发酵工程实验报告

发酵工程试验报告年级 专业姓名 学号试验题目 微生物工程试验〔一组〕一、试验目的娴熟把握无菌操作技术，了解生物发酵过程中种子的扩培过程；把握小型发酵罐管路消毒、空消、实消、菌种培育等技术；学习把握小型发酵罐接种、取样操作系统；学习使用糖度仪，把握血球计数板法；的相关曲线。二、试验原理pH样测定，包括对菌体进展计数、测定不同时期的干重以及糖度的变化。80℃下烘干肯定时间后的10-20%。1-5105℃或100℃下烘干，或承受红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空枯燥，枯燥后称重。血球计数板法，血球计数板是一种有特别构造刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中心有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台0.1mm0.1mm4001微生物生长曲线，是以微生物数量(活细菌个数或细菌重量)为纵坐标，培育时间为横坐标画得的曲线。一般说，微生物(细菌)重量的变化比个数的段(对数生长阶段)、生长率下降阶段及内源呼吸阶段。三、试验材料及器材菌种酵母菌〔saccharomyces〕药品蛋白胨、葡萄糖NH4Cl、酵母浸粉、蒸馏水、种子液、无菌蒸馏水、泡敌培育基仪器设备1624三角烧瓶；小试管；酒精棉球假设干；工业用酒精一瓶；离心机1台；振613玻璃棒12；50ml6；500ml6；100ml6666612；4四、试验步骤(一)菌种的扩培菌种的活化〔已预备〕〔1〕180rpm，28℃，48h。种子扩培100ml〔作一、二级种子瓶，115℃，30min3180rpm，30℃，24h。5%的接种量接种于二级种子液中〔10，180rpm，28℃，24h。500ml，灭菌，待用。枪头〔大、小都要〕(二)发酵罐的构造与灭菌和酵母菌上罐发酵空气过滤器及管路的消毒：蒸汽经空气过滤器及以后的空气管道进入发0.10～0.11MPa〔0.12MPa，。到时间后，关闭蒸汽阀。将空气经流量计进入空气过滤器〔0.4VVM20min。〔微开。翻开上部蒸汽阀，使蒸汽通过进气管进入发酵罐；对发酵罐进展空消。0.11～0.12MPa80℃以下时，才能排尽发酵罐内的冷凝水，随即关闭冷凝水阀。调整进气管和排气口，使罐压保持在0.03～0.05MPa2.5L1.5ml〔0.03~0.035%。拧紧加料口螺母。实消〔必需将安全防护罩装上〕150rpm罐，连续升温。95～100上部的蒸汽阀及排气阀，使压力保持在0.1～0.11MPa20min10min当温度降至发酵80℃后，慢速〔150rpm〕开启搅拌机，加速降温。0.03~0.05MPa28℃。取样方法：翻开排气阀，用蒸汽消毒20～30min。关闭蒸汽阀，放出少量料液。关闭阀门，再用蒸汽消毒。接种、取样在接种口四周围上酒精棉球，点燃，无菌操作接入种子液。0.03~0.05MPa，28150rpm。48h6出料发酵罐的清洗(三)酵母生长代谢中生物基质的测定生长曲线的测定〔4000r/min,10min〕收集菌weight，CDW〕与时间的曲线图。血球计数板计数。绘制细胞个数与时间的曲线图。基质代谢与菌体生长的关系〔4000r/min,10min〕后，取0.5ml上清液用糖度计测残糖。绘制糖消耗曲线，即糖浓度对时间的变化曲线。五、试验数据处理(一)本组〔一组〕试验数据组别 0.0h1糖度值15.5h24.1h39.2h48.5h1 2.21.90.90.40.32 2.11.81.20.50.53 2.21.51.00.60.24 2.21.61.10.80.3平均值 2.1751.71.050.5750.325表2 酵母菌干重〔g/ml〕组别0.0h15.5h24.1h39.2h48.5h10.0030.0210.0310.0260.02620.0030.0170.0170.0250.02430.0040.0190.0400.0240.02440.0020.0300.0290.0250.024平均值0.0030.021750.0290.0250.02453血球计数板计数〔个〕组别0.0h15.5h24.1h 39.2h48.5h15.3×1062.0×1077.8×107 1.2×1088.5×10726.1×1062.8×1075.2×107 9.5×1079.0×10735.9×1062.2×1077.3×107 7.0×1078.5×10745.5×1062.6×1076.5×107 8.0×1078.0×10755.7×1062.4×1076.7×107 9.1×1078.5×107平均值5.3×1062.0×1077.8×107 1.2×1088.5×107(二比照组〔二组〕试验数据表1糖度测量12

0.0h1.9%2.1%

14.5h1.20%1.8%

22.5h1.0%1.2%

37.6h0.8%0.8%

46.3h0.5%0.6%32.0%1.5%0.9%0.7%0.2%42.0%1.6%0.9%0.9%0.3%平均值2.0%1.2%1.0%0.8%0.4%表1酵母菌干重〔g/ml〕次数\时间0.0h14.5h22.5h37.6h46.3h11x10-31.9x10-24.3x10-29.4x10-28.1x10-225x10-31.6x10-24.2x10-29.2x10-28.5x10-233x10-32.3x10-21.9x10-21.3x10-11.14x10-1平均值3x10-31.93x10-2 3.47x10-2 1.05x10-13血球计数板计数〔个〕9.33x10-2次数\时间0.0h14.5h22.5h37.6h46.3h116334106214284352213281069190553431447210371997675平均值1737810561776.67548总数〔个/ml〕4.25x1069.45x1072.64x1084.442x1081.37x108发酵过程糖度含量3%发酵过程糖度含量3%3%2%2%一组二组1%1%0%0h14.5h22.5h37.6h46.3h1%图1干重变化干重变化0.040.030.02二组一组0.0100h14.5h22.5h37.6h46.3h0.01图2测酵母菌干重所得生长曲线血球计数板变化曲线血球计数板变化曲线98.587.5二组一组76.560h14.5h22.5h37.6h46.3h图3血球计数板计数变化曲线(四本组数据变化曲线糖度值变化曲线糖度值变化曲线2.52% 1.5度糖10.500510152025时间/h30354045504发酵液糖度值变化曲线酵母菌干重变化曲线酵母菌干重变化曲线0.0300.025/0.0200.0150.0100.