DB32T 4756-2024家兔冷冻精液生产技术规程

ICS65.020.30江苏省地方标准DB32/T4756—2024家兔冷冻精液生产技术规程Technicalcodeofpraticefortheproductionoffrozensemeninrabbits2024-04-26发布2024-05-26实施江苏省市场监督管理局发发出布版Ⅰ前言 Ⅲ 2规范性引用文件 3术语和定义 4精液采集 5冷冻稀释液制备 6制作过程 7质量评定 附录A（资料性）家兔冷冻精液稀释液配制方法 附录B（资料性）家兔冷冻精液记录表 参考文献 Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省畜牧业标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院。1家兔冷冻精液生产技术规程本文件规定了家兔冷冻精液的精液采集、冷冻稀释液制备、制作过程、质量评定及包装、贮存和运输。本文件适用于家兔的冷冻精液生产。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5458液氮生物容器NY/T3185家兔人工授精技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4精液采集4.1采精技术家兔精液采集方法应符合NY/T3185的规定。4.2新鲜精液质量要求色泽呈乳白色或灰白色，精子活力应不小于80%，精子密度应不小于1.5×108个/mL。5冷冻稀释液制备配制方法参照附录A，或购买商品冷冻稀释液。6制作过程6.1稀释方法采集好兔精液，达到4.2要求后，应快速放入冰箱，在3℃~5℃冷藏90min。然后将等温等量的精液冷冻稀释液缓慢倒入精液中，宜边加边轻轻摇晃，使冷冻保存稀释液与兔精液充分混合。6.2分装和标识用于分装精液的是微型细管，管内应留一定的空隙，两端封口应严密。细管外壁应清楚标明生产日2期、生产站名、种兔品种和个体号。应置于3℃~5℃平衡45min。6.4预冷冻冷冻用具应洁净后消毒。平衡后的细管冻精立即转移至铜网或细管架上预冷冻，应在液氮液面上方5cm处预冷冻10min后浸入液氮保存。6.5生产记录家兔冷冻精液生产记录表参照附录B的表B.1。7质量评定7.1精液复苏将细管冻精直接置于37°C水浴中解冻10s，适当摇动，使冻精融化。7.2质量要求精液质量检测应具备显微镜，血球计数板，电子天平等常用仪器。家兔细管冷冻精液质量要求应符合表1的规定。表1家兔细管冷冻精液质量要求项目指标外观细管无裂痕，两端封口严密，标志应清晰剂型/mL剂量/mL0.20±0.01精子活力/%≥35前进运动精子数/（104个/剂）≥500精子畸形率/%≤20菌落数/（个/剂）≤6007.3判定规则正常生产时，每三个月检验一次。每批随机抽取三份用于检验，结果以抽检三份样品的平均值为准。取样完成后应立即填写样品登记单。登记表参照表B.2进行。对照表1要求，判定每批产品是否合格。8包装、贮存和运输冻精应使用专用塑料管分装，并由灭菌纱布袋包装。3DB32/T4756—2024每只公兔的冻精应单独贮存，应由专人负责及时补充液氮，保证冻精浸没在液氮中。贮存冻精的低温容器应符合GB/T5458的规定，且每年至少消洗一次并更换新鲜液氮。冻精运输过程中应由专人负责，保证冻精始终浸没在液氮中。贮存容器不应横倒、碰撞和强烈振动。4DB32/T4756—2024（资料性）家兔冷冻精液稀释液配制方法A.1稀释液配方三羟甲基氨基甲烷3.03g、柠檬酸1.69g、葡萄糖0.85g、海藻糖2.05g、L⁃谷氨酸0.74g，二甲基亚砜A.2配制方法配制方法：准确称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、柠檬酸1.69g、葡萄糖0.85g、海藻糖2.05g、L⁃谷氨酸0.74g，放入100mL容量瓶内，加入蒸馏水50mL，溶解后定容至100mL。然后加入二甲基亚砜16mL、甘油3mL，用磁力搅拌器充分搅拌均匀后备用。5（资料性）家兔冷冻精液记录表家兔冷冻精液生产记录表的样式见表B.1，家兔冷冻精液取样登记表的样式见表B.2。表B.1家兔冷冻精液生产记录表生产日期生产地点公兔品种公兔编号液氮罐编号操作人表B.2家兔冷冻精液取样登记表取样日期取样地点公兔品种公兔编号样品生产日期取样人6DB32/T4756—2024［1］江苏省农业科学院.一种兔精液冷冻保存稀释液和制备方法、兔精液冷冻保存方法和应用：ZL202111510937.X[P]［2］MicheleDiIorio，MariaAntoniettaColonna，MarsiaMiranda，etal.Initialcoolingtimebeforefreezingaffe