食品微生物学试题+答案及食品微生物学检验GB 系列知识点汇总

食品微生物学试卷一、一.填空题（1分/空×20）：1.细菌一般进行___⑴__繁殖，即__⑵_。酵母的繁殖方式分为有性和无性两类，无性繁殖又可分为__⑶__，__⑷__两种形式，有性繁殖时形成__⑸_；霉菌在有性繁殖中产生的有性孢子种类主要有__⑹__，_⑺__；在无性繁殖中产生的无性孢子种类有_⑻_，__⑼__，__⑽__；放线菌以__⑾__方式繁殖，主要形成__⑿__，也可以通过___⒀__繁殖。2.微生物污染食品后，对人体造成的危害主要是引起___⒁_______和_____⒂_____。3.在酵母菌细胞结构中，____⒃_____具有保护细胞及维持细胞外形的功能；____⒄____具有控制细胞对营养物及代谢产物的吸收和交换作用；____⒅_____是细胞进行生命活动，新陈代谢的场所；___⒆______是呼吸酶类的载体，细胞的能量供应站；_____⒇____具有传递细胞遗传性状的作用。二.选择题（1分/小题×20）1.革兰氏染色的关键步骤是___a.结晶紫（初染）b.碘液（媒染）c.酒精（脱色）d.蕃红（复染）2.属于细菌细胞基本结构的为___a.荚膜b.细胞壁c.芽孢d.鞭毛3.测定食品中的细菌总数常采用_____a.稀释混匀平板法b.稀释涂布平板法c.显微镜直接镜检计数法4.干热灭菌法要求的温度和时间为___a.105℃，2小时b.121℃，30分钟c.160℃，2小时d.160℃，4小时5.微生物运输营养物质的主要方式___a.单纯扩散b.促进扩散c.主动运输d.基团转位6.Saccharomycescerevisiae有性繁殖产生____a.接合孢子b.担孢子c.孢囊孢子d.子囊孢子7.以高糖培养酵母菌,其培养基类型为____

a.加富培养基b.选择培养基c.鉴别培养基d.普通培养基8.抗干燥能力较强的微生物是_________。a.酵母菌b.霉菌菌丝c.乳酸菌9.产生假根是____的形态特征。

a.根霉b.毛霉c.青霉d.曲霉

10.配制1000ml的固体培养基需加琼脂____a.0.b.2~7克c.15~20克d.50克11.食品和饮料工业生产上常采用的“巴氏灭菌法”是一种______方法。a.消毒b.抑菌c.灭菌d.除菌12.下列微生物器官耐温顺序为_____

a.营养体＞孢子＞芽孢b.芽孢＞孢子＞营养体c.孢子＞营养体＞芽孢c.芽孢＞营养体＞孢子

13.下列微生物能通过细菌滤器的是____a.细菌b.酵母菌c.病毒d霉菌14.下列不属于生长素类物质的是____a.氨基酸b.矿质元素c.嘌呤碱基d.维生素15.E.coli是______a.G＋菌b.G－菌c.G＋G－不定16.在固体平板上,青霉菌菌落周围葡萄球菌不能生长,此种关系为____a.竞争关系b.猎食关系c.拮抗关系d.寄生关系17.下列因素影响微生物生长_______a.pHb.温度c.水分d.这些都是18.细菌的生长曲线中，总菌数和活菌数几乎相等的是_____a.延缓期b.对数期c.稳定期d.衰亡期19.罐藏食品的灭菌属于________a.消毒b.灭菌c.抑菌d.商业灭菌20.决定病毒感染专一性的物质基础是____

a.核酸b.蛋白质c.脂类d.糖类三.判断题（1分/小题×10）1.真菌适宜在偏酸性的环境条件下生长。2.肉毒梭状芽孢杆菌属于厌氧性微生物。3.酒精消毒的最佳浓度为95%。4链霉菌是霉菌，其有性繁殖形成接合孢子。5.污染了赤霉菌毒素的食品原料，经处理后仍可用于加工食品。6.子囊孢子是半知菌纲霉菌的有性孢子。7.细菌产生芽孢是细菌的一种繁殖方式。8.放线菌和霉菌都具有营养菌丝和气生菌丝。9.肠球菌对冷冻的抵抗力比大肠菌群细菌大。10.自养菌可引起食品腐败。四.分析问答题：4.1.从变质罐头中检出酵母菌和霉菌时，试分析引起罐藏食品变质的原因。（10分）4.2.在微生物培养过程中引起PH值改变的原因有哪些？在实践中如何保证微生物能处于较稳定和合适的PH环境中？（10分）

4.3．根据你掌握的实验方法，在由枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、产气肠杆菌组成的混合菌悬浮液中，将上述菌进行分离、鉴别。（20分）

4.4.气调保藏食品的原理（10分）试卷二、一.填空题（1分/空×20）：1.一般来说，氧化还原电位(Eh)值在0.1V以上，适宜___⑴____性微生物的生长，+0.1V以下，适合___⑵___性微生物的生长。2.侵染寄主细胞后暂不引起细胞裂解的噬菌体称____⑶___。3.微生物细胞的主要组成元素是____⑷_____。4.在营养物质的四种运输方式中，只有__⑸___运输方式改变了被运输物质的化学组成。5.干燥对微生物的作用，主要是____⑹____。6.嗜冷、嗜温、嗜热这三类微生物都有可能生长的温度范围是_⑺__。7.以有机物作为碳源和能源的微生物营养类型是____⑻___。8.根据细菌性食物中毒的病理机制，可将细菌性食物中毒分为___⑼__和____⑽_______。9.化学物质对微生物的作用主要取决于__⑾____；也与_____⑿____和___⒀___等作用条件有关。10.丝状真菌的无隔菌丝是由__⒁__细胞组成，有隔菌丝是由__⒂__细胞组成。11.测定细菌、放线菌的大小，一般以___⒃__为单位，而测定病毒的大小则以__⒄__为单位。12.产生芽孢的杆菌主要有___⒅__属和____⒆__属。13.液体培养基中加入CaCO３的目的通常是为了__⒇__。二.选择题（1分/小题×20）1.实验室常用于培养细菌的温度为___a.4℃b.28℃c.37℃d.50℃2.病毒缺乏___a.增殖能力b.蛋白质c.核酸d.独立代谢的酶体系3.大肠菌群检测需进行证实实验，若发现乳糖管产气，革兰氏染色阴性的无芽孢杆菌即表明___a．大肠菌群阳性b．大肠菌群阴性c．大肠菌群可疑4.鲜奶室温贮存期间，由于微生物的活动将使奶中的PH值变化：___

a．先下降后上升b.先上升后下降c．先上升后下降再上升d.不上升也不下降

5.在下面哪种条件下，肉毒梭菌可能产生毒素___

a．PH4.5-6,好氧，37℃b．PH7.5-7.8，厌氧，30℃c．PH4.5-7，厌氧，37℃d.．PH3.5，好氧，30℃6.酵母菌常用于酿酒工业中,其主要产物为___

a．乳酸b．乙醇c．丁酸d.．乙酸7.自然界微生物主要分布在___中a．土壤b．水域c．空气d.生物体8.具有匍匐菌丝和假根的菌属是_____

a．Rhizopusb．Mucorc．Penicilliumd.Aspergillus9.两种微生物之间形成共生关系具有下列特性的是：___a．形成一个特殊的共生体。b．在生理代谢上各不相干。c．其中一种微生物可以逐步杀害另一种微生物。d.其他微生物可以任意代替其中的一种微生物。10.微酸环境下适宜生长的微生物是___

a．细菌b．酵母菌c．放线菌d.病毒11.用30～80%糖加工果品能长期保存,是因微生物处于___环境中,引起质壁分离而死亡。a．高渗压b．低渗压c．等渗压d.中渗压12.使用高压锅灭菌时，打开排汽阀的目的是___

a．防止高压锅内压力过高，使培养基成分受到破坏b．排尽锅内有害气体c．防止锅内压力过高，造成灭菌锅爆炸d.排尽锅内冷空气13.细菌在哪一类食品上最容易生长_____

a．苹果b．脱水蔬菜c．谷物d.鲜鱼和鲜肉14.微生物细胞内部的pH值____。a.与外部环境的pH值相同b.近酸性c.近碱性d.近中性15.微生物生长所需要的生长因子(生长因素)是：a.微量元素b.氨基酸和碱基c.维生素d.B,C二者16.单纯扩散和促进扩散的主要区别是:____a.物质运输的浓度梯度不同b.前者不需能量,后者需要能量c.前者不需要载体,后者需要载体17.占微生物细胞总重量70%-90%以上的细胞组分是:a.碳素物质b.氮素物质c.水18.反硝化作用的最终产物____a.NH3b.HNO3c.N2d.HNO219.琼脂在培养基中的作用是____a.碳源b.氮源c.凝固剂d.生长调节剂20.下图是噬菌体侵染细菌的示意图，噬菌体侵染细菌的正确顺序应是：a.BDAECb.ABCDEc.BDEACd.DBAEC三.判断题（1分/小题×10）1.ＥＭＢ培养基中，伊红美蓝的作用是促进大肠杆菌的生长．2.大肠杆菌经革兰氏染色后在显微镜下可见为红色短杆菌。3.酵母菌和细菌都是单细胞生物，因此在细胞结构与组分上都是相同的。4噬菌体可分为温和噬菌体和烈性噬菌体两种。5.组成微生物细胞的化学元素来自微生物生长所需要的营养物质。6.培养微生物时都必须人工加入碳源和氮源。7.培养基中加入一定量NaCl的作用是降低渗透压。8.所有的黄曲霉都产生黄曲霉毒素引起癌症。9.根霉菌的无性繁殖产生分生孢子,有性生殖产生接合孢子10.鞭毛是细菌的“运动器官”，是细菌生命活动所必需的。四.分析问答题：4.1.营养丰富的食品容易由于微生物的污染而腐烂变质，试根据微生物学知识分析哪些方法可被用于延长食品的保存期？（10分）4.2.从微生物学角度分析低酸性的食品和酸性食品如要长期保存，应分别采取什么温度杀菌？为什么？（10分）4.3..Staphylococcusaureus和Escherichiacoli的细胞壁在化学组成和结构上有何重要区别？它们经革兰氏染色后各呈什么颜色？为什么？（10分）4.4..以下培养基：蛋白胨20g乳糖10g胆盐5g水1000mlPH7.4—7.61.6%溴甲酚紫酒精溶液0.6ml⑴.请说明该培养基所含成分的作用与功能。（20分）⑵.按其营养成分的来源，属何类型培养基？为什么？⑶.按其物理状态，属何类型培养基？为什么？⑷.按其用途，属何类型培养基？为什么？⑸.此培养基在食品卫生检验中的作用是什么？参考答案：1一.填空：⑴无性⑾无性⑵裂殖⑿分生孢子⑶芽殖⒀菌丝片断⑷裂殖⒁食物中毒⑸子囊⒂消化道传染病⑹子囊孢子⒃细胞壁⑺接合孢子⒄细胞膜⑻孢囊孢子⒅细胞质⑼分生孢子⒆线粒体⑽厚垣孢子（节孢子）⒇细胞核二.选择题：⑴c.⑸c.⑼a.⒀c.⒄d.⑵b.⑹d.⑽c.⒁b.⒅b.⑶a.⑺b.⑾a.⒂b.⒆d.⑷c.⑻a.⑿b.⒃c.⒇b.三.判断题：⑴√⑶×⑸×⑺×⑼√⑵√⑷√⑹×⑻√⑽×四.分析问答题：1.从变质罐头中检出酵母菌和霉菌时，试分析引起罐藏食品变质的原因。（10分）∵酵母菌和霉菌的抗热性较差-----4∴从变质罐头中检出酵母菌和霉菌，则引起罐藏食品变质的原因可能是：a.罐头裂漏，被M污染（∵这些M的抗热性较差）。-----2b.罐头杀菌不完全（残留霉菌孢子）------2c.罐内真空度不够（∵霉菌只能在有氧的环境中生长）。---22.在微生物培养过程中引起PH值改变的原因有哪些？在实践中如何保证微生物能处于较稳定和合适的PH环境中？（10分）

原因：①.微生物分解基质中的蛋白质产氨，使PH值↑②.有机酸盐，使PH值↑③碳水化合物产酸，使PH值↓④.无机氮盐（生理酸性盐、生理碱性盐）----6在实践中可通过在培养基中添加KH2PO4、K2HPO4或CaCO3使微生物能处于较稳定和合适的PH环境中。------43．根据你掌握的实验方法，在由枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、产气肠杆菌组成的混合菌悬浮液中，将上述菌进行分离、鉴别。（20分）

用稀释平板分离法进行分离。⑴.在分离平板上，大肠杆菌、产气肠杆菌的菌落特征基本相同难以区分（菌落灰白色，半透明，表面光滑湿润，有光泽。）枯草芽孢杆菌的菌落较干燥用Gram染色法染色镜检，可见：大肠杆菌、产气肠杆菌为G-，短杆菌。枯草芽孢杆菌为G+，长杆菌，有芽孢。根据以上特征可将枯草芽孢杆菌区分开来。⑵.将其它菌①.在EMB平板上划线、培养。在EMB平板上E.coli的菌落较小，呈紫黑色，有时有金属光泽。产气肠杆菌大，灰棕色。②.接入葡萄糖.蛋白胨.水；蛋白胨.水；柠檬酸盐培养基中做生理生化反应E.coliMR+；VP-；I+；C-产气肠杆菌MR-；VP+；I-；C+4.气调保藏食品的原理（10分）∵①.在有氧的环境下，霉菌、酵母菌、细菌都有可能引起食品变质。而在缺氧，只有部分酵母菌和细菌能引起食品变质。②.在有氧的环境中，因M的生长、繁殖而引起的食品变质速度较快。缺氧，由厌氧M生长引起的食品变质速度较缓慢。，兼性厌氧M引起的食品变质速度也比在有氧环境中慢得多。即缺O2的环境中，a.可生长的M种类少；b.M生长的速度慢。∴在进行食品保藏时，可将食品储存在无O2环境（进行真空包装）or含高浓度CO2（40～80%）的环境中，以防止or减缓M引起的食品变质。参考答案：2.一.填空：⑴好气⑾浓度⑵厌气⑿作用温度⑶温和噬菌体⒀作用时间⑷碳素⒁单⑸基团转位⒂多⑹抑制微生物生长⒃um⑺25℃—30℃⒄nm⑻化能异养型⒅芽孢杆菌⑼感染型食物中毒⒆梭状芽孢杆菌⑽毒素型食物中毒⒇中和微生物代谢产生的酸二.选择题：⑴c.⑸c．⑼a．⒀d.⒄c.⑵d.⑹b．⑽b．⒁d.⒅c.⑶a．⑺a．⑾a．⒂d.⒆c.⑷a．⑻a．⑿d.⒃c.⒇a.三.判断题：⑴×⑶×⑸√⑺×⑼×⑵√⑷√⑹×⑻×⑽×四.分析问答题：1.营养丰富的食品容易由于微生物的污染而腐烂变质，试根据微生物学知识分析哪些方法可被用于延长食品的保存期？（10分）可以通过改变食品的理化性质（干燥、调酸、提高渗透压、加入防腐剂等）控制环境条件（低温、缺O2等）来抑制M在食品上生长、繁殖，从而达到保藏食品，延长食品保存期的目的。2.从微生物学角度分析低酸性的食品和酸性食品如要长期保存，应分别采取什么温度杀菌？为什么？（10分）

∵引起低酸性食品变质的M主要是一些嗜热性和抗热性较强的M。如芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌属的细菌∴对低酸性食品须进行121℃高压蒸汽灭菌。引起酸性食品变质的M主要是一些抗热性不强的无芽孢M及少数较耐热的芽孢菌。如酵母菌、霉菌和耐酸细菌（乳酸菌、明串珠菌）这些M的热死温度都在100℃左右

∴用100℃的温度就可将它们全部杀死，因此酸性食品只须进行低温灭菌（沸水90-100℃）。3..Staphylococcusaureus和Escherichiacoli的细胞壁在化学组成和结构上有何重要区别？它们经革兰氏染色后各呈什么颜色？为什么？（10分）Staphylococcusaureus是G＋菌；Escherichiacoli是G－菌区别：化学组成结构磷壁酸脂多糖肽聚糖脂肪不分化的单层结构（肽聚糖层）Staphylococcusaureus＋－50%2%Escherichiacoli－＋5～10%11～22%复杂的多层结构（内层肽聚糖层）（外层脂多糖层）经革兰氏染色后Staphylococcusaureus呈兰紫色Escherichiacoli呈红色∵G-菌的细胞壁薄，脂肪含量高，肽聚糖少，经结晶紫、I2液染色，乙醇脱色处理后，脂肪被乙醇溶解；使细胞壁的通透性增大。∴G菌易脱色复染呈红色。.G+菌的细胞壁较厚，细胞壁中肽聚糖含量高，细胞壁的通透性差。在乙醇的作用下，肽聚糖的网状结构收缩变得更紧密—通透性进一步降低。∴G+菌细胞的结晶紫.I2复合物不易被乙醇脱色去掉而保持初染色，呈兰紫色。4..以下培养基：蛋白胨20g乳糖10g胆盐5g水1000mlPH7.4—7.61.6%溴甲酚紫酒精溶液0.6ml⑴.请说明该培养基所含成分的主要作用。（20分）⑵.按其营养成分的来源，属何类型培养基？为什么？⑶.按其物理状态，属何类型培养基？为什么？⑷.按其用途，属何类型培养基？为什么？⑸.此培养基在食品卫生检验中的作用是什么？①.蛋白胨氮源乳糖碳源胆盐选择性抑制剂溴甲酚紫酸碱指示剂水溶剂；参与代谢反应或提供代谢环境；恒温。PH7.4—7.6适宜细菌生长②.属天然培养基。因为培养基中蛋白胨、胆盐的组分和含量随生产批次的不同而有所不同（不稳定）。③.属液体培养基。因为培养基中无凝固剂（琼脂）存在。④.属选择培养基。因为培养基中的胆盐能选择性的抑制G＋菌的生长。G－菌能在此培养基中生长。属鉴别培养基因为培养基中的溴甲酚紫能指示菌体能否发酵乳糖产酸⑤.此培养基在食品卫生检验中用于进行大肠菌群的检测。微生物学试卷3、一、填空（1分/空×20）：1.微生物细胞的主要组成元素是______⑴_________。2.细菌的基本形态为____⑵___；___⑶_____；___⑷____。3.___⑸_____是人工配制，适合于微生物生长的营养基质。4.液体培养基中加入CaCO３的目的通常是为_______⑹_________.5.霉菌细胞壁的主要成分为___⑺_____。6.糖类物质是异养型微生物重要的___⑻_____和___⑼____.。7.放线菌是一种⑽生物，以⑾繁殖，是生产⑿的主要微生物。8.细菌的呼吸酶存在于___⒀___上，酵母菌的呼吸酶存在于___⒁____中。9培养基应具备微生物生长所需要的五大营养要素是__⒂___、___⒃____、___⒄____、____⒅____和____⒆_______。10.以有机物作为碳源和能源的微生物营养类型为______⒇_______二.选择题（1分/小题×20）：1.酵母菌常用于酿酒工业中，其主要产物为___a.乙酸b.乙醇c.乳酸d.丙醇2.常用于消毒的酒精浓度为___a.30%b.70%c.95%d.100%3.制备培养基最常用的凝固剂为___a.明胶b.硅胶c.琼脂d.纤维素4.原核生物细胞与真核生物细胞之间的相同点是___。a.无核膜b.细胞膜是高度选择性的半透膜c.核糖体是70Sd.都是二分裂繁殖5.酵母菌属于___微生物.a.好氧型b.厌氧型c.兼性厌氧型d.微厌氧型6.微生物分批培养时，在延迟期_____a.微生物的代谢机能非常不活跃b.菌体体积增大c.菌体体积不变d.菌体体积减小7.属于细菌细胞基本结构的为____

a.荚膜b.细胞壁c.芽胞d.鞭毛

8.以芽殖为主要繁殖方式的微生物是___a.细菌b.酵母菌c.霉菌d.病毒9.在放线菌发育过程中，吸收水分和营养的器官为___a.基质菌丝b.气生菌丝c.孢子丝d.孢子10.下列孢子中属于霉菌无性孢子的是____a.子囊孢子b.担孢子c.孢囊孢子d.接合孢子11.下列物质属于生长因子的是_____a.葡萄糖b.蛋白胨c.NaCld.维生素12..沼气发酵的主要产物为___

a.CO2b.CH4c.NH3d.H2S

13.霉菌适宜生长的PH范围是___a.＜4.0b.4.0～6.0c.6.5～8.0d.8.014.接种环常用的灭菌方法是___a.火焰灭菌b.热空气灭菌c.高压蒸汽灭菌d.间歇灭菌15.下列不属于主动运输特点的是___a.逆浓度b.需载体c.不需能量d.选择性强16.在固体平板上，青霉菌菌落周围葡萄球菌不能生长，此种关系为___a.互生b.共生c.寄生d拮抗17．高压蒸汽灭菌，常用的灭菌条件为___a.70~80℃，30分钟b.121℃，30分钟c.160～170℃，2小时d.100℃，30分钟18.遗传学的经典实验“肺炎双球菌的转变”是属于细菌基因重组的___a.转化b.转导c.接合19.下列属于单细胞真菌的是___a.青霉b.酵母菌c.曲霉d细菌20.下列耐热能力最强的是_____a.营养细胞b.菌丝c.孢子d.芽孢三.判断题（1分/小题×10）：1.用BOD可表示水中能被微生物降解的有机物含量。2.分生孢子可由藻状菌纲的霉菌产生。3.霉菌比细菌能在水分活性值较低的环境下生长。4.一个系统中，细菌数越高，在致死因素作用下，所需的杀菌时间越长。5.脂多糖是G--菌细胞壁所特有的组成成分。6.微生物是一群形体微小；结构简单的单细胞生物。7.噬菌体属分子生物。8.放线菌和细菌都属原核生物，而霉菌则属于真核生物。9.培养基中加入一定量NaCl的作用是降低渗透压。10酵母菌细胞壁的主要成份是葡聚糖和甘露聚糖。四.分析问答题：1.以下培养基：NaNO32.gK2HPO41.gKCl0.5gMgSO40.5gFeSO40.01g羧甲基纤维素钠10g琼脂2.0g水1000mlPH自然⑴.按其营养成分的来源，属何类型培养基？为什么？⑵.按其物理状态，属何类型培养基？为什么？⑶.按其用途，属何类型培养基？为什么？⑷.此培养基在选育菌种中的作用是什么？(12分)2..什么是细菌的生长曲线？其变化有什么规律？（12分）3.Bacillussubtilis和Escherichiacoli的细胞壁在化学组成和结构上有何重要区别？它们经革兰氏染色后各呈什么颜色？为什么？（14分）4.为什么.湿热灭菌比干热灭菌的效率高？（6分）乙醇对细菌芽孢的杀菌效力较差，为什么？（6分）试卷4、一.填空（1分/空×20）：1．鞭毛的化学成分为_____⑴______，鞭毛的主要功能为_____⑵________。2.在酵母菌细胞结构中，___⑶___具有保护细胞及维持细胞外形的功能；__⑷__具有控制细胞对营养物及代谢产物的吸收和交换作用；_⑸___是细胞进行生命活动，新陈代谢的场所；____⑹___是呼吸酶类的载体，细胞的能量供应站；___⑺___具有传递细胞遗传性状的作用。3.对玻璃器皿进行加热灭菌的方法有_____⑻____和____⑼______两种，前者常用___⑽__℃，维持__⑾_小时，后者则常用__⑿__℃，经__⒀__分钟，即可达到灭菌的目的。4实验室常见的干热灭菌手段有_______⒁_______和________⒂________；5.Rhizopussp.为_⒃___核__⒄___状__⒅__细胞真菌,其细胞壁的主要成分为__⒆____,常以____⒇____方式繁殖。二.选择题（1分/小题×20）1..多数霉菌细胞壁的主要成分为____.

a.纤维素b几丁质c.肽聚糖d.葡聚糖和甘露聚糖

2.下列孢子中属于Aspergillusniger的无性孢子是___a子囊孢子b.担孢子c.孢囊孢子d.接合孢子e.分生孢子3.使用高压锅灭菌时，打开排汽阀的目的是_____a.防止高压锅内压力过高，使培养基成分受到破坏b.排尽锅内有害气体c.防止锅内压力过高，造成灭菌锅爆炸d.排尽锅内冷空气4.E．coli属于_____型的微生物。a.光能自养b.光能异养c.化能自养d.化能异养5.革兰氏染色的关键步骤是___a.结晶紫（初染）b.碘液（媒染）c.酒精（脱色）d.蕃红（复染）6.食品和饮料工业生产上常采用的“巴氏灭菌法”是一种______方法。a.消毒b.抑菌c.灭菌d.除菌7.下列微生物能通过细菌滤器的是____a.细菌b.酵母菌c.病毒d霉菌8.下列因素影响微生物生长_____a.pHb.温度c.水分d.这些都是9.细菌的生长曲线中，总菌数和活菌数几乎相等的是____a.延缓期b.对数期c.稳定期d.衰亡期10.下列耐热能力最强的是___a.营养细胞b.菌丝c.孢子d.芽孢11.决定病毒感染专一性的物质基础是____

a.核酸b.蛋白质c.脂类d.糖类12..放线菌适宜生长的pH范围为_____

a.＜4.0b.4.0-6.0c.6.5-8.0d.8.0

13.杀灭细菌芽孢最有效的方法是：a.煮沸法b.流通蒸气灭菌法c.紫外线照射d.高压蒸气灭菌法14.细菌的主要繁殖方式为____

a.裂殖b.芽殖c.增殖d.都对

15.下列不属于主动运输特点的是____

a.逆浓度b.需载体c.不需能量d.选择性强16.固体培养基中,琼脂使用浓度为____a.0b.0.2～0.7%c.1.5～2.0%d.5%

17.葡聚糖和甘露聚糖是_____细胞壁的主要成分

a.细菌b.酵母菌c.霉菌d.病毒

18.Escherichiacoli经革兰氏染色后,菌体应呈___a.无色b.红色c.黑色d.紫色

19.噬菌体与细菌的关系为____a.互生b.寄生c.猎食d.拮抗20.原核生物___。a.有细胞核b.有有丝分裂c.有线粒体d.有细胞壁三.判断题（1分/小题×10）：1.放线菌和霉菌都具有营养菌丝和气生菌丝。

2.脂多糖是G--菌细胞壁所特有的组成成分。3.芽孢萌发后可形成菌体，所以芽孢的生成是细菌的一种繁殖方式。

4.细菌与真菌的细胞壁组分基本相同。5.细菌的营养物质运输的主要方式为被动吸收。6.在同一温度下，干热灭菌和湿热灭菌效果是相同的。7.酵母菌的无性孢子为芽孢子，有性孢子为接合孢子。8.霉菌为单细胞有隔菌丝，其菌丝体由基内菌丝，气生菌丝和孢子丝组成，既可进行无性繁殖也可进行有性繁殖。9.细菌的核糖体的沉降系数为70S，可分为30S和50S两个亚基。10.链霉菌和毛霉都呈丝状生长，所以它们都属于真菌中的霉菌。四.分析问答题：1.怎样观察、鉴别细菌、放线菌、酵母菌、霉菌？（14分）2.有一培养基如下:甘露醇,MgSO4,K2HPO4,KH2PO4,CuSO4,NaCl,CaCO3,蒸馏水。试述该培养基的A.碳素来源;B.氮素来源;C.矿质来源,该培养基可用于培养哪类微生物?（10分）为了防止微生物在培养过程中会因本身的代谢作用改变环境的pH值，在配制培养基时应采取什么样的措施？(10分)4.芽胞为什么具有较强的抗逆性?(10分)5.微生物生长需要哪些基本条件？（6分）参考答案：3一.填空：⑴碳素⑾以无性方式（产生分生孢子）⑵球形⑿抗菌素⑶杆状⒀细胞膜⑷螺旋形⒁线粒体⑸培养基⒂水⑹中和微生物代谢产生的酸⒃碳素⑺几丁质⒄氮素⑻碳源⒅矿质元素⑼能源⒆生长因素（生长因子）⑽原核⒇化能异养型二.选择题：⑴b⑸c⑼a⒀b⒄c⑵b⑹b⑽c⒁a⒅a⑶c⑺b⑾d⒂c⒆b⑷b⑻b⑿b⒃d⒇d三.判断题：⑴√⑶√⑸√⑺√⑼×⑵×⑷√⑹×⑻√⑽√四.分析问答题：1.以下培养基：NaNO32.gK2HPO41.gKCl0.5gMgSO40.5gFeSO40.01g羧甲基纤维素钠10g琼脂2.0g水1000mlPH自然⑴.按其营养成分的来源，属何类型培养基？为什么？⑵.按其物理状态，属何类型培养基？为什么？⑶.按其用途，属何类型培养基？为什么？⑷.此培养基在选育菌种中的作用是什么？(12分)⑴.合成培养基。培养基是由成分清楚含量恒定的化学试剂组成。⑵.固体培养基。培养基中含有凝固剂琼脂。⑶.选择培养基。培养基中是以羧甲基纤维素钠为唯一的碳源。⑷．在选育菌种中用来筛选纤维素酶产生菌。2..什么是细菌的生长曲线？其变化有什么规律？（12分）把少量的细菌接种到一定体积的，合适的，液体培养基中，在适宜的条件下培养；在一定的时间内（如24hr）每隔一定时间（如隔2hr）取样测菌数；以细菌数目的对数为纵坐标，以培养时间为横坐标。（即以细菌数目的对数对培养时间作图）由此画出的关系曲线称为生长曲线。变化的规律：在延滞期细胞数不增加，甚至略有减少。在对数期细胞数以几何级数增加在稳定期总菌数和活菌数都达到最大值；到衰亡期总菌数减少3.Bacillussubtilis和Escherichiacoli的细胞壁在化学组成和结构上有何重要区别？它们经革兰氏染色后各呈什么颜色？为什么？（14分）化学组成磷壁酸脂多糖肽聚糖脂肪结构厚度Bacillussubtilis＋－50%2%均一的单层结构较厚Escherichiacoli－＋5～10%11～22%复杂的多层结构较薄经革兰氏染色后Bacillussubtilis呈蓝紫色，为革兰氏阳性菌Escherichiacoli呈红色，为革兰氏阴性菌①.∵G-菌的细胞壁薄，脂肪含量高，肽聚糖少，经结晶紫、I2液染色，乙醇脱色处理后，脂肪被乙醇溶解；使细胞壁的通透性增大。∴G菌易脱色复染。呈复染色——红色。②.G+菌的细胞壁较厚，细胞壁中肽聚糖含量高，细胞壁的通透性差。在乙醇的作用下，肽聚糖的网状结构收缩变得更紧密—通透性进一步降低。∴G+菌细胞中的结晶紫.I2复合物不易被乙醇脱色去掉。菌体呈蓝紫色。4.为什么.湿热灭菌比干热灭菌的效率高？（6分）∵a.湿热蒸汽的穿透力大(热传导好)。更易于传递热量；b.蒸汽在物体表面凝结成水时,放出的潜热,能迅速提高灭菌物体的温度。c.凝固蛋白质所需要的温度与蛋白质的含水量有关。在湿热条件下,菌体吸收水分使细胞含水量增加。则菌体蛋白质易凝固变性更易破坏保持蛋白质稳定性的氢键等结构；∴湿热灭菌的效率高,所需的时间短。5.乙醇对细菌芽孢的杀菌效力较差，为什么？（6分）乙醇的杀菌作用机制：主要是⑴具有脱水作用，引起细胞蛋白质脱水变性，造成M死亡。∵①.芽孢中游离水含量很低。②.芽孢壁厚而致密。∴醇类物质对于芽孢菌一般没有作用。⑵.是脂溶剂，可损伤细胞膜。参考答案：4一.填空：⑴蛋白质⑾2小时⑵运动⑿126℃⑶细胞壁⒀30分钟⑷细胞膜⒁火焰灭菌⑸细胞质⒂热空气灭菌⑹线粒体⒃真核⑺细胞核⒄丝⑻干热（热空气）灭菌⒅单⑼高压蒸汽灭菌⒆几丁质⑽160℃⒇无性二.选择题：⑴b⑸c.⑼b.⒀d.⒄b.⑵e.⑹a.⑽d.⒁a.⒅b.⑶a⑺c⑾b.⒂c.⒆b.⑷d.⑻d.⑿c.⒃c.⒇a.d.三.判断题：⑴√⑶×⑸×⑺×⑼√⑵√⑷×⑹×⑻×⑽×四.分析问答题：1.怎样观察、鉴别细菌、放线菌、酵母菌、霉菌？（14分）1.1肉眼观察菌落形态：多数细菌、酵母菌的菌落表面都是光滑、湿润的。但是细菌的菌落比酵母菌的菌落要较小。霉菌、放线菌的菌落都是由菌丝体组成，但是霉菌的菌落质地疏松，呈絮状、蜘蛛网状、绒毛状。放线菌的菌落质地呈紧密绒状，表面硬，干燥or较干燥，有许多皱折。形成孢子后，菌落表面呈粉状or颗粒状。1.2显微镜观察菌体形态：酵母菌、霉菌的菌体细胞较大，可用高低倍镜进行观察。在高低倍镜下多数酵母菌菌体细胞呈圆形、椭圆形。多数霉菌菌体细胞呈分支管状（丝状）。细菌、放线菌的菌体细胞较小，需用油浸镜进行观察。在油浸镜下细菌细胞呈圆形、杆状、螺旋形；放线菌菌体细胞呈分支管状（丝状）。根据以上特征可鉴别区分这四类细胞微生物。2.有一培养基如下:甘露醇,MgSO4,K2HPO4,KH2PO4,CuSO4,NaCl,CaCO3,蒸馏水。试述该培养基的A.碳素来源;B.氮素来源;C.矿质来源,该培养基可用于培养哪类微生物?（10分）A.碳素来源是甘露醇B.氮素来源是空气中的氮气C.矿质来源是MgSO4,K2HPO4,KH2PO4,CuSO4,NaCl,CaCO3,该培养基可用于培养固氮微生物。3.为了防止微生物在培养过程中会因本身的代谢作用改变环境的pH值，在配制培养基时应采取什么样的措施？(10分)3.1在培养基中加入缓冲剂（K2HPO4,—KH2PO4）3.2在培养基中加入CaCO3,4.芽胞为什么具有较强的抗逆性?(10分)因为芽胞具有以下特点：①.芽孢的自由水含量很低，代谢活动几乎停止，是一休眠体。②.芽孢壁厚而致密。a.可阻止细胞质吸水膨胀。b.热和化学试剂不易渗透进去起作用。③.芽孢内含有以Ca2+盐形式存在的2.6—吡啶二羧酸(DPA).④.芽孢中酶的相对分子质量较营养细胞中相应酶的小。5.微生物生长需要哪些基本条件？（6分）营养条件：C源、N源、无机盐、生长因子、水环境条件：pH、温度、O2、氧化还原电位、渗透压适宜。食品微生物学检验GB4789系列知识点汇总GB4789.1-2016食品卫生学检验总则一、2016版总则变更内容1.删除了标准中的英文名称、起草单位变更为中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局。2.删除了规范性引用文件。3.修改了实验室基本要求：应具有相应的微生物专业教育或培训经历（如生物学、植物学、医学、食品科学与工程、食品质量与安全等与微生物有关的相关专业），具备相应的资质（应有岗位上岗证、生物安全上岗证和压力容器上岗证），能够理解并正确实施检验。=1\*GB3①人员修改为检验人员应掌握实验室生物安全操作和消毒知识（相关标准及培训，如GB19489-2008实验室生物安全通用要求、消毒技术规范（2002））。应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。应在检验过程中遵守相关安全措施的规定，确保自身安全。有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色的实验（即无颜色视觉障碍）。=2\*GB3②环境与设施--突出温度、湿度和洁净度。生物危害程度应与实验室生物防护水平相适应:第一类：引起人和动物非常严重疾病，国家未发现或已宣布消灭的微生物，如天花病毒。第二类：引起任何动物比较严重疾病，在人和人、人和动物之间传播如霍乱弧菌。病原微生物分类第三类：引起疾病，但对人、动物或者环境不构成严重危害如沙门氏菌、单增李斯特氏菌。第四类：通常不会引起人或动物疾病的微生物。一级（BSL-1）：操作第四类病原微生物（属于正压，适用范围如大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌等。重要设备是超净工作台，它可以保护样品不受污染。）实验室生物安全级别二级（BSL-2）：操作第三类病原微生物（属于负压，适用范围如沙门氏菌、等致病菌。重要设备是=2\*ROMANII级生物安全柜。）三级（BSL-3）：操作第二类病原微生物四级（BSL-4）：操作第一类病原微生物消毒：是杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其中的孢子。灭菌：是杀死和去除所有微生物及其中孢子的过程。紫外线消毒（臭氧）环境：洁净室消毒空间熏蒸（如空间被霉菌污染可用甲醛熏蒸法消毒）消毒剂表面消毒微生物实验湿热灭菌或常用室消毒灭菌方式平皿工器具灭菌和设备消毒高压灭菌干热灭菌（180℃1h或170℃2h）湿热灭菌或高压灭菌培养基和试剂灭菌煮沸灭菌过滤除菌紫外线消毒法：紫外灯管放射一定波长，破坏细菌或病毒的DNA和RNA，使他们丧失生存能力和繁殖能力，从而达到灭菌目的。紫外线的特点是对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌芽孢对其抵抗力大，且紫外线穿透力极低，所以只能用于表面灭菌，对固体物质灭菌不彻底。微生物实验室消毒处理方法：最佳杀菌波长：260nm，需定期更换。有效杀菌距离物品：25-60cm空气：＜2m照射时间：灯亮5-7min后开始计算，＞30min（无人条件下打开）适用范围：室内空气、物体表面。注意事项：人员需在关闭紫外灯至少30min后方可入内作业。=3\*GB3③检验用品--增加附录A和一次性用品。附录A微生物实验室常规检验用品和设备高压锅灭菌效果评价方法化学指示剂：即化学指示卡/胶带，使用方便，高压后可立即得知检测结果。生物指示剂：准确性高，高压后需要培养后才得知检测结果。=4\*GB3④培养基和试剂质控-GB4789.28-2013。=5\*GB3⑤质控菌株-新增实验室分离、鉴定的野生菌株。4.修改了样品采集=1\*GB3①采样原则：样品的采集应遵循随机性、代表性的原则；采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。=2\*GB3②采样方案：根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的威海程度等确定采样方案。采样方案分为二级好三级采样方案。二级采样方案设有n、c和m值，三级采样方案设有n、c、m和M值。（其中n表示桶一批次产品应采集的样品件数；c表示最大可允许超出m值得样品数；m表示微生物指标可接受水平限量值(三级采样方案)或最高安全限量值(二级采样方案)；M表示微生物指标的最高安全限量值。）注意事项：按照二级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值大于m值。按照三级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许全部样品中相应微生物指标检验值≤m值；允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值之间；不允许有样品相应微生物指标检验值大于M值。5.修改了检验—“样品检验”6.修改了生物安全和质量控制（优化）7.修改了记录与报告检验过程中应即时、客观地记录观察到的现象、结果和数据等信息。实验室应按照检验方法中规定的要求，准确、客观地报告检验结果。8.修改了检验后样品的处理检验结果报告后，被检样品方能处理；检出致病菌的样品要经过无害化处理；检验结果报告后，剩余样品和同批产品不进行微生物项目的复检。二、2016版总则具体要求各种微生物危害分类采样分级危害程度微生物学指标三级食品保质期菌落总数、霉菌和酵母间接指示菌大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌、肠杆菌科、金黄色葡萄球菌中等程度局限传播葡萄球菌肠毒素、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、产气夹馍梭菌二级中等程度广泛传播沙门氏菌、诺如病毒、肠出血大肠埃希氏菌严重程度O1型霍乱、肉毒梭菌单核细胞增生李斯特氏菌婴儿食品沙门氏菌赫尔阪崎肠杆菌在中等以上甚至严重危害的情况下，使用二级采样方案。对健康危害低的，则建议使用三级采样方案。分级抽样方案：同批食品总微生物数量一般是正态分布，表明同批次具有均一性。但对于单一检样来说，微生物分布或数量一般不会均匀（液态食品除外）。这样的不均一型造成检验结果判读困难。N越大越准确，但是应考虑适度严格性的要求。三、2016版总则相关质量控制检验人员的质量控制（实施考核、监督方式）：1.问答、试题2.盲样测试3.加标测试4.实验室内部人员对比r≤0.25参考BSENISO4833-2003，其中对结果重复性的规定为：用相同的方法，同一试验材料，在相同的条件（同一操作者、相同的设备、同一实验室和短暂的时间间隔）下，所测得的两个独立测试结果只差的绝对值不能大于重复性极限（r=0.25）。举例：第一次测试结果为105=100000CFU/g(ml)第二次测试结果应在第一次结果的±0.25log10单位范围内即在log104.75-og105.25范围内即第二次测试结果在56000-178000CFU/g(ml)范围内视为无差异。5.实验室间对比R≤0.45参考BSENISO4833-2003，其中对结果重复性的规定为：用相同的方法，同一试验材料，在不同的条件（不同的操作者、不同的设备、不同的实验、不同或相同的时间）下，所得的两个测试结果只差绝对值不能大于再现性极限，即R=0.45。举例：第一次测试结果为105=100000CFU/g(ml)第二次测试结果应在第一次结果的±0.45log10单位范围内即在log104.55-og105.45范围内即第二次测试结果在36000-280000CFU/g(ml)范围内视为无差异。GB4789.2-2016食品微生物学检验菌落总数测定一、菌落总数的定义食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g(ml)检样中形成的微生物菌落总数。在GB4789.2-2016的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。注意：有的平板计数琼脂上长一片霉菌，则此次试验结果作废，需重新检测（霉菌属于真菌类，它产生的霉菌毒素一直普通菌的生长，所以若有一大片霉菌生长需重新检测，并清理实验室。）二、菌落总数测定的卫生学意义检测食品本身的新鲜程度和加工、贮存运输过程中是否受到污染。必须配合大肠菌群的检验和其他病原菌项目的检验，才能作出比较全面准确的判定。三、2016版国家标准的主要变动=1\*GB3①拍击式均质：方便，只需购置一次性无菌均质袋；快捷，1-2min内完成均质；科学，均质过程中不会产生高温；均质均匀，可使样品菌完全稀释出来；此方法不适合均质坚硬样品，如鱼骨类样品。=2\*GB3②培养基---平板计数琼脂营养琼脂NA营养琼脂NA2003版蛋白胨10.0g牛肉膏3.0g氯化钠5.0g琼脂15.0g蒸馏水1000ml平板计数琼脂PCA2010版和2016版胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000ml培养基改变依据：国外食品微生物检验的权威方法（ISO、FDA、AOCAC）均采用PCA，它的营养更优化。=3\*GB3③计数和报告-----平板和菌落选取原则●选取每个平皿菌落数在30-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板进行计数。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。●有较大片状生长菌落的平板不易采用。●如片状菌落不足平板一般，而另一半平板菌落分布均匀，可计分布均匀的一半，再乘以2。●如平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则每条单链作为一个菌落计算。=4\*GB3④计数和报告-----菌落总数计算方法●如果只有一个稀释度平板的菌落数在30-300CFU适宜范围内，则计算该稀释度两个平板菌落平均数，再乘以稀释倍数，作为每g（ml）样品中菌落总数结果。●若有两个连续稀释度的平板菌落数均在30-300CFU适宜范围内，按公式N=∑C/(n1+0.1n2)d计算。N:样品中菌落数，∑C：含适宜范围CFU的平板菌落数之和，n1：第一稀释度（低稀释度）平板个数，n2：第二稀释度（高稀释度），d：稀释因子（第一稀释度）。●所有平板菌落数均＞300，计最高稀释度平板的平均菌落数。●所有平板菌落数均＜30，计最低稀释度平板的平均菌落数。●样品原液和所有稀释度平板均无菌生长，以＜1乘以最低稀释倍数计算。●所有稀释度平板菌落数均不在20-300之间，有些＜30，有些＞300，则最接近30-300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。=5\*GB3⑤计数和报告-----结果报告（采取四舍五入法）编号菌落总数报告方式单位195.596CFU/g或CFU/ml（单位需大写CFU）216801700或1.7X1033均为蔓延菌落无法计数报告“菌落蔓延”4空白对照有菌结果无效四、2016版国家标准的检验流程检样25g检样25g（ml）样品+225ml稀释液，均质1010倍系列稀释选择2-3选择2-3个适宜稀释度样品均液，各取1ml分别加入无菌培养皿中每个培养皿中加入15-20ml平板计数琼脂培养基，混匀。每个培养皿中加入15-20ml平板计数琼脂培养基，混匀。培养培养计数各平板菌落数计数各平板菌落数计算菌落总数计算菌落总数报告报告五、其他注意事项1.如样品（干调、面粉、脱水蔬菜）中可能含有在琼脂表面蔓延生长的菌落，可在凝固后的琼脂表面再覆盖一层（4ml）培养基。这样可以有效防止菌落蔓延的现象出现。2.稀释液选择磷酸盐缓冲液：适用于偏酸或偏碱性样品的稀释。生理盐水：适用于常规样品的稀释。3.倾注平板计数琼脂在15-20ml，一般要求达到18ml以上，即琼脂高度＞3mm。若倾注的培养基太薄，菌需要的营养成分不够，使菌生长的不完好，不便于观察结果。4.样品与培养基一定要混合均匀，建议混匀方法：上下摇晃-左右摇晃-顺时针摇晃-逆时针摇晃。若混合不均匀，有的菌落会长到平板边缘，不便于观察，影响最终结果。5.培养基水浴温度和倾注温度在46±1℃。培养基的冷却方法：要在恒温水浴锅中通过水来冷却；不可直接放到试验台或地面上冷却，因这样培养基底部容易先凝固，倾注培养基时，有凝固块到处，导致培养基有结块，即不美观，有影响观察结果。6.培养条件：一般样品36±1℃培养48±2h，水产品（指原生态、未经过加工的水产品原料），它的培养温度要接近原生态的温度，即30±1℃，培养72±3h。7.样品稀释液有时会带有细碎的食物颗粒（如奶粉、坚果），为避免这些颗粒与菌落发生混淆，可将样品稀释液与PCA混合，单做培养，置于4℃冰箱放置同样时间，以便在计数时作为对照。（营养琼脂可加红四氮唑来区别菌和颗粒，一般不建议使用）8.必须做空白对照：检测培养基、平皿、稀释液的无菌程度。同时，应在工作台内打开一块空白PCA（其暴露时间应与检样时间相当），以了解样品在检验过程中有无受到来自环境的污染。GB4789.3-2016食品微生物学检验大肠菌群计数一、大肠菌群定义1.定义：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。2.该菌主要来源于人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。即大肠菌群为卫生学指标。3.这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化鉴定试验，可将大肠菌群细分为大肠埃希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和肠杆菌等。二、2016年国标主要修订内容1.标准替代：GB4789.3-2010；GB/T4789.32-2002；SN/T0169-20102.增加检验原理MPN法：是统计学和微生物学结合的一种定量检测法，待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。平板计数法：大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。3.修改典型菌落描述：如菌落直径较典型菌落小，为可疑菌落，也要挑取进行验证。4.修改第二法平板菌落数的选择：最低稀释度平板低于15CFU的记录具体菌落数。5.修改第二法验证试验：若少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落进行验证。若大于10个菌落，则挑取10个典型和可疑菌落进行验证。三、大肠菌群检测流程●MPN法PH应在6.5-7.5PH应在6.5-7.5之间，必要时可用1mol/L的NAOH或HCL调节检样25g（ml）+225ml稀释液，均质10倍梯度稀释10倍梯度稀释选择适宜三个连续稀释度的稀释液，接种到选择适宜三个连续稀释度的稀释液，接种到LST肉汤中24h为预判若产气进行验证；若未产气继续培养至48h查看结果。36±1℃24-48h24h为预判若产气进行验证；若未产气继续培养至48h查看结果。BGLB肉汤产气不产气BGLB肉汤产气不产气 36±1℃48±2h产气不产气产气不产气大肠菌群阳性大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阴性查MPN表，报告结果查MPN表，报告结果1.初发酵试验：A、月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST（成分：胰蛋白胨或胰酪胨、氯化钠、乳糖、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、月桂基硫酸钠）作用：=1\*GB3①胰酪胨在培养基中作为基础营养物质提供细菌生长所需的氮源、维生素、氨基酸等生长因子。=2\*GB3②乳糖作为可发酵的碳源。=3\*GB3③NaCl维持体系渗透压平衡。=4\*GB3④磷酸盐为菌体生长提供一个相对稳定的酸碱缓冲体系。=5\*GB3⑤月桂基硫酸钠抑制非大肠菌群类细菌的生长。大肠菌群类细菌利用培养基中的乳糖产气而与其它不产气的细菌相区别。B、接种方式：1ml稀释液+10mlLST；10ml稀释液+10ml双料LST。C、培养条件：36℃，培养24-48±2h。D、结果观察：小导管是否产气。2.复发酵试验：A、煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB（成分：蛋白胨、乳糖、牛胆粉溶液、0.1%煌绿水溶液）的作用：=1\*GB3①蛋白胨在培养基中作为基础营养物质提供细菌生长所需的碳源、氮源。=2\*GB3②牛胆盐和煌绿抑制革兰氏阳性菌及非大肠菌群的革兰氏阴性菌的生长。=3\*GB3③乳糖作为可发酵的碳水化合物。B、接种方式：1环产气的LST+10mlBGLG。C、培养条件：36℃，48±2h。D、结果观察：小导管是否产气。3.结果报告表大肠菌群最可能数MPN检索表阳性管数MPN95%可信限阳性管数MPN95%可信限0.100.010.001下限上限0.100.010.001下限上限000<0.3-9.5220214.5420013.00.159.6221288.7940103.00.1511222358.7940116.11.218230298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.6941003.60.1718301388.71101017.21.3183026417180102113.6383104391801107.41.3203117517200111113.63831212037420120113.64231316040420121154.5423209318420130164.542321150374202009.21.43832221040430201153.642323290901000202204.542330240421000210153.742331460902000211204.54233211001804100212278.794333>1100420-注1：本表采用3个稀释度0.1g（ml）、0.01g（ml）、0.001g（ml），每个稀释度接种3管。注2：表内所列检样量如改用1g（ml）、0.1g（ml）、0.01g（ml）时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.01g（ml）、0.001g（ml）、0.0001g（ml）时，则表内数字应相应增高10倍，其余类推。根据阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中含菌量的最近似数值。MPN检索表只给了三个稀释度，如改用其他稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。检样25g检样25g（ml）+225ml稀释液，均质需同时用生理盐水做空白对照10倍梯度稀释需同时用生理盐水做空白对照10倍梯度稀释选择2-3选择2-3个适宜连续稀释度的样品匀液，接种VRBA平板上计数典型和可疑菌落36±1℃18-24h计数典型和可疑菌落BGLB肉汤BGLB肉汤报告结果36±1℃24-48h报告结果1.培养基：结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）=1\*GB3①原理：乳糖作为可发酵碳源；胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌生长；中性红为酸碱指示剂。=2\*GB3②大肠菌群特点：紫红色