乙肝丙肝核酸检测的新平台临床

乙肝丙肝核酸检测的新平台

COBAS

AmpliPrep/COBASTaqMan

全自动荧光定量分子诊断系统

——顾剑罗氏分子诊断

5/8/20241乙肝丙肝核酸检测的新平台临床自动化程度

199219961998200120032006MWPCOBASAMPLICOR

COBASAMPLIPREP

COBASAMPLICORMONITOR罗氏分子诊断标准化自动化重复性COBASTAQMAN48COBAS

TAQMAN96一直以来，罗氏分子诊断对临床核酸检测市场提供完善可靠和创新性的产品及解决方案5/8/20242乙肝丙肝核酸检测的新平台临床目前乙肝和丙肝临床治疗过程中遇到的主要问题治疗终点无法准确判定有些病人经一段时间治疗后DNA/RNA检测结果忽阴忽阳，但临床症状依然明显不能及时预测耐药（病毒学突破）核苷（酸）类似物治疗后病毒DNA/RNA快速下降至检测限以下，不久却发现病毒出现反跳疗效的准确监测？？？治疗后12或24周病毒DNA/RNA下降幅度直接决定预后问题的根源在哪里？5/8/20243乙肝丙肝核酸检测的新平台临床内容HBV核酸检测的现状与需要HCV核酸检测的现状与需要罗氏的CAP/CTM能带来什么益处总结5/8/20244乙肝丙肝核酸检测的新平台临床HBVDNA监测在抗病毒治疗中的临床应用HBVDNA是监测抗病毒治疗响应和时间的关键标志物HBV治疗的路线图理念，为HBVDNA监测用于临床实践提供了指导对用药耐药性的监测（拉米夫定－YMDD，…）肝移植HBV复发风险的降低（术前，术后）……5/8/20245乙肝丙肝核酸检测的新平台临床HBVDNA监测的临床应用HBV治疗路线图

KeeffeE.ClinGastroHepatology2007;5:890-897.侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治疗方案优化，中国肝脏病杂志5/8/20246乙肝丙肝核酸检测的新平台临床国产试剂现状目前使用的国产试剂能解决的问题，不能解决的问题：HBV试剂盒说明：500～5×107IU/mL较可信的测试范围：104～5×107IU/mL对部分发生HBV病毒突变的病人无法准确检测注：1IU/mL=1copy/mL5/8/20247乙肝丙肝核酸检测的新平台临床内容HBV核酸检测的现状与需要HCV核酸检测的现状与需要罗氏的CAP/CTM能带来什么益处总结5/8/20248乙肝丙肝核酸检测的新平台临床HCVDNA监测在抗病毒治疗中的临床应用HCV病毒感染是可治愈的疾病HCVRNA检测可以有效指导临床用药治疗的终点是核酸检测为阴性（核酸检测可以直接指导停药时机）5/8/20249乙肝丙肝核酸检测的新平台临床慢性HCV治疗方案治疗应答名称描述快速病毒学应答（RVR）4周时未检测到HCVRNA早期病毒学应答（EVR）-完全早期病毒学应答（cEVR）未RVR，但12周时未检测到HCVRNA-部分早期病毒学应答（pEVR）未RVR，12周时HCVRNA拷贝数下降≥2log10，但仍检测到HCVRNA没有应答12周时HCVRNA拷贝数下降<2log10治疗结束（EOT）治疗结束未检测到HCVRNA持续病毒学应答（SVR）治疗结束后24周，未检测到HCVRNA反弹治疗期间曾有HCVRNA低于检出限，但尚未停药即出现HCVRNA重新升高复发治疗期间HCVRNA低于检出限，但治疗结束（停药）后HCVRNA重新升高5/8/202410乙肝丙肝核酸检测的新平台临床慢性HCV治疗方案用药12周早期病毒学反应HCVRNA下降<2logHCV病毒检测阴性HCV病毒检测阳性停药HCV病毒检测阴性治疗到24周HCVRNA检测HCVRNA下降>2log继续治疗至48周继续治疗至24周考虑停药5/8/202411乙肝丙肝核酸检测的新平台临床国产试剂现状目前使用的国产试剂能解决的问题，不能解决的问题：HCV试剂盒说明：500～5×107IU/mL较可信的测试范围：104～5×107IU/mL注：1IU/mL=1copy/mL5/8/202412乙肝丙肝核酸检测的新平台临床内容HBV核酸检测的现状与需要HCV核酸检测的现状与需要罗氏的CAP/CTM能带来什么益处总结5/8/202413乙肝丙肝核酸检测的新平台临床全世界第一台用于体外诊断的全自动荧光定量分子诊断系统真正实现“样品进，结果出”全球安装超过2,000台，国内安装超过40台COBASAmpliPrep/COBASTaqMan系统COBAS

AmpliPrep/COBASTaqMan48®系统COBASAmpliPrep/COBASTaqMan96®系统（带连接系统）COBASAmpliPrep/COBASTaqMan96®系统

（无连接系统）5/8/202414乙肝丙肝核酸检测的新平台临床COBASAmpliPrep仪器简介全自动系统，自动进行核酸提取纯化和PCR反应体系配制基于MGP磁珠分离技术，确保高质量的核酸提取纯化最多72个样品可以同时上机，运行中可连续装载上架，提高工作效率包括耗材、样品、试剂均可以连续上样5/8/202415乙肝丙肝核酸检测的新平台临床DNA或者RNA1.裂解、稳定和去蛋白2.核酸捕获病毒或细胞3.冲洗4.洗脱37°C孵育COBASAmpliPrep仪器

MGP磁珠分离技术室温80°C孵育5/8/202416乙肝丙肝核酸检测的新平台临床取SPU枪头样本管/反应管管盖抓手样本初始体积感应器取试剂钢针CAP机械臂介绍样本管/反应管结构5/8/202417乙肝丙肝核酸检测的新平台临床COBAS

TaqMan/COBASTaqMan48分析仪简介检测通量可达4*24测试独立的24孔热循环仪TaqMan48有2个模块，TaqMan96有4个模块最多可同时进行4个不同的分析检测操作简单，核酸扩增和检测全部自动完成实时定量PCR检测技术，卓越的检测性能，灵敏度高和特异性好，动态范围宽5/8/202418乙肝丙肝核酸检测的新平台临床HBV-DNA定量测试用于药品FDA注册试验通用名商品名

FDA批准日期关键的HBV-DNA测试Interferonalfa-2bα-2b干扰素

INTRON®A1991N/ALamivudine拉米夫定EPIVIR-HBV®1998杂交研究解决方案

1Adefovirdipivoxil阿德福韦酯HEPSERA™2002AmplicorMonitor2Entecavir恩替卡韦BARACLUDE™2005CobasAmplicor3Peginterferonalfa-2a聚乙二醇干扰素α-2aPEGASYS®2005CobasAmplicor4Telbivudine替比夫定TYZEKA™2006CobasAmplicor5Tenofovir替诺福韦VIREAD(HIV)Phase3CobasTaqMan6

INTRON®A(Interferonalfa-2b)[packageinsert].Schering-PloughCorp.Kenilworth,NJ2.EPIVIR-HBV®(Lamivudine)[packageinsert]GlaxoSmithKline,ResearchTrianglepark,NC3.HEPSERA™(Adefovirdipivoxil)[packageinsert]GileadSciences.FosterCity,CA4.Pegasys(Peginterferonalfa-2a)[packageinsert].Hoffmann-LaRocheInc.Nutley,NJ5.TYZEKA™(Telbivudine)[PackageInsert].NovartisPharmaceuticalsCorp.EHanover,NJ6.MarcellinPetal.HepDART2007MeetingAbstract63,Dec9-132007,Lahaina,HI5/8/202419乙肝丙肝核酸检测的新平台临床国外发表的文献Evaluationofinitialvirologicalresponsetoadefoviranddevelopmentofadefovir-resistantmutationsinpatientswithchronichepatitisB.Gallegoetal.,JournalofViralHepatitis,2008,15,392–398Evaluationofanautomated,highlysensitive,real-timePCR-basedassay(COBASAmpliprepTM/COBASTaqManTM)forquantificationofHCVRNA.ChristophSarrazinaetal.,JournalofClinicalVirology,2008,43,162–168COBASAmpliPrep-COBASTaqManHepatitisBVirus(HBV)Test:aNovelAutomatedReal-TimePCRAssayforQuantificationofHBVDNAinPlasma.TizianoAlliceetal.,JournalofClinicalMicrobiology,Mar.2007,p.828–834EvaluationoftheCOBASAmpliPrep-totalnucleicacidsolation-COBASTaqManhepatitisBvirus(HBV)quantitativetestandcomparisontotheVERSANTHBVDNA3.0assay.RonsinCetal.,JournalofClinicalMicrobiology2006vol.44(no.4)ComparisonoftheCOBASTaqManTMHBVTestWiththeCOBASAmplicorMonitorTMTestforMeasurementofHepatitisBVirusDNAinSerum.SimonSiu-ManSumetal.,JournalofMedicalVirology2005,77:486–490HepatitisBvirus(HBV)genotypedeterminationbytheCOBASAmpliPrep/COBASTaqManHBVTest,v2.0inserumandplasmamatrices.GoedelSetal.,JournalofClinicalVirology2009Jul;45(3):232-6ComparisonofVersantHBVDNA3.0andCOBASAmpliPrep-COBASTaqManassaysforhepatitisBDNAquantitation:Possibleclinicalimplications.GARBUGLIAA.R.etal.,Journalofvirologicalmethods2007,vol.146,no1-2,pp.274-280PerformanceoftheCobasAmpliPrep/CobasTaqManReal-TimePCRAssayforHepatitisBVirusDNAQuantification.Ste´phaneChevaliezetal.,JournalofClinical,May2008,p.1716–1723……5/8/202420乙肝丙肝核酸检测的新平台临床HBV的定量检测性能指标国产HBV试剂CAP/CTMHBV灵敏度(LOD)500IU/mL？12IU/mL检测范围104～5×107IU/mL54-1.1×108IU/mL定量方法外标法定量内标法定量其它对部分发生HBV病毒突变的病人无法准确检测涵盖亚型:A-G加强pre-core突变检测注：国产试剂1IU/mL=1copy/mL5/8/202421乙肝丙肝核酸检测的新平台临床HCV的定量检测性能指标国产HCV试剂CAP/CTMHCV灵敏度(LOD)500IU/mL？15IU/mL检测范围104～5×107IU/mL43–6.9×107IU/mL定量方法外标法定量内标法定量其它未知1-6型(能区分0.5log浓度变化)5/8/202422乙肝丙肝核酸检测的新平台临床定量原理

外标法定量（国产试剂）使用一组（4管）外部标准品定量，分别为5×104到5×107IU/mL未考虑各患者血液成分间的差异性对结果的影响5/8/202423乙肝丙肝核酸检测的新平台临床定量原理

内标定量InternalQuantitationStandard(CAP/CTM)内标是已知拷贝数的人工构建核酸，加入每一反应管，与靶核酸竞争扩增，管内定量可提示反应是否存在反应抑制，避免假阴性结果充分考虑管间反应效率的差异，得到可靠精确的结果5/8/202424乙肝丙肝核酸检测的新平台临床COBASAmpliPrep/COBASTaqMan系统封闭样品管输入，封闭PCR管输出标准化，重复性纯化好的核酸主反应液PCR反应体系的配制试剂、样品和耗材的装载上机样品处理单元K-枪头K-管样品试剂5/8/202425乙肝丙肝核酸检测的新平台临床Branchburg生产厂房

罗氏投资超过1.5亿美金，建成全球最大分子诊断试剂生产基地

目前每月生产14万套试剂

5/8/202426乙肝丙肝核酸检测的新平台临床罗氏分子诊断严格的生产和质控体系

为整个行业设定了高标准1.原料严格把关3.GMP生产2.原料质检4.GMP生产6.成品质检5.试剂盒成品7.资料入档5/8/202427乙肝丙肝核酸检测的新平台临床COBASAmpliPrep/COBASTaqMan

全自动荧光定量分子诊断系统的应用抗病毒治疗评估和监测（HBV/HCV），为临床医生和病人提高更准确的结果，指导用药。可针对疑难病例、低病毒载量、长期用药或高端病人肝移植的术前术后监控全国药物、诊断试剂临床评估实验基地CAP室间质评时有与国际接轨的平台，评价更科学基础研究的工具，文章可信度大大增加5/8/202428乙肝丙肝核酸检测的新平台临床国内部分用户省份用户主要检测项目仪器类型北京北京大学人民医院肝炎所（魏来）HBV/HCVCAP/CTM48北京北京大学基础医学院（庄辉）HBV/HCVCAP/CTM48北京北京友谊医院（贾继东）HBV/HCVCAP/CTM48浙江浙江大学附属第一医院（李兰娟）HBV/HCVCAP/CTM48广东南方医院（侯金林）HBV/HCVCAP/CTM96北京北京大学第一医院HBV/HCVCAP/CTM48北京北京协和医院HBV/HCV/HIVCAP/CTM48上海上海瑞金医院（张欣欣）HBV/HCVCAP/CTM48四川华西医科大学附属华西医院（唐红）HBV/HCVCAP/CTM96湖北武汉同济医院HBV/HCVCAP/CTM