医学媒介生物标本采集、制作及保存规程

医学媒介生物标本采集、制作及保存规程(规范性附录)蚤类标本采集、制作B.1.1蚤类标本采集、制作时工作人员应做好个人防护，防止被叮咬感染。本应妥善保存处理。B.2标本采集B.2.1宿主动物体外寄生量采集采集量类时工作人员应做好个人防护。采用捕鼠笼捕提活鼠或其他方法(如；鼠夹、挖洞、枪击等)捕鼠，每只鼠装人一个白色鼠袋，扎紧装口，带回实验室，用乙醚/三氯甲烷麻醉后，在白搪瓷盘/盆中拣蚤，然后对仍停留在毛中的量类用毛刷或篦子仔组梳篦鼠体检量，均装入盛有75%酒精的玻瓶内，做好记录和标记，留作标本制作。其他宿主动物体外寄生蚤可参照上述方法采集。B.2.2宿主动物洞干蚤采集用探蚤棒探鼠洞，上下左右转动几次后慢慢拉出，边拉边用拣蚤镊将探蚤棒上的蚤类拣下，装入盛有75%酒精的玻瓶内，做好记录和标记，带回实验室进行标本制作，B.2.3宿主动物巢穴量采集B.2.3.1集量器采集法挖掘宿主动物巢穴，迅速将全部巢穴内容物及离内浮土一起装入白布装，做好标记，带回实验室将窝巢内容物倒人集蚤器进行检集，装入盛有75%酒精的玻瓶内，做好记录和标记，留作标本制作。B.2.3.2清水漂浮法将窝巢内容物倒入白塘瓷盆内加水搅拌，待水面静止澄清后，检查水面上的量类，装入盛有75%酒精的玻瓶内，做好记录和标记，带同实验室制作标本。B.2.3.3直接检查法将窝巢内容物逐次倒人白搪瓷盆内直接进行检集。采集到的蚤装入盛有75%酒精的玻瓶内，做好记录和标记，带回实验室制作标本。B.2.4室内游离蚤采集在室内布放粘蚤纸沾捕游离蚤，将沾捕到的蚤类用毛笔沾取酒精自粘蚤纸上取下，放入盛有75%酒精的玻瓶内，做好记录和标记，带回实验室制作标本。B.2.5填写记录表每次采集结束后均应规范填写蚤类监测采集记录表，按表内项目逐项填写，特别是生态学资料保证内容全面，准确无误。记录表见附录K。B.3标本制作B.3.1选取标本将采集的标本先做初步鉴定，然后用酒精浸泡或选取有代表性的虫体完整的益制成玻片标本进行保存。B.3.2浸泡标本制作将采集的蚤类直接放入盛有75%酒精甘油的小玻瓶内密封，加贴标签或用铅笔书写好标签放入瓶内后保存。B.3.3玻片标本制作a)腐蚀：将蚤标本故入10%氢氧化钾或氢氧化钠溶液浸泡腐蚀，在室温下进行腐蚀1d~3d。见孟体颜色由深棕色变为淡棕色，呈半透明时即可，如遇有的蚤刚吸过血，腹内留有血块，则可在解剖镜下用解剖针或昆虫针自蚤的第2,3腹节处刺破，加快腐蚀腹内残留物。b)中和；将腐蚀好的蚤用燕馏水冲洗2次，故入1%冰乙酸溶液中，中和作用时间约2h。然后再用蒸馏水浸泡1h。c)脱水；将蚤移入酒精中逐级浸泡脱水，酒精浓度分别为50%、70%,95%和无水酒精，时间各为30min~2h。再移入石炭酸与二甲苯等量溶液中浸泡30min~1h。d)透明：脱水后的跳蚤移入二甲苯透明1h~24h,再移至丁香油中1h~24h,使其进一步透明软化。e)封片：将透明好的蚤标本放在载玻片中央，在解剖镜下进行整姿。在孟体上滴1小滴加拿大树胶，将各足用小镊子拉直，摆正体位，使跳蚤的头向左、腿向下。每张玻片封藏1只或同种的1雌1雄，轻轻盖上盖玻片，用手指轻压盖玻片底边，然后将加拿大树胶由盖玻片上边的空隙滴加渗人，避免蚤移动和产生气泡。f)干燥：将封固好的标本置于40℃~50℃干燥箱内烘干3d~4d。g)封边；在盖玻片四边用指甲油封闭。加贴标签，放入玻片标本盒内保存。B.3.4蚤种鉴定在解剖显微镜下对量类进行量种鉴定，计数各量种数量。对非常见量种请专家指导鉴定。B.3.5填写标签浸泡标本应用铅笔书写标签放入盛量的玻瓶内或贴于瓶外壁上。玻片标本标签与载玻片等宽，呈正方形，分为左右2张，左边填写蚤种中文名、拉丁学名、性别、鉴定人，右边自上而下填写宿主名、采集人，采集地点和采集时间。B.3.6填写记录表每次标本制作结束后均应填写规范的记录表，做到内容全面，准确无误。8(规范性附录)蚊类标本采集、制作在蚊媒疾病疫区采集蚊类标本时，工作人员应做好个人防护防止被叮咬感染，但禁止吸烟，涂驱蚊剂。C.2标本采集C.2.1成较标本采集C.2.1.1诱蚊灯诱捕法采用诱蚊灯诱捕法在室外进行诱捕采集，将采集的蚊类毒死后计数，做好记录和标记，然后带回实验室进行标本制作。C.2.1.2昆虫采集网网捕法对一些使用诱蚊笼诱捕法无法诱捕的蚊类和不适合使用的场所采用昆虫采集网网捕法进行采集，将采集的蚊类毒死后做好记录和标记，带回实验室进行标本制作。C.2.1.3吸蚊枪吸捕法选择国境口岸室内有成蚊停息活动的室内场所采用吸蚊枪吸捕成蚊，毒死后做好记录和标记，带回实验室制作标本。C.2.1.4入帐诱法在蚊类室外孳生栖息场所采用入帐诱法进行采集，用手持电动吸蚊器捕成蚊，用毒瓶内毒杀，将采集的蚊类毒死后做好记录和标记·带回实验室进行标本制作。C.2.2较蚴及蛹标本采集在蚊蚴孳生场所用水勺捞取或用吸管吸取蚊蚴和蚊蛹，装入水桶或瓶内带回实验室进行饲养或将蚊蚴用50℃~60℃的热水杀死，使虫体伸直然后放入盛有75%酒精瓶内，做好记录和标记，带回实验室制作标本。C.2.3填写记录表每次采集结束后均应规范填写蚊类监测采集记录表，按表内项目逐项填写，特别是生态学资料保证内容全面，准确无误。记录表见附录KC.3标本制作C.3.1选取标本将采集或饲养的数类进行简要分类计数，选取体形完整无损有代表性的敏类制作标本。C.3.2针插标本制作a)准备：用左手拇指和食指轻轻夹住软木块两侧，平放于玻璃桌面上，用右手拇指和食指捏住或用止血钳夹住微针中部，微针针尖自软木块上面中间中右四分之一处垂直桶透，然后将软木块翻转过来.保持微针尾部与玻璃面垂直，轻压软木块，使微针针尖部分伸出，微针末端与软木块持平；选取3号昆虫针做主针，自软木块另一端四分之一处与微针反方向垂直穿透，直至主针末端。b)插针；将选好的成蚊标本放入平皿内，用昆虫针将其尽量拨至腹面向上，右手拇指和食指捏住软木块主针端两侧，保排微针针尖对准蚊体六足中间轻轻垂直插入，针尖不能穿透蚊体中胸背板。b)中和：将标本移入加有1滴～2滴乙酸的酸性水中，中和残留的氢氧化钾/氢氧化钠，然后逐次用蒸馏水浸泡清洗2遍～3遍。c)脱水：移入75%洒精脱水30min,再入85%、95%、100%酒精中各20min,进行脱水。d)封片：将脱水后的标本取出放在载玻片中间部位，背面朝上，头部朝前，加1滴树胶酚，摆正标本。待标本稍干固定后再加适量树胶酚完全覆盖标本稍干后将盖玻片放在上面轻轻压平标本。e)干燥：制好的玻片标本放阴凉处自然干燥或用60℃~70℃烤箱烤干，f)封边：在盖玻片四边用指甲油封闭。与所剩余的标本编为同一个编号，贴上标签，放入玻片标本盒内保存。D.3.3.2蝇蚴玻片标本制作一龄、二龄幼虫经处理后把后端折过来后气门朝上，采用整体封片制成玻片标本。三龄幼虫可切头、尾，躯三部分，躯包括1～7腹节沿背部中央纵线剪开排平后，与头、尾封在同一玻片上，其他制作方法、程序同上。D.3.4浸泡标本制作对解剖的尾器无需制成玻片的和蝇蚴标本可直接放人盛有75%酒精甘油的小玻瓶内密封，加贴标签或用铅笔书写好标签放入瓶内后保存。D.3.5蝇种鉴定在解剖显微镜下对采获的蝇类进行蝇种鉴定，计数各蝇种数量，对非常见蝇种请专家指导鉴定。D.3.6填写标签鉴定后将种名(包括拉丁名称)、性别、采集地点、采集日期填入标签。针插标本标签插在标本下方用三级板逐一固定不同高度；玻片标本标签与载玻片等宽，呈正方形，将标签贴在载玻片的左端。D.3.7填写记录表每次标本制作结束后均应填写规范的记录表，做到内容全面，准确无误。厚度高的蜱周围放一些碎小、洁净的盖玻片。再用弯头镊子放上盖玻片，放时应先使盖玻片部分接触液面再轻轻将盖玻片放下，以免产生气泡和蜱移位。e)干燥：放入45℃烘箱烘干5d~7d。f)封边：在盖玻片四周用无色指甲油封闭。载玻片加贴标签，放入玻片标本盒内鉴定保存。E.3.2.2幼蜱和若蜱a)清洗：取出保存在70%酒精里的标本，放在小平皿内，用燕馏水清洗30min,b)脱水：依次经过50%,75%、85%,95%酒精溶液中各浸泡脱水60min,30min,20min,10min。e)透明；移入二甲苯溶液中浸泡30min,可用解剖针在腹部扎数个小孔使其透明充分。d)封片；将洗净的载玻片放在白纸上，白纸画有载玻片大小的方框及其两条对角线，载玻片正好放在方框内。将4滴~5滴霍氏液滴于载玻片中心，稍稍摊平。用解剖针取出一只标本，置于载玻片中心。在解剖镜下，调整蜱位置，使其头朝下，各足伸展。厚度高的蜱周围放一些碎小、洁净的盖玻片。再用弯头镊子放上盖玻片，放时应先使盖玻片部分接触液而再轻轻将盖玻片放下，以免产生气泡和蜱移位。e)干燥：放入45℃烘箱烘干5d~7d。f)封边：在盖玻片四周用无色指甲油封闭。载玻片加贴标签，放入玻片标本盒内鉴定保存。E.3.2.3胶粘标本制作a)准备：把白色纸卡剪成底边长0.4em、高为1cm的等腰三角形。取一枚3号～4号的昆虫针穿过三角卡底端中部，用三级台固定至昆虫针中上三分之一处。另取一枚昆虫针针尖沾一点乳胶·点在三角卡尖端上。b)制作；将活蜱放入试管，投入乙醚棉球麻醉毒死。倒入平皿内，使蜱背而朝上，用昆虫针针尖把蜱体右侧面粘起，放在点有胶液的三角卡尖端，并迅速向后撤针，以免把蜱带起。粘好的标本如需调整，可用昆虫针针尖拨挑。c)干燥：在昆虫针的中三分之一和下三分之一处插上标签，放阴凉处自然干燥后插入标本盒内。E.3.2.4浸泡标本将采集到的蜱放入装有70℃~80℃的热水的小平皿中杀死，使其保持肢体伸展的状态。将蜱放入指形管内，用铅笔书写好标签放入瓶内。用70%酒精加至指形管的三分之二处，并滴加1%甘油2滴。指形管口封堵上一小团脱脂棉花。将指形管放置于磨口玻璃瓶中，灌满70%酒精，滴加1%甘油适量，密闭保存，定期更换保存彼。E.3.3蜱种鉴定在解剖显微镜下对采获的蜱类进行蜱种鉴定，计数各蜱种数量，对非常见蜱种请专家指导鉴定。E.3.4填写标签鉴定后将种名(包括拉丁名称)、性别、采集地点、采集日期填入标签。胶粘标本插在标本下方用三级板逐一固定不同高度；玻片标本标签与载玻片等宽，呈正方形，将标签贴在载玻片的左端。E.3.5填写记录表每次标本制作结束后均应填写规范的记录表，做到内容全面，准确无误。(规范性附录)螨类标本采集、制作F.1标本采集F.1.1恙螨标本采集F.1.1.1动物体表采集用捕鼠笼捕捉活鼠，装入白色鼠袋，每装1只，带回实验室用乙醚/三氯甲烷麻醉杀死鼠，自耳部深处剪下鼠耳，放入平皿内，平皿置于铺有防蝇油纱布的白搪瓷盘内，将鼠耳外翻，在解剖镜下检查恙螨幼虫，发现螨类即用湿毛笔尖沾取螨类放入盛有75%酒精瓶内计数，同时检查鼠的肛门、乳房、生殖器腹锦鸡后退，尾椎骨上方等部位。鼠体背毛中的恙螨可将鼠四足固定于木板上，背部向上，剪去背毛，放置30min~60min,恙螨幼虫自行爬出即可采获。做好记录和标记，然后带回实验室进行标本制作。其他动物可参照上述方法采集，对耳壳内寄生的螨类用强光照射采集。采用白色绒布制作的布旗在室外草丛中摆动或草上慢慢拖动进行采集，发现螨类即用湿毛笔尖沾取螨类放入盛有75%酒精瓶内计数，做好记录和标记，然后带回实验室进行标本制作。F.1,1.3动物诱集法将小白鼠或大白鼠或野外捕获的活鼠装入鼠笼，置于野外草丛中24h～48h,取回检查，方法同选择野外动物诱集阳性的地方，铲取地面浅层土壤，置于白搪瓷盆内，加水搅拌，待水面静止澄清后将漂浮物捞出置于解剖镜下检查采集恙螨。F.1.2革螨标本采集F.1.2.1动物体表采集法用捕鼠笼捕捉活鼠，装入白色鼠袋，每袋1只，带回实验室用乙醚/三氯甲烷麻醉杀死鼠，在白搪瓷盘内检查鼠装内而的革蜗，然后检查鼠体，发现革螨即用湿毛笔尖沾取放入盛有75%酒精的平Ⅲ内，再将鼠放在白掂瓷盆内，用篦子反复梳篦鼠毛，用放大镜检查采集梳下的革螨.采集结束后加热酒精至70℃,杀死后放入盛有75%酒精的小玻瓶内，做好记录和标记，然后带回实验室进行标本制作，其他动物可参照上述方法采集。F.1.2.2动物离巢内革螨采焦法(电热集螨器采集法)挖掘鼠和其他动物的窝巢，将巢内全部材料及巢内浮土一并装入白布袋内，带回实验室用电热集螨器加热4h~10h,采集革螨。其他同F.1.2.1。F.1.3填写记录表每次采集结束后均应规范填写螨类监测采集记录表，按表内项目逐项填写，特别是生态学资料保证内容全面，准确无误。记录表见附录K。F,2标本制作F.2.1选取标本将采集的螨类进行简要分类计数，选取体形完整无损有代表性的螨类制作标本。活的饱吸血的螨成虫应先放置在试管中饲养，等其将胃内容物消化后用乙醚麻醉致死再制作标本。b)割翅：新鲜标本用70%酒精浸泡约1h,干标本用70%酒精浸泡6h以上，在解剖显微镜下用解剖针将成虫的一翅割掉，然后把割掉的翅放入已准备好的放一小滴树胶酚的载玻片上，并将翅展平。c)腐蚀：成虫割翅后，用蒸馏水洗5次，每次浸泡5min,面后将其放入10%氢氧化钾溶液中腐蚀，解剖显微镜下雌，维虫生殖器各部清晰可见即可。d)清洗；将腐蚀好的成虫用蒸馏水清洗5次，每次浸泡15min。e)脱水：将清洗好的成虫依次用50%,70%、80%、90%、95%(或无水)酒精脱水各15min。f)封片：在上述放翅的在玻片上，在翅的附近放一滴树胶酚，然后将脱去酒精的成虫故到胶上，用解剖针将虫体分成头、胸、腹三部分，并将各部特征展示清楚。遇到可疑的雄虫生殖器.需将生殖腹板的侧面和端而描绘成图，方可以腹面观形式出现。待制成标本1d~2d后稍干，使标本固定后再加适量胶并加盖玻片。g)干燥：将制好的标本放阴凉处自然干燥或用50℃~60℃烘箱烘干。h)封边：在盖玻片四边用指甲油封闭。与所孵出的蛹皮标本编为同一个编号，贴上标签，放入玻片标本盒内保存，1.2.2.2幼虫玻片标本制作a)脱水：将成熟幼虫从75%酒精中用镊子取出，放在一张玻片上，滴上2滴95%酒精脱水。b)封片：在解剖镜下用解剖针割下头部和尾部。然后将尾部和胸腹部，放入滴有树胶酚的载玻片上·摆平整并把尾部特征充分暴露。在上述玻片的酒精中，将幼虫头部从侧面剖开，去掉头内的肌肉，然后将头壳用解剖针挑入上述玻片的树胶酚内，将各部特征展开，直到看清各部特征为止。待上述制成的玻片标本树胶酚稍干后，再盖上盖玻片。c)干燥；制好的玻片标本放阴凉处自然干燥或用60℃~70℃烘箱烘