琥珀酸脱氢酶竞争性实验设计方案_第1页
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琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制实验

1.掌握竞争性抑制的概念和特点。2.观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。3.分析实验现象。一：实验目的化学结构与酶作用的底物结构相似的物质，可与底物竞争结合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。琥珀酸脱氢酶其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。二：实验原理丙二酸的化学结构与琥珀酸相似，它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢，这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥珀酸的浓度，则可减轻丙二酸的抑制作用。琥珀酸琥珀酸脱氢酶FADFADH2延胡索酸甲烯蓝（MB）甲烯白（MBH2）+FAD无

氧（一）主要仪器： 大白鼠、手术剪、镊子、磁盘、高速组织捣碎机、研钵、刻度吸量管、烧杯、纱布、滤纸、试管及试管架、恒温水浴箱三：实验试剂和器材（二）主要试剂：0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液、

0.2mol/L丙二酸溶液、0.02mol/L丙二酸溶液、（上述四种试剂调节PH为7.4）石蜡油、1/15mol/LNa2PHO4、0.02％甲烯蓝。四：实验步骤1.酶的提取液的制备：将大白鼠处死，取骨骼肌，切成碎片后，放入研钵中，每组取8g左右，加入1/15mol/L的Na2HPO4溶液5ml研成糊状后，再加入5ml1/15mol/L的Na2HPO4溶液，混匀后，用纱布过滤，用干净的烧杯收集备用。

2.取试管5支，按照下列表格操作：3.各管混匀后，沿试管的内壁加入石蜡油（隔绝空气），放置到37℃水浴中保温，观察各管甲烯蓝的褪色情况，并记录褪色的所需要的时间，解释其现象。五：注意事项1、酶提取液的制备应操作迅速，以防止酶活性降低。2、加入液体石蜡的作用是隔绝空气，以避免空气中的氧气对实验造成影响，因此加石蜡时试管壁要倾斜，注意不要产生气泡。3、37℃水浴保温过程中，不能摇动试管，避免空气中的氧气接触反应溶液，使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。4.、37

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