米根霉生长环境对产有机酸的影响机制及年产5000升单克隆抗体的工厂设计

④机体微量成分的测定

应用单抗结合其它技术，可对机体的多种微量成分进行测定。如放射免疫分析，即是利用了同位素的灵敏性和抗原-抗体反应的特异性而建立起来的方法，它可以测至10-9～10-12g，使原来难以测定的激素能够进行定量分析。除了激素，还可检测诸多酶类、维生素、药物和其它生化物质。这对受检者健康状态判断、疾病检出、指导诊断和临床治疗均具有实际意义。

综上所述，单克隆抗体在理论和实践上的应用成为解决生物学和医学等许多重大问题的重要手段。但是，上述应用的单抗属于鼠源性，用于人类疾病的预防和治疗时会产生异种蛋白变态反应，大大限制了其临床应用价值。而且，鼠源性抗体在人体内半衰期缩短，生物活性降低。因此，人们一直致力于人源性抗体的研究，如用人脾细胞与鼠骨髓瘤细胞杂交；用EB病毒转化人的B淋巴细胞；用基因工程法制备嵌合抗体等。但都遇到相当的困难。以分子生物学技术提取、扩增编码人抗体的DNA，构建质粒，建立组合抗体文库，再利用供者文库建立针对某一特定抗原的子文库是近年来形成的最新方法。以该技术制备的抗体片段(Fab)是人源抗体，具有建库简单、抗体表达稳定等特点。迄今已有多种抗体产生。可以预见，该技术具有良好的发展和应用前景[3]。1.3发展前景单克隆抗体的这些特征使它成为未来治疗学上研究的热点。在过去的三十年里,

从鼠源性单抗到全人源性抗体,

单抗在制备技术上取得了较大的进展。鼠源性单抗的免疫源性导致机体产生一系列的急性反应,

使药物的功效降低。全人单克隆抗体是制备单克隆抗体的一种新技术。它减少了鼠基因序列,

减少了抗抗体反应,

提高了单克隆抗体的功效和安全性。而且,

当前全人源性单克隆抗体技术的灵活性,

可以选择发挥单抗最优的药动学和药效学特性。在未来的几年里,

全人源性单抗将作为一种新的产物更多地用于疾病的诊断、治疗及研究。1.4生产技术的发展趋势目前大规模生产单抗的方法有体内接种法、体外细胞培养的发酵罐法、微囊法、中空纤维培养法以及DNA重组法等。现阶段，国内企业（含外企）单克隆抗体药物生产设备主要有传统型生产设备和一次性抛弃型生产设备两种[4]。1.5单克隆抗体的生产工艺单克隆抗体制备工艺流程可大致分为四个阶段：1.第一阶段为上游工作细胞的复苏、培养扩增；2.第二阶段为中游培养产物的粗纯分离；3.第三阶段为下游粗纯产物的精纯分装；4.第四阶段为单抗药物制剂生产。1.5.1上游工作细胞的复苏、培养扩增上游工作细胞的复苏、培养扩增该阶段从工作细胞的复苏开始，接种到摇瓶中恒温条件下进行细胞扩增，经历多级种子罐的的稳定扩增后，进入动物细胞生物反应器进行大量的细胞培养，细胞在扩增阶段生长并形成产物，目标产物分泌到细胞培养上清液中。待细胞培养和产物的形成完毕后，整个培养物（细胞和产物的混合物）将经过深层过滤，细胞将截留在深层过滤器中。分离后的产物仍留在澄清后的上清液中，含目标产物的细胞培养上清液暂时贮存于温度可控制的一次性储存容器中。该生产过程生产周期长（以1000L细胞培养为例，从工作细胞的复苏开始，经过扩增、培养，至目标产物收获，整个过程须45~50天）、生产过程温湿度控制严格（单抗的本质是糖基化蛋白质，生产过程中对温度有严格的控制要求）。该阶段以哺乳动物细胞作为表达载体，工作细胞中带入病毒会影响到成品的质量、危害病人，也可能对生产操作人员产生危害。故在生产过程中还须有完整的病毒防范措施[5]。1.5.2中游培养产物的粗纯分离上游收获的培养液过滤后，首先进行ProteinA的高效捕获亲和层析，去除大部分的杂质蛋白；经低pH孵育，以灭活极小概率可能存在的病毒颗粒。过滤后经阴阳离子交换后疏水层析、纳滤，以去除极小概率可能存在的病毒颗粒。该生产过程须有严格的温湿度控制和较为完整的病毒防范措施[6]。1.5.3下游粗纯产物的精纯分装粗纯产物溶液经过切线流过滤超浓缩和缓冲液交换后，再按要求加入所需赋型剂和蛋白稳定剂后，将原液进行分散包装（以匹配制剂生产用量）进行贮存。该生产过程须有严格的温湿度控制，病毒及其他活性物质已在中游阶段完全截留，此阶段认为是相对洁净的阶段。1.5.4单抗药物制剂的分装生产单抗药物制剂的形式一般为非最终灭菌的无菌制剂，主要为预充针、小水针和冻干粉针。该阶段生产结束后送至车间成品库冷藏。该生产过程须有严格的无菌环境和温湿度控制。制剂区域在设计中为单独一块生产区域，在制剂配液前，原液须冷库冷藏，中间检验合格后方可运至制剂区进行后续制剂工段的生产[8]。2市场预测与建设规模2.1市场需求尽管单克隆抗体-杂交瘤关键技术诞生于1975年，应用抗体治疗淋巴癌的试验也于1982年获得成功，但由于药物研发艰难，FDA审批时间长，直到1986年用于治疗肾移植排斥反应的鼠源化抗体OrtholoneOTK3才宣告上市。但由于鼠源单抗副作用大，部分临床试验效果不佳等原因，单抗市场一直不见起色，直到第一个单抗问世10年后的1996年，全球单抗市场仍不足10亿美元。情况在1997年FDA批准Genentech的嵌合抗体Rituxan（国内商品名为美罗华）上市后得到了极大的改善。作为第一个治疗肿瘤的嵌合抗体，Rituxan成为了单抗领域的首个明星药物。未来与它一起跻身10亿美元销售俱乐部的还有次年上市的嵌合单抗Remicade以及人源单抗Herceptin、Synagis。与此同时，整个单抗行业也得到了迅速扩张，销售额从1999年的12亿美元到2011年的671亿美元。截至2013年，经美国FDA批准上市的单抗药物一共有34种，进入临床试验阶段的单抗则接近350种，治疗范围涵盖肿瘤、自体免疫疾病、抗感染、止血、呼吸道疾病等，其中又以肿瘤和自体免疫疾病药物市场最大，种类最多，我们估算2010年这两类产品的销售额分别占到单抗销售总量的30-40%，市场规模均达到或超过200亿美元。目前，单抗药物已经成为了生物药中不可忽视一大类，而由于目前批准上市的单抗仅有34种，这就使得单抗药物成为了重磅炸弹集中营，占据十大生物药中的六席。20种年销售额超过10亿美元的重磅炸弹级生物药中，单克隆抗体占8种。其中Avastin、Herceptin、Rituxan、Humira和Remicade五大单抗销售额占到了单抗总销量接近80%，Datamonitor预计五大单抗在2013年的年销售量都将维持50亿美元以上，仍将占据单抗市场的60%。而除此之外，人源化抗体类融合蛋白Enbrel2012年销售金额接近80亿美元，Synagis，Xolair等八种单抗（被称为‘emergingeight’）[7]。2.2生产技术现状与进展目前大规模生产单抗的方法有体内接种法、体外细胞培养的发酵罐法、微囊法、中空纤维培养法以及DNA重组法等。近年来，随着分子生物学的发展，出现了嵌合单克隆抗体和由转基因小鼠、噬菌体展示技术、核糖体展示技术所制备的单克隆抗体。这些技术的出现进一步的扩大了单克隆抗体的范围，推广了单克隆抗体的应用[9]。2.3建厂规模规划生产规模为：单克隆抗体冻针剂：达产年产量达5000升，生产厂房严格按GMP规范要求设计，总厂区占地面积122,000平方米，生产用房面积50,000平方米，仓储面积5000平方米，绿化面积60,000平方米。整体建筑分为普通粉针车间、头孢类粉针车间、冻干粉针车间、小容量注射剂、口服固体制剂等多种剂型的生产净化车间及仓库，总投资约1亿元，工厂设计年生产能力在产规模为5亿元人民币。利用混凝土框架二层建筑，屋面钢结构彩板车间建筑面积约为1500m2进行单克隆抗体中试车间建设。本项目是在此基础上按照新版GMP规范标准进行净化装修和生产线安装。生产车间布置于第二层北侧，设置单克隆抗体针剂生产线一条：达产年产量5000升。2.4劳动定员和工作制度单克隆抗体中试车间新增员工总数为25人，食宿均依托厂区现有基础设施。工作制度为年生产300天，二班次/天。3厂址选择与建厂条件3.1厂址选择厂址的选择具有非一般性，需综合考虑很多方面的因素。

一般有洁净厂房，厂址宜选在大气含尘、含菌浓度低，无有害气体，周围环境较洁净或绿化较好的地区。药厂选择在农村市郊含尘浓度低的地方，对空气的净化处理是有益处的。但并不是要意味强求，还要考虑其他诸如交通，能源，市场等因素的影响。

有洁净厂房的厂址应远离码头、铁路、机场、交通要道以及发散大量粉尘和有害气体的工厂，

储仓，堆场等严重空气污染，水质污染，震动或噪声干扰的区域。不不能远离时，应位于其最大频率风向的上风侧，或全年最小频率风向的下风侧。厂址选择总原则：尽可能利用当地有力的条件，不免或克服不利的条件。尽可能利用当地的人力、物力、财力、自然资源，和保护环境。尽可能是企业接近原料、能源产地和产品消费地。经济效益好，能加快国名经济的发展和人民生活水平的提高。本设计厂址选择在攀枝花市东区金沙江旁边。3.2建厂条件3.2.1自然条件攀枝花属南方亚热带为基带的立体气候类型，旱、雨季分明，昼夜温差大，气侯干燥，降雨量集中（全年815毫米），日照长（全年2443小时），太阳辐射强，蒸发量大，小气候复杂多样。年平均气温20.3℃，是四川年热量值最高的地区，日照时数是四川盆地的2~3倍，最热月为5月，最冷月为12月或1月，6~10月为雨季，11月至翌年5月为旱季，无霜期达300天以上；海拔低于1500米的河谷地带，全年无冬，无霜期长（全年达300天以上），被誉为天然的“大温室”；最冷月1月平均气温高于13℃，接近热带气温与热量水平；夏季气温不高，最热月平均气温约26℃左右，夏季最高温度可达40摄氏度。总体而言，攀枝花气候具有春季干热、夏季湿热，秋季凉爽、冬季温暖、四季不分明的特点。​​3.2.2交通、经济条件攀枝花市，四川省省辖市，是全国唯一以花名命名的地级市，位于中国西南川、滇交界部，北距成都749km，南至昆明351km，西连丽江，东接昭通。是四川通往华南、东南亚沿边、沿海口岸的最近点，为"南方丝绸之路"上重要的交通枢纽和商贸物资集散地。攀枝花面积7440平方公里，人口123万，2012年，攀枝花地区生产总值(GDP)实现740.03亿元，全市城镇居民人均可支配收入仅次于成都居全省第二。攀枝花市辖三区两县。也是中国西部最大的移民城市，攀枝花是四川省除成都外唯一的劳动力输入城市，流动人口高达30万。城市人口占全市总人口的60.1%，是成渝地区城市化率仅次于成都的城市。攀枝花市是四川一座得天独厚的自然资源宝库，有着丰富的矿产、水力和农业资源，综合竞争力高于绵阳、德阳等城市，半山地区有发展畜牧业的优良草场;高山地区森林资源丰富，林木可采伐量达一千七百万立方米。同时也是川西南，滇西北的区域中心城市和交通枢纽。2014年，攀枝花市人均地区生产总值(GDP)首次突破7万元，达70646元，位居全省第一位。4原材料与主要设备4.1基本原料单克隆抗体中试车间原辅料使用情况名称年用量(kg)原辅料物化性质储存方式动物细胞50CHO动物细胞外购磷酸钠盐（药用级）330NaH2PO4袋装100g/袋氯化钠盐（药用级）3780白色晶体状，其来源主要是在海水中，是食盐的主要成分。用途最多的是工业和餐饮；易溶于水、甘油，微溶于乙醇、液氨；不溶于浓盐酸袋装1000g/袋醋酸钠盐（药用级）80无色透明晶体。密度1.45克/厘米3。熔点58℃。123℃时失去结晶水。无水物的密度1.528克/厘米3，熔点324℃（在324度时分解）。溶于水（76g/100ml(0°C)加热后溶解度暴涨），呈弱碱性。稍溶于乙醇。也称“热冰”。袋装100g/袋碳酸钠盐（药用级）130化学式Na2CO3分子量105.99；白色粉末或细粒结晶(无水纯品)相对密度(水=1)2.532；熔点851℃...袋装100g/袋柠檬酸钠盐（药用级）220C6H5Na3O7无色结晶或白色结晶性粉末，无臭，味咸、微酸。易溶于水，不溶于乙醇袋装100g/袋氢氧化钠（药用级）720氢氧化钠，化学式为NaOH，俗称烧碱、火碱、苛性钠，为一种具有高腐蚀性的强碱，一般为片状或颗粒形态，易溶于水并形成碱性溶液，另有潮解性，易吸取空气中的水蒸气袋装1000g/袋氨基酸（药用级）180桶装20kg/桶葡萄糖（药用级）180桶装20kg/桶4.2主要设备各个生产车间的主要生产设备选择详见下表“生产设备一览表”。单克隆抗体中试车间设备一览表序号设备名称生产厂家型号或规格单位数量单价

（万元）金额

（万元）负荷

（KW）一、单克隆抗体冻干粉针剂制备1配液系统套465260242500升生物反应器组套210202040123分离纯化系统套6115690604深层过滤系统套255110125超滤系统套450200506纳米过滤系统套25010020二、无菌配液系统（CIP、SIP）套158586三、冻干灌装生产线12000瓶/小时套12802801全自动洗瓶机台162隧道式灭菌干燥机台1703缓冲转盘台214高速液体灌装机台145轧盖机台146输瓶轨道及轨道百级层流装置套147灯检机套12四、冻干设备真空冷冻干燥机（CIP、SIP）10m3台123023050五、其他1立式圆瓶贴标机450瓶/分台1141422全自动装盒包装线180套16565163全自动湿法超声波胶塞清洗机4万/每次台13939355洁净小车台22.5526消毒液配制罐台40.351.47列管换热器台28168脉动真空灭菌器0.36m3台18869变频高效水冷式臭氧发生器50Kg/小时台12.82.8610VHP发生器台1464611对开门（百级）电热灭菌烘箱1m3台2193817六、车间设备安装（含工艺管道）项1100100七、公用工程及检验设备1开利冷水机组30HR-225台148481802冷却塔200吨/小时台3离心水泵200吨/小时台20.91.8444空调风柜25000m3/小时台15.85.8225空调风柜15000m3/小时台14.34.3116空调风柜5000m3/小时台13.23.247空调风柜20000m3/小时台14.94.918.58配电屏台4149空压机6m3/min台166305高效液相色谱仪台1808016酶标仪台165657电泳设备台153538质谱仪台110510549水分滴定仪0.001PH,0.1mV,0.1℃台18810紫外分光光度计190-1100nm六档台19911气相色谱仪台1303012傅利叶红外光谱仪台1202013无线热验证系统精度：0.05度台1252514套冒式风量计台13315尘埃粒子计数器1m3台1141416高效过滤器检漏系统台1232317集菌仪台14418滤芯完整性检测仪台11212八、合计4835.7723.5上表生产厂家略。公用工程（1）供水：水源来自市政给水管网提供。（2）供电：电源来自市政供电管网，厂区内设有10KV中压配电网，380V/220V低压配电压。（3）排水：采用雨污分流制原则。粪便污水经三级化粪池消化处理后与其它生活污水一起排入区内污水处理站处理达到《混装制剂类制药工业水污染物排放标准》（GB21908-2008）中表2标准后，废水处理达标后排入秀英沟。5单抗工艺车间设备设计5.1生产工艺流程及指标单抗药物的生产一般有以下几个特点：（1）生产周期长：以750L的细胞培养罐为例，从种子的复苏、经过几级的种子扩增，再到达生产罐培养，整个发酵过程历时43～47d。（2）多产品：随着单克隆抗体药物研发水平的发展，单抗的表达量获得了很大的提高。因单抗生产投资巨大，随着表达量的增加，多产品共线将成为必然的选择。但因生产周期太长，对于一条多产品的抗体生产线来说，没有良好的设计，换品种时，为防止不同品种的交叉污染将会浪费大量的生产能力[11]。（3）须有完整的病毒防范措施：因采用了哺乳动物细胞作为表达载体，如何防止种子或者原材料中带入的病毒影响到成品的质量，危害病人，显得尤为重要。（4）生产过程的温度控制严格：单抗的本质为糖基化蛋白质，部分单抗在室温下不稳定，生产过程中（包括下游和制剂）对温度需要有较高的控制。（5）单抗药物的制剂形式一般为冻干粉针、水针和预充式水针。如何提高生产线的使用效率，减少洁净区的面积，节约建设资金，且符合GMP，保证产品质量，就需要依赖良好的设计。本文通过分析单抗的生产工艺和车间特点以及国内外GMP，得出设计草案[12]。5.1.1生产工艺流程单抗的生产工艺流程：种子复苏→扩增→多级种子罐→生产罐→离心过滤→纯化1（proteinA捕获）→低pH孵育→纯化2→纯化3→除病毒过滤→超滤→除菌过滤→原液分装→制剂配料→灌装→冻干→压盖→包装→入库。按照生产工艺流程，整个生产过程可分为3个大的阶段：上游（种子复苏到收获）、下游（纯化到原液灌装）、制剂。5.1.2用细胞培养或发酵来生产原料药或中间体涉及诸如细胞培养，或从活体组织提取和纯化物料等生物过程，还有一些附加的隶属于生产工艺一部分的物理化学修饰，使用的原材料（培养基、缓冲成分）可能为微生物污染提供了可能性。根据物料来源、制备方法和原料药或中间体的预期用途，有必要在制造和工艺监测的适当阶段控制微生物、病毒污染和/或内毒素。应当采取合适的预防措施来防止病毒去除/灭活前的步骤对病毒去除/灭活后的步骤的潜在病毒污染。因此，开口工艺应当在与其他操作活动分开的、有独立的空气处理装置的区域内进行。依据ICH的要求，在生产线的设计中针对封闭系统和开口系统，在人物流的组织和空调系统分区上均存在巨大差异。5.1.3对于较大规模的单抗生产车间来说，物料在车间内的流动主要是液体形式。培养基的配制、添加，缓冲液的配制储存和使用，以及物料自上道工序流转到下道工序，均通过大量的卫生级管道进行。如何合理组织这些复杂的物料系统，使之在空间上排布合理，便于物料的输送和清洗，是方案设计阶段需要重点解决的问题之一。5.1.4由于哺乳动物细胞培养的生产周期长达一个半月之久，在此过程中任何保障系统的故障均会导致生产的失败。因此，在单抗生产车间的设计中，公用工程的保障系统设计尤为重要。在目前的设计中，均采用备用机组和备用系统，保证系统的稳定性和可靠性。5.2单抗的生产车间车及思路单抗药物生产车间包括原料车间和制剂车间，本文参考的法规依据为GMP（1998版）、《医药工业洁净厂房设计规范》（GB50457—2008）以及ICH的Q7A，Q5A等。GMP要求车间平面布局遵循以下特点：平面布局合理、严格划分区域、防止交叉污染、方便生产操作[14]。5.2.1生产区域划分单抗药物生产车间包括原料车间和制剂车间，本文参考的法规依据为GMP（1998版）、《医药工业洁净厂房设计规范》（GB50457—2008）以及ICH的Q7A，Q5A等。GMP要求车间平面布局遵循以下特点：平面布局合理、严格划分区域、防止交叉污染、方便生产操作。5.2.2人物流设计为了合理利用空间，将按照人流和物流单向流的理念进行整体空间布局。分别设计清洁物料、不洁物料的进入口；人员的进入通道和出车间通道分开，以避免人员退出时对清洁区域造成污染；设立独立的污物出口。在单向流的设计中，利用门禁系统辅助控制人员和物料的流动方向，当工作人员由万级清洁走道进入到工作区，如种子、发酵或者纯化区后，门禁系统将不允许从这些区域返回到万级清洁走道，工作人员只能通过人出缓冲进入到十万级的污物走廊，再由专设的人出通道走出车间。如空间允许，最好能在相反的方向或位置设置人流、物流入口，如生产车间的东面安排人流入口，则可以考虑在生产车间的西面安排物流入口；当从同方向设置人流、物流入口时，二者之间应保持相对较远的距离，不得相互影响或者妨碍。人流设计图见附图3物流设计图见附图55.2.3开口系统和密闭系统ISPE认为密闭系统须进行SIP或在使用前被封闭后进行SIP，并可以通过真空或者加压等手段对系统进行检漏；在系统的完整性被破坏前，能够按照预期的目标进行无菌液体的转入或者转出，并能保持其无菌性，且能够和其他的封闭系统连接形成一个完善的封闭系统。不是封闭系统的统称为开口系统。由于开口系统可能存在不同批次间活生物体的相互污染，同时也存在未除病毒中间体污染已除病毒中间体的风险，要求使用开口生产系统工序之间在空间上完全隔离，即需要用不同的操作间处理不同的工序，且空调系统相对独立。封闭系统由于本身系统的封闭性已经排除了不同序间以及除病毒前和除病毒后的相互污染的可能性，而允许在同一操作空间内进行。封闭系统在同一空间内，也可以进行两个不同品种产品的生产[13]。在大大减少工程费用和运行费用的同时，大大缩短了更换产品的间隔期。因此，在工艺设计时，尽可能选用封闭系统。开口系统一般应用于小规模（350L以下）的中试或者研究性车间。因开放系统的车间设计较为复杂，本文重点讨论开放系统情况下的车间设计。5.2.4车间的竖向设计将培养基和缓冲液的配制和储存放置在三层，发酵和纯化等主要生产区放置在二层，制剂区可设置在一层或者二层，CIP工作站、生物废水杀灭系统以及清洁公用工程（纯化水、注射用水、纯蒸汽、工艺氧气、CO2和工艺压缩空气等）安置在一层。这样布置有利于利用重力传输物料，并可将物料与生产工位的距离缩至最短。同时，还有利于合理安排生产设备和管线的CIP。竖向布置示意图见附图15.2.5空调进化系统设计空调系统将依据生产区的分区原则和防止交叉污染的原则进行分区。培养基配置和缓冲液配置定义为一个区，人进和清洁走道、种子、发酵、收获、纯化以及污物走道和清洗间分别设立独立的空调系统。因考虑到纯化采用开放系统，因此不同的纯化工段，包括超滤和除病毒过滤均设置在一个空调分区内[14].空调分布示意图见附图45.2.6生产过程温度控制单抗因其产品对温度的敏感性，对生产环境的温度有较高的要求。为了防止生产过程产生过多的二聚体或者多聚体，原液的加工温度控制在4～12℃。要求储存和处理设备均有严格的温度控制，如储存罐、超滤等。单抗药物的长期储存条件为2～8℃，无论是冻干粉针还是水针。在制剂的生产过程中，为了充分保护产品，在采灌装线时，需要选购带温度控制的cRABS，RABS的温度控制在14～16℃，确保药品在灌装过程中其温度不会超过12℃。在开口生产系统中，因规模较小，部分中间产品和缓冲体系需要存放在2～8℃的冷库中，因此车间内须设立冷库（2～8℃）[10]。5.2.7综述综上所述，风压平衡既可利用人工调节风门的开度大小改变排风系统阻力特性曲线实现，又可利用自动控制的方式改变风机运行频率，从而改变风机的运行特性曲线。在欠载情况下让瓶子在热风循环灭菌干燥机加热段停留一段时间或者减缓瓶子通加热段的速度也可采用手动操作和自动操作两种方式。现实中有相当数量的热风循环灭菌干燥机都是采用手动方式操作，建议用户在操作规程SOP中对上述影响热风循环灭菌干燥机灭菌效果的操作过程作出相应的规定。手动操作有下列不足之处：首先人工调整，操作不太方便；其次由于操作不及时，可能出现失控；再者由于人的精神、身体状态等因素难以一致，往往达不到效果。另外，在风压平衡关小阀门时，不仅增大了管路系统流动阻力，而且使风机的效率下降，经济上不太合理。相比手动操作，自动控制将是新产品设计的发展方向，它可以动态、实时地对生产过程进行控制，具有PAT过程控制的优点。5.3物料平衡物料平衡如下图：入方出方物料名称年用量(kg)物料名称数量动物细胞50成品单克隆抗体冻干粉针剂300kg磷酸钠盐（药用级）330废水细胞收集澄清液560kg氯化钠盐（药用级）3780细胞培养液520kg醋酸钠盐（药用级）80细胞培养缓冲液1620kg碳酸钠盐（药用级）130固废灭活后的细胞残碎片20kg柠檬酸钠盐（药用级）220废培养基2700kg氢氧化钠（药用级）720废气细胞呼吸废气--氨基酸（药用级）180葡萄糖（药用级）180动物细胞50合计5720合计5720kg6环境问题与污染情况6.1污染物类别项目主要污染物产生及预计排放情况如下表：内容类型排放源（编号）污染物名称处理前（单位）处理后（单位）产生浓度产生量排放浓度排放量大气污染物1、运营期锅炉废气烟尘17.91mg/m33.8×10-2kg/h；17.91mg/m33.8×10-2kg/h；NO2140mg/m30.3kg/h164.68mg/m30.3kg/h水污染物2、运营期生活污水CODSSCOD进口浓度为167mg/l，产生量为114.2kg/a，SS产生浓度为17mg/l，产生量为11.6kg/a满足GB21908-2008《混装制剂类制药工业水污染物排放标准》中表2新建企业水污染物排放限值。3、运营期生产废水CODSS固体废物4、运营期生活垃圾生活垃圾12.5kg/a；3.75t/a由环卫部门统一收集处理。5、运营期生产垃圾包装废弃物废药品等废活性碳灭活后细胞1t/a0.86t/a175kg/a20kg/a包装废弃物回收利用。危险废物委托具有危废处理资质的单位运走处理（海南宝来工贸有限公司）。噪声6、运营期设备噪声：洗瓶机、灌装机、轧盖机、包装机、锅炉等设备运行时产生的设备噪声。声压级在60-85分贝之间。6.1.1大气环境污染大气污染物主要是锅炉废气及无组织颗粒物。项目的热源来自一台6t/h的燃气锅炉，锅炉型号为FH6000，2台2t/h燃气锅炉，型号分别为FH-2000、WNS2-1.25-YQ，燃料均为天然气。项目主要大气污染源为锅炉废气主要污染物为烟尘、NOx。根据建设项目环境保护验收监测报告结果（详见附件）显示：锅炉废气的烟尘平均排放浓度为17.91mg/m3，平均排放速率为3.8×10-2kg/h。全部达标；氮氧化物平均排放浓度为140mg/m3，平均排放速率为0.3kg/h。全部达标；二氧化硫为末检出，全部达标；烟气黒度均为1.0级，全部达标。项目锅炉每天平均使用8小时计，年工作日300天，根据业主资料项目现有锅炉供汽能力富余，足以满足本次扩建车间需求。锅炉的烟气产生量为6438Nm3/d，烟尘产生量为7.6×10-2kg/h，NOx产生量为0.6kg/h。6.1.2水环境水环境：（1）制剂车间洗涤废水和食堂排出的有机废水，排入污水处理站处理。（2）粪便污水采用三级化粪池厌氧消化再经污水处理站处理。（3）制水站纯水制备中采用的是二级反渗透工艺制备，生产工艺如下：原水 活性炭过滤一级反渗透 二级反渗透 精制储水槽纯水输送泵用水点 （4）海口市制药厂污水处理站处理情况污水处理站的设计参数为：pH值为6.5-8.5、CODcr为450mg/l，污水处理量为160m3/d（按两班计，每班8小时）。污水处理达标后，废水排入秀英沟。其工艺流程如下：活性污泥氧化池中和池格栅井废水活性污泥氧化池中和池格栅井废水空气上清液空气上清液污泥消化池鼓风机污泥消化池鼓风机污泥污泥排放斜管沉淀池排放斜管沉淀池污水处理站工艺流程图根据攀枝花金沙江附近的用水现状调查，项目现状年用水量为21180m3/a，按生产天数为300天计，用水量约70.6m3/d。项目废水排放按用水量85%计，则污水排放量为60m3/d（18000m3/a），项目现有一座处理能力为160m3/d的污水处理站。根据废水监测报告监测结果，污水处理站的水污染物进水浓度为pH：7.99，SS：17mg/L，COD:167mg/L，氨氮：0.372。污水均能满足GB21908-2008《混装制剂类制药工业水污染物排放标准》表2新建企业水污染物排放限值。6.1.3固体废物污染源固体废物污染源：生产固废：生产固废主要为损耗废弃的玻璃，塑料、铝箔、铝桶、纸箱等内外包装材料的废弃物等，年废弃量约90t，废品统一收集集中后送往废品收购站回收利用。生活垃圾：生活垃圾进行分类收集，对废旧塑料、金属、玻璃等可回收利用的送往废品收购站回收利用。不可回收利用的生活垃圾及时运往垃圾处理场处理。固体废物均得到妥善处理。（3）活性碳：车间精制工序使用的活性碳作为吸附过滤介质。年用量约178kg。失效后的废活性碳，还有抗生素污粉、抗生素污瓶、污胶塞，危废类别编号为HW02；废药品危废类别编号为HW03；废机油危废类别编号为HW08；实验废液、活性淤泥危废类别编号为HW49。6.1.4声环境污染噪声主要发生在制粒、混合、整粒、总混充填、装囊等工序中。噪声大的设备为空压机、振动机、轧盖机、粉碎机、混合机、整粒机、充填机、压片机等。6.2防治措施单克隆抗体废物处理及防范措施：工艺步骤相关废料及排放物危害评估处理及应变措施细胞种子制备，初级种子扩增,生物反应器培养基高BOD,含细胞,非生物危害,pH中性废料经灭活后交由有资质单位处理细胞收集液澄清塑料废物含细胞,非生物危害收集液浓缩培养基,废水中BOD,非生物危害pH中性至微碱废水经灭活、过滤纯化后排入项目自建污水处理站处理达标排放层析纯化(1)废水低BOD,非生物危害pH中性层析纯化(2)废水低BOD,非生物危害pH中性层析纯化(3)废水低BOD,非生物危害pH中性除病毒过滤塑料废物非生物危害废料经灭活后交由有资质单位处理恆濾制剂废水,塑料废物极低BOD,非生物危害pH中性无菌灌封包裝塑料废物非生物危害固体废物处理、处置建议:1、不断改进技术、完善工艺，贯彻清洁生产原则，从源头削减不合格产品（液）产生量。2、危险固废在厂内暂存期间，设置独立危险废物暂存间，并设置醒目标识。严格按照《危险废物贮存污染控制标准》(GB18597-2001)实施，采取防渗透、防泄漏、防流失措施，并落实管理责任，建立固体废物产生、外运、处置及最终去向的详细台账，按危险废物转移交换处置管理办法实施跟踪管理，避免二次污染。6.3清洁生产原辅材料：由之前对单克隆抗体中试车间的生产工艺分析可知，生产所用的原辅材料的提炼、加工不在本厂、本车间。本项目所有原辅材料都是从市场购进，本项目车间内的整个生产过程基本属于原料与溶剂按一定比例相溶的物理过程。项目已和相关企业就原辅料购买达成协议。原辅料来源有保证。可保证正常生产需求。工艺路线：项目采用国内成熟工艺生产，其合成技术较为先进，流程短，产品收率有较大提高，原材料利用率高，污染较小。无高毒物质、恶臭物质使用和有害气体污染物的产生、排放。设备先进性：单克隆抗体中试车间项目设备的选用、安装、检验和管道连接均严格执行我国现行技术标准规范。各类物料输送管线专管专用，一般不需切换和清洗。有效减少物料的跑、冒、滴、漏。7生产组织、劳动定员和人员培训一、企业体制与组织机构攀枝花学院生物化工研究所为国有企业。组织机构为董事会领导下的总经理负责制，下设部门经理，负责生产、扩建、营销等工作。二、生产班制及劳动定员1．生产班制全厂年生产天数为300天，其余为法定节假日及大、中修时间。车间生产部门及辅助生产部门按需要实行一班—三班，每班按8小时工作制，某些生产工段根据具体情况实行四班三转运。2．劳动定