GB-T33410-2016生化试剂中蛋白酶K活性检测方法_第1页
GB-T33410-2016生化试剂中蛋白酶K活性检测方法_第2页
GB-T33410-2016生化试剂中蛋白酶K活性检测方法_第3页
GB-T33410-2016生化试剂中蛋白酶K活性检测方法_第4页
GB-T33410-2016生化试剂中蛋白酶K活性检测方法_第5页
已阅读5页，还剩4页未读， 继续免费阅读

付费下载

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

生化试剂中蛋白酶K活性检测方法2016-12-30发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布I1生化试剂中蛋白酶K活性检测方法本标准规定了生化试剂中蛋白酶K活性检测方法。本标准适用于分子生物学实验中使用的蛋白酶K活性的测定。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法下列术语和定义适用于本文件。蛋白酶K活性单位proteaseKactivityunit蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶，可催化含有较多的丝氨酸位点的α-酪蛋白水解。本方法中采用α-酪蛋白为反应底物，经蛋白酶K催化水解为L-酪氨酸，在275nm处测定吸光度值。再通过测量各个浓度的L-酪氨酸标准溶液在275nm处的吸光度值，并构建标准曲线得出线性回归方程，以外标法定量。计算蛋白酶K的酶活性。6试剂除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6882规定的三级水。26.10.01mol/E.Tris·HCl称取12.11gTrisbase(三羟甲基氨甲烷盐酸盐)加入适量去离子水使其溶解，定容到100mL,得定容至100mL,即得0.01mol/LTris·HCl缓冲液。称取三氯乙酸65.40g,用去离子水溶解并定容至1000mL。量取8.33mL浓盐酸加人到50mL去离子水中，定容至100mL,得1mol/LHCl。量取10.00mL1mol/LHCl加去离子水定容至100mL,得0.1mol/LHCl。称取2gNaOH,溶解于50mL去离子水中，定容至100mL。0.01mol/LTris·HCl缓冲液(6.1)定容至刻度。置于4℃保存备用。称取预先于105℃干燥至恒重的L-酪氨酸0.1000g,用60mL1mol/LHCl溶液(6.3)溶解后定容至100mL,配成1mg/mLL-酪氨酸标准溶液。再吸取1mg/mLL-酪氨酸溶液10.00mL,用0.1mol/L7分析步骤7.1标准曲线的绘制按表1配制L-酪氨酸标准溶液。管号酪氨酸标准溶液的浓度加入100μg/mL酪氨酸标准溶液的体积加人去离子水的体积00012824636448250称取1g(精确至0.001g)或吸取1mL(精确至0.001mL),根据结合样品具体情况，使用适量的将10g/L酪蛋白溶液(6.5)放入55℃恒温水浴中，预热5min。摇匀，55℃温浴5min;加10g/L酪蛋白溶液(6.5)2.00mL,摇匀。取出静置5min,过滤。加等量滤液至1cm石英比色皿，用紫外分光光度计测定275nm处吸光度值，吸光度值应处于标 (1)8——反应总体积为8mL;5反应

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 各类标准

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论