(高清版)GBT 43778-2024 细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的测定 气相色谱-质谱（GC-MS）法

细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的测定气相色谱-质谱(GC-MS)法2024-03-15发布2024-03-15实施I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口。本文件起草单位：中国计量大学、烟台开发区嘉量标准技术咨询与研究中心、广州洁特生物过滤股份有限公司、浙江经贸职业技术学院、中国测试技术研究院生物所、中国计量科学研究院、上海市质量监督检验技术研究院、甘肃省食品检验研究院、杭州荣泽生物科技集团有限公司、安徽中盛溯源生物科技有限公司。1细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的测定气相色谱-质谱(GC-MS)法本文件描述了气相色谱-质谱(GC-MS)法测定细胞培养液中游离的苯乙烯、2-氯乙醇的方法。本文件适用于细胞培养液中游离的苯乙烯、2-氯乙醇的检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理在细胞培养液中加入内标物的同时加入无机盐，促进挥发性物质从被测细胞培养液中挥发后进入气相，通过自动顶空进样器采集后进行GC-MS法联用分析和确证苯乙烯和2-氯乙醇，用内标工作曲线法定量。5试剂和材料除非另有说明，本文件所用试剂均为色谱纯。水为符合GB/T6682规定的一级水。5.1氯化钠(NaCl)。5.2甲醇(CH₃OH)。5.3标准品：苯乙烯、Dg-苯乙烯、2-氯乙醇、2-氟乙醇，纯度≥99.5%,基本信息见附录A。或经国家认证并授予标准物质/标准样品证书的一定浓度的标准溶液。5.4标准储备液：配制好后于2℃~8℃下密封保存，有效期为6个月。5.4.1苯乙烯(1mg/mL):准确称量50.0mg苯乙烯标准品，用甲醇溶解后，定容于50mL容量瓶中，配制成终浓度为1mg/mL的对照储备液。取2.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混5.4.2D₈-苯乙烯(1mg/mL):准确称量50.0mgDg-苯乙烯内标标准品，用甲醇溶解后，定容于50mL容量瓶中，配制成终浓度为1mg/mL的对照储备液。取0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，配制成10μg/mL溶液作为中间储备液。5.4.32-氯乙醇(10mg/mL):准确称量100.0mg2-氯乙醇标准品，用甲醇溶解后，定容于10mL容量2瓶中，配制成终浓度为10mg/mL的对照储备液。5.4.42-氟乙醇(10mg/mL):准确称量100.0mg2-氟乙醇内标标准品，用甲醇溶解后，定容于10mL容量瓶中，配制成终浓度为10mg/mL的对照储备液。5.5混合标准储备液：分别用移液器准确吸取5.0mL苯乙烯(50μg/mL)、5.0mL2-氯乙醇(10mg/mL)于同一50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，配制成浓度为苯乙烯5μg/mL、2-氯乙醇1mg/mL的混合标准储备液。配制好后于2℃~8℃下密封保存，有效期为6个月。5.6内标工作溶液：用移液器准确吸取1.0mLD₈-苯乙烯(10μg/mL)、0.5mL2-氟乙醇(10mg/mL)于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，配制成浓度为D₈-苯乙烯100ng/mL、2-氟乙醇50μg/mL的混合内标工作溶液。5.7标准工作溶液：用移液器将混合标准储备液(5.5)准确用水稀释50倍，制备成工作母液(苯乙烯100.0μg/L、2-氯乙醇20.0mg/L),再依次分别稀释制备成苯乙烯25.0μg/L、10.0μg/L、5.0μg/L、2.5μg/L、1.0μg/L、0.5μg/L,2-氯0.1mg/L的各浓度混合标准工作溶液，各配制50mL,现配现用。6仪器设备6.1气相色谱-质谱(GC-MS)仪：配电子轰击源(EI源)。6.2自动顶空进样器。6.3电子天平：分度值为0.001g和0.1mg。7试验步骤7.1样品制备取测定样品7mL,经7000×g离心10min,用移液器准确吸取5.0mL上清液，置于20mL顶空瓶中，再用移液器准确加入100μL混合内标工作溶液(5.6),同时加入2g氯化钠，密封并标识，现配现用。同时以超纯水为空白样，加入相同混合内标工作溶液和氯化钠用于空白值的测定。7.2内标工作曲线制作用移液器准确吸取5.0mL各稀释度混合标准工作溶液(5.7),置于20mL顶空瓶中，再分别用移液器准确加入100.0μL混合内标工作溶液(5.6),同时加入2g氯化钠，密封并标识，现配现用。7.3样品处理供试品瓶置于自动顶空进样器中90℃加热孵育30min。取2mL气体顶空进样，注入GC-MS系7.4仪器参考条件7.4.1气相色谱参考条件如下：a)色谱柱：聚乙二醇(PEG)极性色谱柱(60m×250μm×0.25μm),或相当者；b)柱温：70℃,保持4min;10℃/min升温至200℃,保持3min;c)进样口温度：200℃;d)载气流速(He):1.2mL/min;3GB/T43778—2024e)分流比：10:1。7.4.2质谱参考条件如下：a)离子源：电子轰击源(EI源),温度230℃,四极杆温度150℃;b)检测方式：选择性离子监测(SIM);c)选择监测离子及质谱参数，见附录B;7.5气相色谱-质谱测定7.5.1定性测定根据样品中被测物与标准工作溶液中被测物的保留时间进行定性(用于定性的离子色谱图见附录C)。在相同的实验条件下，若被测物的色谱峰保留时间和标准工作溶液的一致(变化范围在±2.5%以内),所选择的离子均出现，而且所选择离子的相对丰度和对照品离子的相对丰度偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性离子的相对丰度最大允许偏差士25士30士507.5.2定量测定在仪器最佳工作条件下，将含被测物溶液(7.1)制作内标工作曲线的溶液(7.2)依次进样分析。以被测物和内标物的定量离子对峰面积比为纵坐标，以被测物的浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。应使样品溶液中各被测物的响应值在仪器测定的线性范围内，如果含量超过标准工作曲线范围，应用水稀释到合适浓度后再进样分析。7.6平行试验按照7.3对同一样品进行样品处理后，进行平行测定。8结果分析被测物的含量用质量浓度表示。按公式(1)计算被测物的质量浓度(p): (1)式中：p——被测物的质量浓度，苯乙烯单位为微克每升(μg/L),2-氯乙醇单位为毫克每升(mg/L);A;——样品中被测成分峰面积；A。——空白样中被测成分峰面积；A、——内标物峰面积；a——内标工作曲线斜率；b——内标工作曲线截距；4n——样品稀释倍数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位小数。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。细胞培养液中苯乙烯检出限为0.2μg/L,2-氯乙醇检出限为50μg/L。5GB/T43778—2024(资料性)标准品基本信息A.1被测物标准品的信息见表A.1。序号中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量1苯乙烯styreneC₈H₈22-氯乙醇2-chloroethanolC₂H₃ClO80.52A.2内标物标准品的信息见表A.2。序号中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量1D₃-苯乙烯C₈D₈22-氟乙醇6(资料性)被测物及内标物的选择监测离子及质谱参数B.1被测物的选择监测离子及质谱参数见表B.1。表B.1被测物的选择监测离子及质谱参数序号中文名称保留时间/min定量离子定性离子1定性离子2驻留时间/ms1苯乙烯22-氯乙醇49.043.080.0B.2内标物的选择监测离子及质谱参数见表B.2。表B.2内标物的选择监测离子及质谱参数序号中文名称保留时间/min定量离子定性离子1定性离子2驻留时间/ms1D₈-苯乙烯84.122-氟乙醇64.07