植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座

试验六植物细胞骨架光学显微镜观察一试验目标1经过对洋葱内皮细胞处理，掌握植物细胞骨架制备方法与显微形态观察。2掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色方法。

植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第1页二试验原理细胞骨架是由蛋白质丝组成复杂网状结构，成份有微丝、微管和中间纤维。TritonX-100可溶解抽提细胞中蛋白质和脂质，但不破坏细胞骨架系统。戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色，光学显微镜观察网状结构由微丝组成细胞骨架。植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第2页三试验仪器、材料和试剂1仪器、用具：普通光学显微镜等2材料：洋葱鳞茎3试剂：⑴M-缓冲液⑵6mmol/L磷酸缓冲液⑶1%TritonX-100⑷0.2%考马斯亮蓝R250植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第3页三试验仪器、材料和试剂3试剂：⑸3%戊二醛⑹50%、70%、95%乙醇

⑺叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶

植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第4页四试验方法(Ⅰ)1洋葱鳞茎内表皮（1cm大小）→50ml烧杯（磷酸缓冲液）→下沉2吸去缓冲液→加1%TritonX-10020~30分钟3吸去TritonX-100→M-缓冲液洗3次/10分钟43%戊二醛固定0.5-1小时植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第5页四试验方法5PH6.8磷酸缓冲液洗3次/10分钟60.2%考马斯亮蓝R250染色20~30分钟7蒸馏水洗1-2次→装片→观察8制作永久切片植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第6页四试验方法(Ⅱ)取洋葱内皮1cm左右

置于含PBS液载玻片上

湿润后，吸去PBS

加2滴1%TritonX-100/M-缓冲液，5min

吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB溶液，固定30min

加PBS洗2次，共3min

加0.2%考马斯亮蓝R250染色30min

用PBS洗2次，共2min，吸干

镜检并绘图细胞骨架标本制作过程植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第7页五作业1绘出植物细胞骨架微丝结构图。2分析和叙述在光学显微镜下观察到细胞骨架形态特征。3为何用TritonX-100缓冲液处理材料？植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第8页植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第9页植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第10页植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第11页植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第12页植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第13页植物细胞骨架形态特征细胞骨架观察结果光学显微镜下洋葱内表皮细胞轮廓清楚可见（如图），细胞壁及其分界显著。10×10倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等蓝色纤维、团块形成网状结构。同一细胞内各处骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻细胞密集程度基本一致，但有少数细胞有较大不一样。植物细胞骨架的光学显微镜观察专家讲座第14页植物细胞骨架形态特征细胞骨架观察结果10×40倍镜下可清楚观察到蓝色网状结构确实由线性纤维交织成，纤维间结合点稍膨大。细胞边缘骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向纤维形成细胞质膜轮廓，与细胞内部纤维经过纵向纤维相连。相邻细胞有