大白菜霜霉病诊断及检测技术标准

1由卵菌门霜霉属寄生霜霉菌（Peronosporaparasitica(Pers.)Fr.）引起的一种气传病害，属专性寄生性卵菌病害，该病害是我省大白菜最重要的叶部病害之一，不同生育期均严重发生，流行重病大白菜病部出现的异常特性，如叶片呈现淡黄色或黄绿色病斑，后呈黄褐色，多角形或不规则形大白菜病部出现病原菌子实体，如叶背病部产生白色至灰白色霜状霉层等。2病情指数(缩写为Dl)又叫发病指数、感染指数，与发病率一样是表示发病程度的一种方法。发病率是指一个群体中发病的多少，用百分率表示，病情指数(DI)是根据一定数目的植株或植株器官各病级(把植株或植株某一器官感染病害轻重程度划分为等级称为病级)核计其发病株(器官)数所得带光源的扩大镜、双目解剖镜(l0x～50x)、显微镜(100x～1000x)、离心机(1000r/min~成、10%氢氧化钾溶液配制：取氢氧化钾1用解剖针挑取病斑上霉状物制片镜检，用显微镜观察有无病原菌的孢囊梗和孢子囊，记录其形态将未发现霜霉层的可疑大白菜病斑及碎片，置250ml三角瓶内，加适量蒸馏水浸软，振荡器激烈沉淀液置载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜检查有无大白菜霜霉病菌的孢囊梗和孢子囊，每批样品至3选取病叶上霉状物稀少的老病斑置于小烧杯中，加适量10%的氢氧化钾溶液，煮沸5湿条件诱导发病，2～3周产生明显病斑及大量病菌后，制片制片、镜检和显微照相描述孢囊梗、孢子采集典型大白菜霜霉病叶，毛笔沾取叶面病菌于盛有无菌水的烧杯中，再滴加1000μg/mL十二烷基硫酸钠（SDS)，高速搅拌（1200r/min)3min～5min后获得孢子囊悬浮液，用血球计数板计数孢子囊并稀释至接种浓度，调至孢子囊浓度为5×105个/ml。为了不影响接种效果，孢子囊悬浮液放出为止。接种后白菜植株置于适宜环境条件下，黑暗保湿（RH为70%～80%)12湿条件下光照14h每天。接种期间白天温度控制在25℃~28℃范围内，夜晚温度控制在20℃~22℃织上收集大量病菌繁殖体，制备玻片进行显微观察描述，并制备孢子囊悬浮液；将收集或制备的孢子囊悬浮液接种于健康大白菜叶片，经适宜条件诱发出产生典型大白菜霜霉病症状；从接种发病的大白4为掌握大白菜霜霉病发生动态，5点取样、间隔7天调查一8.4病株率(percentageofdiseasedp根据病害症状描述，逐份材料进行调查，用分级法表示大白菜病叶的发病程度,记载病情级别，s——各病情级别代表数值；S——最高病情级别代表值。6大白菜霜霉病病原菌（Peronosporaparasitica(Pers.)Fr.）属管毛生物界(Stramenopila)卵菌门(Oomycota)卵菌纲（Oomycetes）霜霉目(Peronosporales)，霜霉科（Peronosporaceae），霜霉菌丝体无色，无隔，在细胞间生长，靠吸器伸入细胞内吸收水分和营养，吸器为囊状、球状或分主枝基部稍膨大，重复二叉状分枝，顶端2～5次分枝，主轴和分枝呈锐角，顶端小梗尖锐，弯曲，每管，不形成游动孢子。卵孢子单胞，球形，黄褐色，直径30～40μm表面光滑，胞壁厚，表面皱缩或A.3.1子叶期发病，叶背出现白色霉层，高温条件下，病部常出现近圆形枯斑，严重时茎及叶A.3.2成株期，叶正面出现淡绿至淡黄色小斑点，扩大后呈黄褐色，病斑受叶脉限制，呈多角种株受害，叶、花梗、花器、种荚均可长出白霉，花梗、花器肥大畸形，花瓣绿色，种荚淡黄色，瘦大白菜霜霉病菌卵袍子产生于病叶组织内，病叶经冰冻匀浆使大多数叶肉组织、气孔细胞及维管取直径为1cm大白菜霜霉病病斑或可疑叶片，称量0.1g叶片(约含叶片15～20个)，加磷酸缓冲液(pH:7.O)2ml，用玻棒搅拌，在室温下静置15min，放入-18℃冷冻室内浆器内，加(1～2)mL磷酸缓冲液冲洗，匀浆4～6min,用孔径为60µm筛网，收集滤液后，1000r/min离心3min，去上清液，加乳酚油定容至1mL,每批样品至少检查10个74℃离心5min），取上清菌液5mL；病组织或菌液分别加液氮冷冻研磨，转入1.5mL离心管中待用。塑料杵碾碎待用。盛有不用病菌来源的DNA离心管分别加入300～500uLCTAB提取液（其中含0.1g蛋5min；上清用体积的氯仿：异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000rpm，4℃离心5min）；取上清，加），）；淀