步开展其药效学研究,包括对更年期去势大鼠血清相关性激素、下丘脑单胺类神经递质、β-内啡肽、抗氧化功能相关物质及子宫的影响。2.观察研究SD大鼠24h内3次灌胃给予更康颗粒,在一定时间内所产生的毒性反应,了解其急性毒性作用剂量。方法:1.药效学研究:选取SD雌性大鼠80只,按随机数字表分为8组:空白对照组、假手术组、模型组、戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组、更康颗粒低剂量组、更康颗粒中剂量组、更康颗粒高剂量组,每组各10只,除空白组和假手术组外,其余6组大鼠手术去势,各组经过灌胃给药4周(空白对照组、假手术组与模型组给予蒸馏水),采用ELISA法测定大鼠血清性激素、下丘脑神经递质(5-HT、5-HIAA、DA、NE)含量、β-EP、抗氧化相关物质(SOD、MDA、GSH-Px),取出子宫,计算脏器指数及检测子宫内膜厚度。使用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。2.急性毒理实验:最大给药量方法:选取40只雌性大鼠,按体重分层后,试验随机分为2组[受试物组(148.5g生药/kg)和溶媒对照组(纯净水)],每组20只,各组均按30mL/kg体重1天内连续灌胃给药3次,每次间隔4h;每次灌胃给药后连续4h观察大鼠出现的毒性症状及症状起始的时间等情况。在灌药前、灌药第1天、灌药第7天、灌药第14天测量体重。药后连续观察14日,每天上下午各1次,观察大鼠外观、行为、精神、对刺激的反应、分泌物、排泄物等。所有大鼠均进行大体解剖,肉眼观察其器官体积、颜色、质地的改变;若任何器官出现体积、颜色、质地等改变时,均进行组织病理学检查。结果:1.更康颗粒的药效学研究(1)更康颗粒对去势模型大鼠性激素的作用:①与空白对照组、假手术组相比,模型组大鼠血清E2含量水平降低(P<0.01),LH、GnRH、T含量升高(P<0.01),FSH含量升高(P<0.05),空白组与假手术组比较,FSH、LH、E2、GnRH、T含量差异无统计学意义(P>0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠血清FSH、LH、GnRH、T含量降低(P<0.05、P<0.01),血清E2含量升高(P<0.01);中剂量组大鼠血清FSH、LH、GnRH、T含量降低(P<0.05、P<0.01),E2含量升高(P<0.05);低剂量组大鼠血清FSH、LH、GnRH、T、E2与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。③更康颗粒中、高剂量组血清FSH、LH、GnRH、T水平与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P>0.05),更康颗粒中、高剂量组血清E2含量与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P>0.05),调节作用相近。④更康颗粒低剂量组T、E2含量与空白对照组、假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),更康颗粒低剂量组FSH、LH、GnRH以及中、高剂量组的FSH、LH、GnRH、T、E2与空白组、假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。⑤在调节性激素水平上,更康颗粒高剂量组均值优于更康颗粒低、中剂量组。(2)更康颗粒对去势模型大鼠下丘脑神经递质的作用:①与空白对照组、假手术组相比,模型组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE含量升高(P<0.01),空白对照组与假手术组相比,5-HT、5-HIAA、DA、NE水平差异无统计学意义(P>0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE含量降低(P<0.01);中剂量组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE水平降低(P<0.05,P<0.01);低剂量组大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE水平差异无统计学意义(P>0.05)。③更康颗粒低剂量组去势大鼠下丘脑5-HT、DA含量与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异有统计学意义(P<0.05),戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组作用优于低剂量组;更康颗粒低剂量组5-HIAA、NE含量以及中、高剂量组去势大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA、NE含量与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P>0.05),调节作用相近。④更康颗粒低剂量组去势大鼠下丘脑NE含量与空白组、假手术组差异有统计学意义(P<0.05),更康颗粒低剂量组去势大鼠下丘脑5-HT、5-HIAA、DA以及中、高剂量组5-HT、5-HIAA、DA、NE含量与空白组、假手术组差异无统计学意义(P>0.05),使之趋于正常水平。⑤在调节下丘脑单胺类神经递质上,更康颗粒高剂量组均值优于更康颗粒低、中剂量组。(3)更康颗粒对去势模型大鼠下丘脑β-EP的作用:①与空白对照组、假手术组相比,模型组大鼠下丘脑β-EP含量降低(P<0.01),空白对照组与假手术组相比,β-EP含量差异无统计学意义(P>0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠下丘脑β-EP含量差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组大鼠下丘脑β-EP含量升高(P<0.05);低剂量组大鼠下丘脑β-EP含量差异无统计学意义(P>0.05),③更康颗粒中、高剂量组大鼠下丘脑β-EP含量与与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P>0.05),调节作用接近。④更康颗粒低剂量组与空白组、假手术组差异有统计学意义(P<0.05),更康颗粒中、高剂量组丘脑β-EP含量与空白对照组、假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。⑤在调节β-EP水平上,更康颗粒高剂量组均值高于更康颗粒低、中剂量组。(4)更康颗粒对去势模型大鼠抗氧化相关物质的作用:①与空白对照组、假手术组相比,与空白对照组相比,模型组大鼠血清SOD、GSH-Px含量降低(P<0.01),与假手术组相比,模型组大鼠血清SOD、GSH-Px含量降低(P<0.05、P<0.01);与空白对照组、假手术组相比,MDA含量升高(P<0.01),空白对照组与假手术组相比,血清SOD、MDA、GSH-Px含量差异无统计学意义(P>0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠血清SOD、GSH-Px含量升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.01);中剂量组大鼠血清SOD、GSH-Px含量升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.05);低剂量组大鼠血清GSH-Px含量升高(P<0.05),SOD、MDA指标含量差异无统计学意义(P<0.05)。③与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组比较,更康颗粒中、高剂量组SOD、MDA含量与与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组比较差异无统计学意义(P>0.05),更康颗粒的低、中、高剂量组大鼠血清GSH-Px与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P>0.05)。④更康颗粒中、高剂量组大鼠血清SOD、MDA含量与空白对照组、假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),更康颗粒低、中、高剂量组大鼠血清GSH-PX含量与空白对照组、假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。⑤在调节抗氧化相关物质上,更康颗粒高剂量组均值优于更康颗粒低、中剂量组。(5)更康颗粒对去势大鼠子宫的作用:①与空白对照组、假手术组相比,模型组大鼠子宫系数降低(P<0.01),子宫内膜厚度减小(P<0.01),空白对照组与假手术组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。②与模型组相比,更康颗粒高剂量组大鼠子宫系数升高(P<0.05),子宫内膜厚度增加(P<0.05);更康颗粒低、中剂量组大鼠子宫系数与子宫内膜厚度差异无统计学意义(P>0.05)。③与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组比较,更康颗粒低、中、高剂量组大鼠子宫系数和子宫内膜厚度与戊酸雌二醇组、坤泰胶囊组差异无统计学意义(P>0.05),说明其作用相近。④与空白组、假手术组相比,更康颗粒低、中、高剂量组子宫系数、子宫内膜厚度与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05);更康颗粒中、低剂量组大鼠子宫内膜厚度与假手术组差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05),高剂量组子宫内膜厚度与假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。⑤在调节子宫系数、子宫内膜厚度方面,更康颗粒高剂量组均值高于更康颗粒低、中剂量组。2.更康颗粒的急性毒理实验研究在此期间,大鼠精神状态良好,外观未见异常表现,行为活动正常,未见异常分泌物及排泄物,至试验结束时无大鼠死亡。受试物组大鼠体重在灌药前、灌药第1天、灌药第7天、灌药第14天与溶媒对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。受试物组与溶媒对照组大鼠在观察期结束时按计划处死,大体解剖肉眼观察其体表完整、被毛柔顺、无外伤及破溃等;皮下无出血点及色素沉着等;腹腔、胸腔无积水,脏器位置正常;各器官的体积、颜色及质地等均未发现病变及异