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文档简介
CSB1
DB6111杨凌农业高新技术产业示范区地方标准DB1T3—9谷子杂种快速鉴定技术规范TechnicalSpecificationforRapidIdentificationofFoxtailMilletHybrids发布实施杨凌示范区市场监督管理局发布1T—9前 言本规范依据T0本规范由杨凌示范区农业标准化技术委员会提出并归口。本规范起草单位:西北农林科技大学。T0本规范首次发布。II1T—91T—9谷子杂种快速鉴定技术规范范围()T2粟()T8术语和定义1亲本1亲本ss杂交育种中所选用的雌雄性个体。2杂种1d13S标记eesr一般为~个)鉴定步骤提取选取符合TT提取基因组A含量,用(0μ。R1扩增体系反应总体积(),×f(,(5m)μ,(μ)μ,(μ)μ,(μμ。。反应程序55℃变性,0℃5,2℃延伸2μ非变性×gf间内置于0扩增产物用制胶洗涤:将封底:每板5lL0过硫酸铵和5μ合1。580μμ,聚合。待凝胶1待凝胶1后,将与×g混合后的扩增产物每个点样孔加入3。电泳缓冲液为×,~5~。银染以上。2,振摇。显影:脱色完成后,倒出,加入0现配的显影液,待谱带清晰(以为准)后照相SR用附录中的引物进行记录见表。表1亲本间多态性引物记5。2引物编号所在染色体位置多态性引物位点数表2杂交组合号母本父本SSR引物组合F1基因型533附录A(资料性附录)实验相关试剂0%称取0g加入Ld,置于0。1L称取1d0μ至,用0。5L称取,加入约至,用d0。5L称取20d定容至0。氯仿()用06加入4×gf量取02LL55×称取8g、5硼酸和0L5L溶于中,置于磁力搅拌器上充分混匀,调节至,用至1。8称取8烯酰胺和0的×至140%S称取00Ld4固定用量筒量取0L051银染液4称取60d2显影液称取50Ld,)。55附录B(资料性附录)SR多态性引物1S见表。表1S引物编号(’)退火温度(℃)A06AGGCA0A0CGAA0A01ACAAAAAA0A03TACGGTCAT0A1CTGTTGA0A05GCTTTCTT5A4GTT5A8TACTC5A5CCCCGC5A9TACCCCAAT0A1ACCGTA0A9GCTCT0A03CCTAGCT5A1TACCCT5A6AGCCTTGAC566表2(续)引物编号(’)退火温度(℃)A1AACCGGA0A5GGTACGAA0A3CATGGGA0A0ATTTT0A6TTTAGTT5A0GGATGC5A0CCCTCACT0A8ATCCC5A02TCTTA0A6TGCCTCCC0A4TT
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