微生物学实验培养基制备和消毒灭菌

明确培养基配置原理；掌握配制培养基普通方法和步骤；了解高压蒸气灭菌基本原理、应用范围及高压蒸气灭菌操作方法；学习棉塞制作等基本操作技术。目标要求：微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第1页

基本原理：培养基中含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作为凝固剂，琼脂在96℃时溶化，40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。一、牛肉膏蛋白胨培养基制备微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第2页牛肉膏蛋白胨培养基配方

牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g水1000mlpH7.4～7.6微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第3页试验器材

溶液或试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，lmol/LNaOHlmol/LHCl。仪器或其它用具试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第4页操作步骤1．称量

按培养基配方百分比依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。2．溶化

在上述烧杯中先加入少于所需要水量，用玻棒搅匀，然后在石棉网上加热使其溶解。

微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第5页

在未调pH前，先用pH试纸测量培养基原始pH，假如偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入lmol／LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用lmol／LHCl进行调整。3．调pH微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第6页4．过滤

用滤纸或多层纱布过滤。普通无特殊要求情况下，这一步能够省去（本试验勿需过滤）。

5．分装

按试验要求，可将配制培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装试管，其装量不超出管高1／5，灭菌后制成斜面。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第7页6．加塞

在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并确保有良好通气性能。7．包扎

在棉塞外包一层牛皮纸，以预防灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。注明培养基名称、组别、配制日期。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第8页8．灭菌

将上述培养基以0.103MPa121℃，20min高压蒸气灭菌。

微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第9页二、马丁氏培养基制备

基本原理：是一个用来分离真菌选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红和链霉素等组成。其中葡萄糖作为碳源，蛋白胨作为氮源，KH2PO4、MgSO4·7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷、镁离子。这种培养基特点是培养基中加人孟加拉红和链霉素能有效抑制细菌和放线菌生长，而对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上能够得到优势生长，从而到达分离真菌目标。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第10页马丁氏培养基配方KH2PO41gMgSO4·7H2O0.5g蛋白胨5g葡萄糖10g琼脂15~20g水1000mlpH自然临用时以无菌操作在100ml培养基中加入l％链霉素0.3ml，使其终浓度为30μg/ml。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第11页试验器材

溶液或试剂

KH2PO4，MgSO4·7H2O，蛋白胨，葡萄糖，琼脂，链霉素（1％水溶液）。

仪器或其它用具

试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，天平，牛角匙，高蒸气灭菌锅等。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第12页操作步骤称量溶化加塞包扎灭菌微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第13页三、高压蒸气灭菌

基本原理：

高压蒸气灭菌是将待灭菌物品放在一个密闭加热灭菌锅内，经过加热，使灭菌锅隔套间水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时因为蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内压力，从而使沸点增高，得到高于100℃温度。造成菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌目标。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第14页在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气排除是否完全极为主要，因为空气膨胀压大于水蒸气膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气温度低于饱和蒸气温度。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第15页试验器材牛肉膏蛋白胨培养基马丁氏培养基培养皿、试管、三角瓶、移液管手提式高压蒸气灭菌锅等。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第16页操作步骤1.将内层锅取出，再向外层锅内加入适量水，使水面与三角搁架相平为宜。2.放回内层锅，并装入待灭菌物品。3.加盖，并将盖上排气软管插入内层锅排气槽内。再以两两对称方式同时旋紧相正确两个螺栓。微生物学实验培养基制备和消毒灭菌第17页4.用煤气加热，待冷空气完全排尽后，关上排气阀。当锅内压力升到所需