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第第页土壤酸性转化酶（Solid—Acidinvertase,S—AI）试剂盒说明书土壤酸性转化酶（SolidAcidinvertase,SAI）试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前务必取23个预期差别较大的样本做猜测定测定意义：SAI在pH为4.5～5.0（酸性）条件下催化蔗糖不行逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一、测定原理：SAI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5—二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光汲取，在肯定范围内510nm光汲取加添速率与AI活性成正比。自备用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。试剂构成和配制：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保管；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保管；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保管；试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保管；样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30～50目筛。测定步骤和加样表：试剂名称（μL）测定管对照管风干土样（g）0.050.05试剂一400试剂二400混匀，37℃准确水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变），10000g25℃离心10min，取上清液上清液200200试剂三100100混匀，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，510nm处，记录各管吸光值A，假如吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定A对照。SAI活性计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y=0.0016x0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。单位的定义：每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个SAI活力单位。SAI活力（mg/d/g土样）＝[（ΔA+0.001）÷0.0016×V反总÷W÷T÷1000=240×（ΔA+0.001）V反总：反应体系总体积：0.4mL；T：反应时间，1/48d；W：样本质量，0.05g；1mg=1000μg。b.用96孔板测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y=0.0008x0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。单位的定义：每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个SAI活力单位。SAI活力（mg/d/g土样）＝[（ΔA+0.001）÷0.0008×V反总÷W÷T÷1000=480×（ΔA+0.001

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