山茱萸炮制过程监测及质量控制研究

山茱萸炮制过程监测及质量控制研究中药山茱萸为山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalsSieb.etZucc.的干燥成熟果肉。山茱萸是珍贵的中国草药,也是现代化医疗、保健食品等领域的研究热点。临床上经常以酒山茱萸入药,它具有滋阴补肾的功效。研究显示山茱萸炮制后药效成分(氨基酸、环烯醚萜等)含量降低,有机酸、5-羟甲基糠醛等成分含量增高。本课题采用传统鉴定方法及先进的现代分析技术两种检测方式,研究山茱萸炮制过程中化学成分含量的变化,以阐明山茱萸炮制的机理,并为提高山茱萸饮片炮制规范提供依据。1.山茱萸炮制品质量标准的传统检验方法山茱萸炮制品传统的鉴定方法,包括鉴定其性状,对水分、灰分、浸出物含量进行测定,采用薄层色谱方法定性鉴别酒萸肉中的熊果酸和马钱苷,液相色谱法检测其中马钱苷、莫诺苷的含量。选择三批酒蒸山茱萸样品对其进行质量评定,结果显示其性状合格,三批饮片均含有熊果酸和马钱苷,水分、灰分和浸出物含量合格,马钱苷、莫诺苷含量合格,说明三批酒萸肉样品符合药典标准。为了进一步验证炮制后山茱萸的品质,实验中还测定了各批次酒山茱萸中没食子酸、多糖、总黄酮、总有机酸、总皂苷的含量,结果表明三批次酒萸肉品质较好,质量均一稳定。2.山茱萸炮制过程中的红外光谱分析利用红外光谱技术,分析炮制过程中山茱萸红外光谱的宏观和指纹特征。以酒蒸法炮制山茱萸药材,对炮制过程中不同时间的酒萸肉进行红外光谱信息采集并进行分析。根据红外光谱信息,.在3309cm-1,1713cm-1,1028cm-1处有特征吸收,可以推断山茱萸中存在醇类、有机酸类、酯类等化合物。通过实验分析,发现氨基化合物在0～24h内的含量变化呈现出下降的趋势,而在24～48h之间含量下降趋势变缓,结合实验前期对山茱萸炮制过程中理化参数研究结果,判断18～24h为最适宜炮制时间。红外光谱分析快速、方便,特征性强,可以识别山茱萸炮制品中的主体成分,为炮制工艺的优化提供科学的依据。3.GC-MS检测山茱萸炮制过程中挥发性成分含量变化探讨气相色谱-质谱(GC-MS)联用对山茱萸炮制过程中化学成分含量变化的研究。先用酒蒸法炮制山茱萸,再用甲酯化的方法制备样品溶液,对炮制过程中0～48h的酒萸肉进行气质联用信息的采集并进行化学成分的含量检测。采用气相色谱-质谱技术进行分析,从不同炮制时间的山茱萸样品中共分离出60多个组分,计算了各色谱峰的相对含量,并从中鉴定了35种成分。主要成分为对羟基苯甲酸甲酯、柠檬酸三甲酯、1-羟基均丙三羧酸三甲酯、壬二酸二甲酯、肉豆蔻酸甲酯、3-(4-羟苯基)-2-丙烯酸甲酯、4-甲基-1,6-庚二烯-4-醇、9-十六碳烯酸甲基酯、棕榈酸甲酯、邻苯二甲酸二丁酯等。气质联用法应用快速、方便,特征性强,可以识别炮制前后山茱萸中的主要成分,阐明山茱萸的炮制机理,为炮制工艺的优化提供科学的依据。4.山茱萸炮制过程中HPLC和UFLC-TOF-MS动态分析建立HPLC和UFLC-TOF-MS方法,研究比较山茱萸炮制过程中化学成分的动态过程。HPLC采用KromasilC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-水(7：93)等度洗脱测定5-羟甲基糠醛,乙腈-水(15：85)等度洗脱测定马钱苷；JFLC-TOF-MS:乙腈-0.01%醋酸水溶液梯度洗脱分析山茱萸提取物；ShimadzuUFLC液相系统,ABSCIEXTripleTOFTM5600质谱仪；负离子检测模式。通过高效液相色谱和液相质谱联用技术,发现不同炮制时间下山茱萸中5-羟甲基糠醛、马钱苷、槲皮素等物质含量均有显著变化。高效液相色谱法在检测山茱萸中常见成分时作用较大,而在质谱负离子检出模式下,山茱萸中其