DB2301T 156-2024蓝靛果链格孢属叶斑病抗性鉴定技术规程

ICS65．020.202301IDB2301/T156—2024 2规范性引用文件 3术语和定义 4圃地选择 5抗病性鉴定 5.1接种体准备 5.2资源建植 5.3接种 5.4病情调查 5.5抗性评价 6生产档案 DB2301/T156—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由哈尔滨市农业技术推广总站提出。本文件由哈尔滨市农业农村局归口。本文件起草单位：东北农业大学、哈尔滨市农业技术推广总站、嫩江农业技术推广中心、哈尔滨市农业科学院、哈尔滨市双城区农业技术推广中心、哈尔滨市呼兰区农业技术推广中心。本文件主要起草人：李永刚、刘金鑫、曹宝祥、洪峰、金羽、高伟超、柴赫男、李爱华、张立微、胡海江。1DB2301/T156—2024蓝靛果链格孢属叶斑病抗性鉴定技术规程本文件规定了蓝靛果链格孢属叶斑病抗性鉴定的术语和定义和蓝靛果链格孢属叶斑病抗性鉴定的圃地选择、抗病性鉴定、生产档案等要求。本文件适用于蓝靛果育种资源和品种抗链格孢属叶斑病的人工接种鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB15618土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准DB23/T2981蓝靛果绿枝扦插育苗技术规程DB23/T3124黑龙江蓝靛果种质资源圃营建技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1蓝靛果链格孢属叶斑病Alternarialeafspotofbluehoneysuckle蓝靛果链格孢属叶斑病是由极细链格孢（Alternariatenuissima）和链格孢(A.alternata)复合侵染造成的一种真菌病害，受感染叶片最初表现为小的棕色和不规则的病变，后沿叶缘扩大为不规则的斑点，在适宜发病条件下，受感染叶片逐渐枯萎并从植株上脱落。4圃地选择4.1抗病鉴定圃应选择光照充足、排灌方便、土质疏松、土壤pH5.0～pH7.0的平缓地块。4.2圃地土壤环境质量应符合GB15618的规定。5抗病性鉴定5.1接种体准备5.1.1菌种来源应选用在当地采集、分离并经柯赫氏法则验证后，通过形态学和分子生物学鉴定后的极细链格孢（Alternariatenuissima）和链格孢(A.alternata)或者实验室内保存的有代表性的菌株。5.1.2菌种保存2DB2301/T156—2024将生长于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）菌种置于6～8℃冰箱中短期（3～6个月）保存或液氮长期保存。5.1.3接种体繁殖5.1.3.1选取无杂菌，菌落暗灰色，在培养基上扩散生长，菌体在PDA培养基上扩繁7天后，打成菌蝶（0.7cm），备用。5.1.3.2将高粱粒用水煮20min后，捞出后稍沥干水称量100g后至于250ml三角瓶中，121℃灭菌30min，冷却后备用。5.1.3.3转移5个菌蝶至高粱粒的三角瓶内，26℃恒温箱中黑暗培养5天，每天摇晃一次使高粱粒表面均匀长满菌丝，置于4℃备用。5.2资源建植5.2.1每待测品种或资源应要插条45株定植，并按DB23/T2981的规定执行。5.2.2种植感病品种30株作为对照。5.2.3施肥、浇水等田间管理按DB23/T3124的规定执行。5.2.4定植完成后，应绘制定植图，标明每份品种或资源在鉴定圃内的具体位置。5.3接种5.3.1接种宜在建植第二年7月进行，选择生长均匀一致的30株进行抗病性鉴定。5.3.2将扩繁好的带有极细链格孢（Alternariatenuissima）和链格孢(A.alternata)的高粱粒用无菌水分别冲洗配制孢子悬浮液，用灭菌的双层纱布过滤，备用。5.3.3用血球计数板稀释至106个孢子/mL等量混和，备用。5.3.4用喷雾器在下午4时后进行接种，喷至叶片表面和背面孢子悬浮液饱和。5.3.5接种后用塑料布封闭保湿48h后移除塑料布，常规管理。5.4病情调查5.4.1调查周期每3天观察1次接种植株发病情况，待感病对照品种表现感或高感后，进行不同品种或育种资源调查。5.4.2调查方法5.4.2.1每份育种资源或品种调查30株。5.4.2.2调查分级标准以叶斑病的数量及病斑所占面积的比例为依据，调查主要是根据分级标准目测每份鉴定材料群体的发病状况。5.4.2.3蓝靛果育种资源或品种抗链格孢属叶斑病病情级别及划分标准见表1。表1蓝靛果育种资源或品种抗链格孢属叶斑病病情级别划分标准病情级别1植株叶片上无病斑或病斑占叶面积少于或等于5%3植株少数叶片上有少量病斑，占叶面积6%~10%5植株大部分叶片有病斑，且病斑占叶面积11%~25%7植株绝大部分叶片有病斑，且病斑占叶面积26%~50%9全株叶片基本为病斑覆盖，且病斑占叶面积大于51%或叶片全部枯死3DB2301/T156—20245.5抗性评价5.5.1当对照材料达到其相应感病程度（7或9级），该批次鉴定视为有效5.5.2抗病鉴定材料发病程度（病情级别）确定其抗性水平，蓝靛果育种资源和品种抗链格孢属叶斑病的评价标准见表2。表2蓝靛果育种资源和品种抗链格孢属叶斑病的评价标准病情级别抗性1高抗Highlyresistant（HR）3抗Resistant（R）5中抗Moderatelyresistant（MR）7感Susceptible（S）9高感Highlysusceptib