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文档简介

免疫组织化学实验1，免疫组织化学定义（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。2，原理

用标记的抗体（或抗原）对细胞或组织内的相应的抗原（或抗体）进行定性或定量检测，经组织化学的成色反应后用显微镜观察，进而检测出细胞或组织内与其结合的特异性抗原（或抗体）的表达状况。3.背景知识介绍抗原：能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应免疫应答产物(抗体或抗原受体)在体内外发生特异性结合的物质，多为蛋白质。抗体：能与相应抗原(表位)特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。抗原抗体反应：抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应4.IHC特点高度特异性：可以达到单个氨基酸水平敏感性：最大限度保存组织或细胞内待检物质的抗原性或增敏实验方法统一：一通百通形态、机能和代谢密切结合：

全方位了解抗原（或抗体）定性、定量和定位5，常用标记物--显色剂：荧光素：FITC（fluorescein

isothiocyanate，异硫氰酸荧光素）绿色RB200（rho-damine，四乙基罗丹明）明亮橙色TRITC(Tetramethyl

Rhodamine

Isothiocyanate，四甲基异硫氰酸罗丹明)橙红色酶：辣根过氧化物酶；碱性磷酸酶金属离子：铁蛋白金等：免疫电镜同位素：6.免疫酶染色方法：酶标抗体法通过共价键将酶结合在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，以供光镜和电镜观察。

–优点：切片能长期保存、反复观察，适于镜下半定量分析。

–缺点：酶与抗体形成的共价键，可损害抗体和酶的活性；易产生非特异染色。直接法：将酶直接标记在一抗上，然后直接与相应抗原特异地结合。形成抗原-抗体-酶复合物，最后用底物显色剂显色。间接法：将酶标记在二抗上，先将一抗与相应的抗原结合，形成抗原抗体复合物，再用二抗(酶标抗体)与复合物中的特异抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，最后用底物显色剂显色。三种酶：HRP（辣根过氧化物酶）；ALP（碱性磷酸酶）；

GOD（葡萄糖氧

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