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文档简介

实验十二细胞融合实验细胞融合（cellfusion）又称细胞杂交（cellhybridization），是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象。此杂交细胞具有很强的生命力，增殖旺盛。细胞融合术是细胞遗传学、细胞免疫学、病毒学、肿瘤学等研究的一重要手段，也是制备单克隆细胞株的重要技术。一，细胞融合概念在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，最后打通两质膜，形成双核或多核细胞（此时称同核体或异核体）。二、实验原理病毒是最早采用的融合剂。常用于诱导动物细胞融合的病毒有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等，其中仙台病毒最常用。用作融合剂的病毒必须事先用灭活，使病毒的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。优点：融合率较高，对各种动物细胞都适宜，且仙台病毒能在鸡胚中大量繁殖，容易培养；缺点：仙台病毒不稳定，在保存过程中融合活性会降低，并且制备过程比较烦琐。此外，病毒引进细胞后，可能会对细胞的生命活动产生干扰。病毒诱导融合PEG是乙二醇的多聚化合物，可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，诱导产生细胞融合。聚乙二醇使用起来很方便，诱导细胞融合的频率比较高。聚乙二醇PEG诱导融合

20世纪80年代建立起来的电融合技术，是将两种细胞的混合液置于低压交流电场中，使细胞聚集成串珠状，然后施加高压电脉冲，以促使细胞融合。紧密排列的细胞，当受到电击时，这个区域就会被击穿，产生脂双层膜孔，导致细胞之间的细胞质连通，进而发生细胞融合。电融合技术有许多优点，如诱导细胞融合的频率高，对细胞无毒害作用，操作简便，可重复性好。

电融合

器具:显微镜、离心机、离心管、细滴管、载玻片、盖片2.试剂:

（由老师提供）50%聚乙二醇(PEG)：GKN液：

NaCl8g，KCl0.4g，Na2HPO4.2H2O1.77g，

NaH2PO4.2H2O0.69g，葡萄糖2g，酚红

0.01g，溶于1000ml重蒸水中。0.85%NaCl液：0.85gNaCl溶于100ml重蒸水中。二、实验用品三、实验内容及方法1.

实验时取稀释好的鸭血1ml于离心管中，加入3ml

0.85%NaCl液，混匀平衡后以1200rpm

离心5min。2.倒去上清液。再加入3ml0.85%NaCl液重复洗两次，最后一次离心10min，弃上清。3.在沉降血球中加入1mlGKN液，混匀，使之成为细胞悬。4.在细胞悬液中加入6-8滴（约0.5ml）50%的PEG液，迅速混匀，常温下作用2-3min；5.滴片，盖上盖玻片，普通显微镜镜检。在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸭红细胞膜融合在一起，形成一个异核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠的红细胞。五、融合率的计算在高倍镜下（40×10）随机计数200个细胞(包括融合的与未融合的细胞)，以融合细胞(含两个或两个以上的细胞核的

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