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第第页土壤β-木糖苷酶（Solid-β-xylosidase,S-β-XYS）测定试剂盒说明书土壤β木糖苷酶（Solidβxylosidase,SβXYS）测定试剂盒说明书微量法100T/48S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。测定意义：β木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。测定原理：SβXYS催化对硝基苯酚βD木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm光吸收增加速率，可计算SβXYS活性。自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体1mL×1瓶，4℃避光保存。试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。粗酶液提取：约0.1g鲜土或风干土样，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，室温振荡提取30min，然后10000g，4℃，离心10min，取上清待测。测定操作表：1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至405nm。2、操作表对照管测定管样本（μL）4040试剂一（μL）10试剂二（μL）8070混匀，45℃水浴20min试剂三（μL）8080混匀，静置5min，405nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管A对照管。每个测定管设一个对照管。β木糖苷酶活性计算公式：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值ΔA。酶活定义：每克土样每天催化产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。β木糖苷酶活性（μmol/d/g土样）=(ΔA0.0011)÷13.226×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=16.33×(ΔA0.0011)÷WV样总：加入提取液体积，1mL；V反总：反应总体积，0.12mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min=1/72d；b.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值ΔA酶活定义：每克土样每天催化产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。β木糖苷酶活性（μmol/d/g土样）=(ΔA0.0011)÷6.613×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=32.66×(ΔA0.0011)÷WV样总：加入提取液体积，1mL；V反总：反应总体积，0.12mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min=1/72

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