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文档简介

补体依赖的细胞毒实验

Complement-dependentcytotoxicity抗原（antigen,Ag）:

能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之特异性结合的物质。抗体(antibody,Ab)：

B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异性结合抗原的一组糖蛋白。

抗原-抗体反应的特点与影响因素反应条件：

适当的温度电解质酸碱度特点：

特异性可逆性可见性（合适的抗原抗体比例）凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。补体参与的反应免疫标记技术（immunolabellingtechnique）:用示踪物质标记抗原或抗体，进行抗原-抗体反应的检测。

抗原-抗体反应的基本检测方法本次实验目的1掌握细胞毒实验的原理2补体依赖细胞毒实验基本操作步骤3了解补体依赖细胞毒实验的应用补体的作用和激活途径补体的作用溶菌和溶细胞促进中和溶解病毒调理吞噬炎症介质免疫粘附补体的激活途径经典途径旁路途径MBL途径

实验原理+补体台盼蓝染液抗原与抗体结合实验主要材料小鼠抗血清（

）3.补体：新鲜豚鼠血清（补）4.

磷酸盐缓冲液（PBS

），载玻片、盖玻片、一次性移液管5.台盼蓝染色液(讲台上取)实验材料需要清洗回收:请及时清洗完交至讲台处由老师检查：剪刀、镊子、玻璃培养皿、

研磨棒。操作步骤一、小鼠胸腺/脾脏细胞悬液的制备

4~6周龄小鼠断颈处死，取出胸腺/脾脏放至含有1~3mLPBS(一次性移液管)的平皿中，置于复筛网上，用剪刀和镊子将组织处理成单细胞悬液。胸腺注意事项：小鼠断颈要迅速、彻底，以防小鼠挣扎过程中出血过多。脾脏操作步骤振荡混匀，置37C水浴箱，10min振荡混匀，置37C水浴箱，20min每管各加50ul0.4%台盼蓝，混匀后立即镜下观察振荡混匀，滴片加盖玻片，镜检Ag+Abcomplement二、细胞毒实验：按下表加样PBS/脾脏细胞结果观察

台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有意义。ABA.对照组B.实验组注意事项：台盼蓝染色后放置时间不能太长，2-5min之内观察结果，否则出现假阳性，需要重新染色。计算杀伤率：在高倍镜下计数200个细胞中死细胞的百分率补体依赖

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