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文档简介
小鼠PCR基因鉴定一、 取材：小鼠出生后3-4周，给小鼠打耳标，并依照雌雄分笼饲养，需要鉴定的小鼠剪尾部、脚趾或耳部边缘，放置好在印管中，并做好相应的标志，放置标本与标志混乱。处理：(1)将A液一定量加入带有样本的印管中，在98r孔板中煮1小时取出印管后，再加入B液75pl二、 扩增反应体系Mix 5plH20 3plPrimer10.5mlPrimer20.5ml加样先计算出所需总量，加入印管中，混合均匀，离心，摆放好单个PCR管，将上述混合液放入PCR仪，每管9pl盖紧。扩增打开PCR仪并设置好程序，将PCR管放入PCR仪，扩增，40多分钟可以完成。保存扩增后，取出PCR管，放入冰中保存。三、 琼脂糖凝胶电泳制胶：电子天平称取计算后的琼脂糖，小心倒入干净的锥形瓶内（锥形瓶内保持干净）。加入TAE缓冲液，盖上锡箔纸，加热。取制胶模具、梳子，安装固定，保证不会漏胶。戴上手套，取出锥形瓶，掀开锡箔纸，冷却3-4分钟，加入染色剂，贴着远梳子端的制胶模板壁缓慢倒入琼脂糖溶液，若有气泡。室温放置凝固。上样：胶凝固后，双手缓慢垂直地拔出梳子，避免破坏梳孔。将胶板放上电泳槽，注意正负极变化，加入1XTAE缓冲液，从胶表面开始缓慢倒入，自然流向两边，然后依次对孔加入对应的DNA样品，剩余样品放入冰箱储存。电泳：合上电泳槽，正负极对好，检查底部是否有气泡升起。有气泡则电泳开始。成像：观察是否出现条带，若出现条带，则停止电泳，打开凝胶成像系统，对结果进行比对、记录并拍照。关闭系统，登记实验记录，取出胶并清洗仪器器材。鼠灌注取脑1、 麻醉：根据鼠的体型、重量适量注射麻醉剂，腹腔注射，用手套防止被鼠抓伤，虎口卡住颈部肌肉及其周围肌肉，注射药物时反推针筒活塞以防有空气，针头针刺入鼠腹腔注射药物后，并放回笼中，等待药物起效。2、 开胸：找到剑突，用弯剪在剑突附近把毛剪干净，露出表层皮肤，再沿肋弓朝两边剪开，注意深度，别剪到心脏，待心脏暴露出后，仔细剔除神经，剪掉心包膜，用镊子夹持剑突并将其连胸廓上翻固定，使心脏充分暴露。3、 穿刺：用镊子轻轻夹住心室（心尖处），但不要夹的过紧，要让心脏内留有一定的间隙。用小剪刀在心尖处先剪开一个一个小口，再插入灌注针。再将灌注针卡死在镊子（右心耳在灌注针插入后用小剪刀剪开）4、 灌注：0.9%Nacl200ml，然后再注射2管多聚（先快后慢）成功标志：（1）生理盐水：在右心耳流出液体血色较浅基本澄清，眼珠、肝脏变白一一排出血液成功。（2）多聚甲醛：使鼠四肢僵硬。5、 取脑：（1）枕骨大孔用剪刀剪断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨，注意不要损伤脑组织。（2） 用镊子小心掰
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