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文档简介
11.220
41DB34
鸭肝炎病毒
RT-PCR检测方法Duplex
RT-PCR
assay
for
detection
type
安徽省市场监督管理局
DB34/T
2020前 言
DB34/T
2020鸭肝炎病毒
1
型和
3
型双重
检测方法
hepatitis
virus）
chain
reaction）
Taq酶：Taq
murine
buffer
acetate-EDTA
buffer）
3.1
3.2
台式低温高速离心机（最大离心力
12000
3.3
3.4
3.5
3.6
3.7
3.8
3.9
微量移液器（2.5
L；1000
4.1
RNA
RNA
4.2
DB34/T
20204.3
4.4
4.5
DEPC
4.6
4.7
dNTP。4.8
4.9
RT-PCR
4.10 EB（10
4.11 磷酸盐缓冲液（PBS，0.01
中的
4.12 50TAE
4.13
中的
A.3。4.14
DHV-3
10
pmol/4.15
DHV-3
15
mL
121（2）℃，
15
采取病死或剖杀鸭的肝组织
1:5
倍体积加入
0.01
pH
min，取上清液转入
1.5
mL
离心管中，-80℃保存备
mL
检测6.1
RNA
提取
Trizol
12000
min，吸取上清液移入新的离心管中，加入
200
室温静置
min。
12000
积异丙醇，上下颠倒混匀，室温静置
10
min。
12000
10
min，小心弃去上清液，加入
水配制）。
12000
DEPC
DB34/T
2020
PCR
dT
Primers
L，dNTPs(10
mmol/L)
L。
水浴锅或
PCR
仪中，65℃
作用
min，冰上急冷
min。
Buffer
L，RNase
L，DEPC
L。
6.3
10PCR
2.5
上游引物各
下游引物各
L，
L，Taq
DNA
聚合酶
0.25
L，反转录产物
L，灭菌去离子水
L，
L。
94℃
min；94℃
50
s，72℃
min。
TAE，以
V/cm
30
左右。电泳后，置于凝胶成像系统下观察，根据
DNA
marker）判断
RT-PCR
7.1
7.2
被检样品在
720
bp
核酸阳性，被检样品在
642
bp
性条带为
DHV-3
所示。DB34/T
2020
Marker；
阳性样品；
阳性样品；
PCR
DB34/T
2020
0.2
mol/L
磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）71.6
g，先加适量灭菌去离子
0.2
mol/L
磷酸二氢钠溶液：称取磷酸二氢钠（NaH2PO42O）27.6
g，先加适量灭菌去离子水
量取
0.2
moL/L
磷酸氢二钠溶液
36
mL，0.2
mol/L
14
mL，称取氯化钠
8.
800
m
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