药物半数致死量(有效量)测定-图文

药物半数致死量(有效量)测定_图文.ppt【实验目的】应用随机、重复、对照的实验设计原则，进行设计及测定药物的质反应的量效关系。掌握测定药物半数有效量（ＥＤ50）和/或半数致死量（ＬＤ50）的方法、原理、实验步骤、计算过程及意义。测出药物的ＥＤ50或ＬＤ50及相关参数，认识生物个体差异及评价急性毒性大小的方法。【实验要求】1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量测定的基本方法。2、熟悉动物实验常用的随机分组和实验方法。3、掌握Bliss法等半数致死量或半数有效量的计算方法。【实验原理】半数致死量（50％Lethaldose，简写为ＬＤ50）是指能够导致50%实验对象死亡的药物剂量。戊巴比妥钠为镇静催眠药，随着剂量加大，相继出现镇静、催眠、抗惊厥、麻醉、死亡。无效量最小有效量常用量最小中毒量中毒量致死量量效关系与相关概念的示意图死亡致死量剂量效应无效量无效最小有效量治疗作用常用量安全范围极量毒性作用最小中毒量中毒量质反应的量效曲线睡眠死亡反应百分率020408060100剂量LD50ED50质反应量效关系曲线思考：何意？何用？1.LD50/ED50的本质2.治疗指数（TI）=LD50/ED50Fig.2-3Thefrequencycurveandcumulativefrequencycurveofadrugactioninaquantal-effectexperiment.质反应量效关系曲线曲线中实验动物数有50％出现阳性结果（反应）所需的剂量，如以死亡为指标称为半数致死量，如以某种效应的有或无则为半数有效量（50％Effectivedose，ＥＤ50）表示。ＬＤ50/ＥＤ50为半数致死量与半数有效量的比值（倍数）称为治疗指数（therapeuticindex，TI）。治疗指数与安全范围一般而言，治疗指数(TI)是表示药物安全性的指标。该数值越大，表明有效剂量与致死剂量(或中毒剂量)间距离愈大，愈安全，但只适用于治疗效应和致死效应的量效曲线相互平行的药物，对于两种量效曲线不平行(斜率不同)的药物，还应参考安全范围（marginofsafety，MS），即ED95与LD5之间的距离或安全指数SI(SI=LD5／ED95)来评价药物的安全性。质反应实验中，以对数剂量为横坐标、反应百分率为纵坐标绘图，形成一条对称的“S”形曲线。

半数有效量（ED50）：50％的实验动物有效时对应的剂量。

半数致死量（LD50）：50％的实验动物死亡时对应的剂量。药物安全性的评价治疗指数（TI）=LD50/ED50安全系数（SF）＝LD5/ED95可靠安全系数（CSF）＝LD1/ED99三者数值大，说明药物安全性好。质反应量效关系曲线与

药物安全性的评价实验的观察指标：ＬＤ50：规定的观察时间内记录动物的死亡数为指标，记录并统计动物的死亡率。ＥＤ50：以翻正反射消失作为判断动物睡眠的指标。把受试小白鼠轻轻地置于仰卧位，如果在半分钟内不能翻正，即认为小白鼠处于睡眠状态。记录并统计动物睡眠发生率。【实验试剂与器材】小鼠罩重量称注射器（1.0ml）及针头戊巴比妥钠苦味酸（标记动物号用）【实验方法与步骤】预试：目的是找到0％（Ｄmin）和100％（Ｄmax）死亡的大致剂量范围。给药量：0.2ml/10g体重。正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图和计算数据。本实验备有：50,40,32,25.6,20.5,16.4五个剂量组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。每个同学做4～5个连续的浓度，每浓度一只小鼠。实施：规范操作，观察计时；分工合作，统一计算分组及给药取小鼠50只（18～22克），雌雄各半，不同性别动物按体重随机分成五组。每组各动物称重，标记后分别按设计的容积和浓度腹腔注射给药。ＬＤ50（或ＥＤ50）测定时是否要设对照组，应视药物性质等情况而定。必须注意：正式实验如单人操作时宜从浓度偏高的剂量组开始给药！起效快和对后续实验有重要提示作用。思考！观察与记录记录观察时间内实验动物的症状、死亡（或有效）时间。整个实验应记录的事项：日期、药物名称、批号及制药单位、配药的溶剂、药液浓度、给药途径、给药容积及给药剂量、动物名称、性别及体重、实验时室温、给药时间、中毒症状及出现的时间、死亡表现及时间、各组死亡率、计算所得的ＬＤ50（或ＥＤ50）。预实验结果40mg/kg组：(0.2ml/10g)腹腔注射给药5～15分钟内，出现翻正反射消失(睡眠)；剂量实验鼠数睡眠鼠数反应百分率ED50（mg/kg）（％）（mg/kg）50104010321025.61021.810不同剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠的影响实验分组、记录和统计如增加记录起效和维持时间，翻正反射消失的深度可获得对量效关系和个体差异的更深刻认识。Bliss法计算软件界面Bliss法运算图形结果输出Bliss法运算数据结果输出【注意事项】1.本实验为定量药物效价测定，要求较高的精确性，在实验过程中要求实验者做到尽可能的精确程度。2.为了减少误差，需严格控制除药物剂量外的所有非处理因素，如最好由一人给药。3.动物种类、体重范围、给药途径、实验观察时间等因素对ＬＤ50及ＥＤ50的测定结果都有影响，在报告结果时都应加以注明。

国际对动物实验的3Rs原则：

即取代(Replacement)、精致(Refinement)和简约(Reduction)，要求生命科学研究应采取其他手段代替动物实验、改进实验方法、减少动物数量和痛苦，以符合道德方面的考量。

实验设计三大原则：随机、重复、对照均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年龄、体重等）均衡分档。然后在每一档随机取出等量的动物分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲劳程度等）得到随机安排。【注意事项】作业：实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上述例子LD50有关数据求出：治疗指数TI＝LD50/ED50＝安全指